趙佳佳，萬(wàn)文軍，楊荷雨，謝敏，劉玲△

奧沙利鉑（Oxaliplatin，OXA）是第3 代鉑類衍生物化療藥物，臨床上用于實(shí)體轉(zhuǎn)移瘤的治療，患者在化療后會(huì)發(fā)生急性神經(jīng)毒性，表現(xiàn)為四肢末梢遠(yuǎn)端感覺(jué)異常和疼痛等，遇冷刺激時(shí)癥狀明顯加重［1］。目前對(duì)于化療導(dǎo)致的神經(jīng)疼痛潛在機(jī)制不明確，且缺乏相應(yīng)的治療藥物。因此，研究化療痛的發(fā)生機(jī)制對(duì)相關(guān)藥物的開(kāi)發(fā)具有必要性。神經(jīng)炎癥與多種病理性疼痛有關(guān)，包括炎性痛、神經(jīng)痛、癌痛及藥物治療引起的疼痛等［2］。組織損傷會(huì)導(dǎo)致炎癥介質(zhì)釋放，直接刺激或誘導(dǎo)中樞敏化，最終導(dǎo)致慢性疼痛的發(fā)生［3］。神經(jīng)炎癥的特點(diǎn)包括膠質(zhì)細(xì)胞活化及炎癥介質(zhì)產(chǎn)生增加。脊髓膠質(zhì)細(xì)胞是促炎細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子（TNF）-α和白細(xì)胞介素（IL）-1β的主要來(lái)源［4］。在關(guān)節(jié)炎性疼痛患者中，中和TNF-α 可阻斷疼痛引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)傷害性活動(dòng)［5］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在炎性痛模型大鼠中，脊髓炎癥信號(hào)激活且促炎細(xì)胞因子表達(dá)增加［6］。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）可作為神經(jīng)調(diào)質(zhì)參與痛覺(jué)調(diào)控［7］。BDNF/酪氨酸激酶受體B（TrkB）信號(hào)參與傷害性信號(hào)傳遞是痛覺(jué)維持的基礎(chǔ)，抑制TrkB可顯著改善動(dòng)物痛覺(jué)行為［8］。為研究BDNF/TrkB信號(hào)在化療痛中的作用，本實(shí)驗(yàn)使用TrkB 蛋白阻斷劑ANA-12 處理化療痛大鼠，檢測(cè)大鼠痛覺(jué)行為學(xué)、脊髓神經(jīng)炎癥及促炎細(xì)胞因子的表達(dá)變化，旨在明確抑制BDNF/TrkB 信號(hào)對(duì)化療痛的緩解作用，并闡明其病理機(jī)制，為病理性疼痛的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 18 只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠購(gòu)自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，6～8 周齡，體質(zhì)量200～250 g，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（鄂）2020-0018。大鼠飼養(yǎng)在室溫為（22±2）℃的環(huán)境中，以12 h/12 h 晝夜節(jié)律變換并提供充足的食物和水。大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法均分為3 組：對(duì)照組、OXA 組及OXA+ANA-12 組。本研究所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均經(jīng)湖北科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)2020-01-900。

1.2 主要試劑 蛋白酶抑制劑、RIPA裂解液、十二烷基苯磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）凝膠快速配制試劑盒、蘇木素-伊紅（HE）染色試劑盒、BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；OXA和ANA-12購(gòu)于Selleck。IL-1β 兔多抗（A1112）、TNF-α 兔多抗（A0277）、Iba1 兔多抗（A1527）、BDNF 兔單抗（A4873）、TrkB 兔單抗（A19832）和phospho-TrkB-Y705 兔多抗（AP0423）購(gòu)于武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司；NF-κB p65兔多抗（AF5006）購(gòu)于Affinity Biosciences。辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG（H+L，AS014）和免疫熒光二抗異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的山羊抗兔IgG（H+L，AS011）購(gòu)于武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司。

1.3 模型建立及藥物處理 OXA溶于5%葡萄糖溶液，OXA組和OXA+ANA-12 組每只大鼠腹腔注射OXA 4 mg/kg，連續(xù)5 d，建立OXA 化療痛大鼠模型。對(duì)照組大鼠注射相同體積的5%葡萄糖溶液?；熗茨Ｐ徒⒑筮M(jìn)行鞘內(nèi)給藥處理。具體方法如下：固定大鼠頭部和背部，露出髂嵴以下腰部區(qū)域進(jìn)行剃毛和皮膚消毒，輕輕按壓確定注射部位，用無(wú)菌微量注射器垂直插入大鼠脊髓腰膨大（L5～6）處，當(dāng)針碰到椎骨時(shí)，將進(jìn)針角度調(diào)整到30°，并將針插入椎間隙。進(jìn)針感覺(jué)到明顯的突破感，且大鼠出現(xiàn)突然的甩尾現(xiàn)象或后腿出現(xiàn)反射性彈跳，表明成功插入椎間隙，緩慢注入藥物，藥物注射完成后滯留1 min取出注射器［9］。OXA+ANA-12組大鼠鞘內(nèi)注射ANA-12（20 g/L），對(duì)照組和OXA 組大鼠鞘內(nèi)注射等體積DMSO+生理鹽水（體積比1∶1）。

1.4 大鼠行為學(xué)檢測(cè)

1.4.1 自發(fā)性縮足反射次數(shù) 將不同組別大鼠置于30 cm×30 cm×30 cm 的透明有機(jī)玻璃盒內(nèi)適應(yīng)30 min，觀察并記錄每5 min內(nèi)大鼠自發(fā)性縮足（或舔爪）反射次數(shù)來(lái)表征大鼠自發(fā)痛，每只記錄3次，取平均值。

1.4.2 50%縮足閾值（PWT）檢測(cè) 各組大鼠給藥處理后0、2、4 和6 h，根據(jù)up-down 法檢測(cè)50%PWT。方法如下：將動(dòng)物置于行為測(cè)試籠內(nèi)，待適應(yīng)30 min后，用Von Frey纖維（觸覺(jué)刺激力0．4～26 g）垂直剌激大鼠左側(cè)后肢足底正中，持續(xù)時(shí)間≤5 s，出現(xiàn)舔足或者抬足等行為視為陽(yáng)性反應(yīng)，反之則為陰性反應(yīng)。記錄6次數(shù)據(jù)后結(jié)束檢測(cè)。根據(jù)公式50%PWT（g）=（10［Xf+Kδ］）/10 000計(jì)算各組大鼠的縮足閾值（Xf為本次行為學(xué)測(cè)試中使用的最后一個(gè)Von Frey 纖維的階數(shù)，K 為痛覺(jué)閾校正系數(shù)，δ為相鄰纖維刺激之間的差異）［10］。

1.5 免疫印跡法檢測(cè)脊髓組織蛋白質(zhì)表達(dá) 行為學(xué)記錄結(jié)束后，每組隨機(jī)抽取3只大鼠，過(guò)量麻醉處死后，分離脊髓組織，置于預(yù)冷的PBS 中。取腰段脊髓置于含有蛋白酶抑制劑的RIPA 裂解液中，在冰上進(jìn)行組織勻漿。收集組織勻漿液于離心管中，4 ℃、12 000 r/min離心15 min。取上清液，加入1/3體積的4×上樣緩沖液，沸水中加熱10 min 變性。使用BCA蛋白分析試劑盒檢測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。SDS-PAGE 分離蛋白質(zhì)樣品，將蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)至PVDF膜上，5%脫脂奶粉室溫封閉l h，一抗4 ℃孵育過(guò)夜。所用一抗如下：TNF-α（1∶1 000）、

IL-1β（1∶1 000）、Iba1（1∶1 000）、BDNF（1∶1 000）、phospho-TrkB-Y705（1∶500）、TrkB（1∶1 000）、NF-κB（1∶1 000）。一抗孵育后洗膜3次，并用二抗室溫孵育1 h，然后用LAS500凝膠成像系統(tǒng)掃描觀察，Image J軟件分析條帶灰度值。

1.6 組織形態(tài)學(xué)檢測(cè) 采用HE 染色法對(duì)脊髓組織切片進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。每組剩余的3只大鼠在深度麻醉后，經(jīng)心臟快速灌流肝素生理鹽水，然后4%多聚甲醛固定。固定成功后取完整腰段脊髓進(jìn)行脫水和石蠟包埋，切成厚度為4 μm的組織切片。選擇形態(tài)完好的組織進(jìn)行脫蠟和HE 染色，蘇木素染色20 min，分化后返藍(lán)，至核顯深紫色，胞漿呈淺藍(lán)色，用伊紅染至胞漿呈紅色，用不同濃度的乙醇透明，中性樹(shù)膠封片，并在顯微鏡下觀察，Image J 軟件分析。脊髓炎癥評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)［11］：正常記0分，腦膜和血管周圍的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)記1分，一個(gè)視野中有1～10個(gè)淋巴細(xì)胞記2分，有11～100個(gè)淋巴細(xì)胞記3分，有100個(gè)以上的淋巴細(xì)胞記4分。

1.7 免疫熒光染色 選取形態(tài)完整的脊髓組織脫蠟處理后進(jìn)行抗原修復(fù)，用3%過(guò)氧化氫孵育10 min，PBS洗滌3次，免疫染色封閉液封閉1 h，加入IL-1β（1∶100）、Iba1（1∶100）、BDNF（1∶100）一抗，4 ℃條件下孵育過(guò)夜。熒光二抗室溫下孵育1 h，用PBS 洗3 次，滴加抗熒光淬滅試劑封片并在熒光顯微鏡下觀察，Image J軟件分析熒光強(qiáng)度。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Graph pad prism 8．0．2 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有數(shù)據(jù)以±s表示。2組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ANA-12對(duì)化療痛大鼠痛覺(jué)行為的影響 行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，OXA 組大鼠機(jī)械縮足閾值顯著降低，自發(fā)縮足次數(shù)顯著增加；與OXA組相比，OXA+ANA-12組大鼠機(jī)械痛閾值顯著增加，自發(fā)縮足次數(shù)顯著降低（P＜0．01），見(jiàn)表1。

Tab.1 Comparison of behavioral test results in rats between the three groups表1 3組大鼠行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較（n=3，±s）

Tab.1 Comparison of behavioral test results in rats between the three groups表1 3組大鼠行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較（n=3，±s）

＊＊P＜0．01；a與對(duì)照組比較，b與OXA組比較，P＜0．01。

組別對(duì)照組OXA組OXA+ANA-12組F PWT（g）15．10±0．26 6．00±0．26a 10．20±0．46ab 533．400＊＊縮足次數(shù)（次）5．33±0．58 25．00±1．00a 6．67±1．15b 407．625＊＊

2.2 ANA-12 對(duì)大鼠脊髓炎癥的影響 脊髓HE 染色結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，OXA 組大鼠脊髓背角炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增加，炎癥評(píng)分升高；與OXA 組相比，OXA＋ANA-12 組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，炎癥評(píng)分下降（P＜0．01），見(jiàn)表2、圖1。免疫熒光結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，OXA 組大鼠脊髓背角圖中綠染的IL-1β 熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)；與OXA 組相比，OXA+ANA-12組圖中綠染的IL-1β熒光強(qiáng)度顯著降低（P＜0．01），見(jiàn)表2、圖2。免疫印跡結(jié)果顯示，OXA 組大鼠脊髓組織中TNF-α 和IL-1β 表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組；而與OXA 組相比，OXA+ANA-12組TNF-α和IL-1β表達(dá)量顯著下調(diào)（P＜0．01），見(jiàn)圖3、表3。

Tab.2 Comparison of inflammatory score and fluorescence intensity of IL-1β in spinal cord of rats between the three groups表2 各組大鼠脊髓炎癥評(píng)分和IL-1β熒光強(qiáng)度比較（n=3，±s）

Tab.2 Comparison of inflammatory score and fluorescence intensity of IL-1β in spinal cord of rats between the three groups表2 各組大鼠脊髓炎癥評(píng)分和IL-1β熒光強(qiáng)度比較（n=3，±s）

＊＊P＜0．01；a與對(duì)照組比較，b與OXA組比較，P＜0．05。

組別對(duì)照組OXA組OXA+ANA-12組F炎癥評(píng)分（分）2．28±0．10 2．94±0．07a 2．35±0．06b 72．300＊＊IL-1β 1．00±0．00 1．64±0．11a 0．77±0．07ab 109．509＊＊

2.3 ANA-12處理對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞激活狀態(tài)的影響 免疫熒光檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Iba1 顯示，與對(duì)照組相比，OXA 組大鼠脊髓背角中綠染的Iba1熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)（P＜0．05）；與OXA 組相比，OXA+ANA-12組大鼠脊髓背角中綠染的Iba1 熒光強(qiáng)度顯著降低（P＜0．01），見(jiàn)圖4、表4。免疫印跡結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，OXA 組大鼠脊髓組織中Iba1蛋白表達(dá)量明顯上調(diào)（P＜0．05）；而與OXA 組相比，OXA+ANA-12 組脊髓組織中Iba1 蛋白表達(dá)量顯著下調(diào)（P＜0．01），見(jiàn)圖5、表4。

Fig．1 Inflammatory cell infiltration of spinal dorsal horn in each group(HE staining,scale bar=20 μm)圖1 各組大鼠脊髓背角炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況（HE染色，標(biāo)尺=20 μm）

Fig．2 Expression of IL-1β in spinal dorsal horn of rats in each group(Immunofluorescent staining,scale bar=20 μm)圖2 各組大鼠脊髓背角IL-1β的表達(dá)（免疫熒光染色，標(biāo)尺=20 μm）

Fig．3 Expression levels of pro-inflammatory cytokines IL-1β and TNF-α in spinal cord of rats in each group detected by Western blot assay圖3 Western blot檢測(cè)各組大鼠脊髓組織促炎細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α表達(dá)水平

Tab.3 Comparison of expression levels of IL-1β and TNF-α in spinal cord of rats between the three groups表3 各組大鼠脊髓組織中IL-1β和TNF-α表達(dá)水平比較（n=3，±s）

Tab.3 Comparison of expression levels of IL-1β and TNF-α in spinal cord of rats between the three groups表3 各組大鼠脊髓組織中IL-1β和TNF-α表達(dá)水平比較（n=3，±s）

＊＊P＜0．01；a與對(duì)照組比較，b與OXA組比較，P＜0．01。

組別對(duì)照組OXA組OXA+ANA-12組F IL-1β 1．00±0．00 2．37±0．06a 1．57±0．09ab 355．028＊＊TNF-α 1．00±0．00 2．04±0．14a 1．58±0．16ab 54．769＊＊

Fig．4 Expressions of Iba1 in spinal dorsal horn of rats in each group(Immunofluorescent staining,scale bar=20 μm)圖4 各組大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Iba1的表達(dá)（免疫熒光染色，標(biāo)尺=20 μm）

Fig．5 Expression levels of microglial marker Iba1 in spinal cord of rats in each group detected by Western blot assay圖5 Western blot檢測(cè)各組大鼠脊髓組織小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Iba1表達(dá)水平

Tab.4 Comparison of expression levels of Iba1 in spinal cord of rats between the three groups表4 各組大鼠脊髓組織中Iba1表達(dá)水平比較（n=3，±s）

Tab.4 Comparison of expression levels of Iba1 in spinal cord of rats between the three groups表4 各組大鼠脊髓組織中Iba1表達(dá)水平比較（n=3，±s）

＊＊P＜0．01；a與對(duì)照組比較，b與OXA組比較，P＜0．05。

組別對(duì)照組OXA組OXA+ANA-12組F熒光強(qiáng)度1．00±0．00 1．71±0．04a 1．11±0．09b 144．794＊＊蛋白表達(dá)水平1．00±0．00 1．40±0．05a 0．88±0．06ab 99．441＊＊

2.4 ANA-12 處理對(duì)BDNF/TrkB 信號(hào)活性的影響 與對(duì)照組相比，OXA 組大鼠脊髓組織中綠染的BDNF 熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)；與OXA 組相比，OXA+ANA-12 組脊髓組織中綠染的BDNF 熒光強(qiáng)度顯著降低（P＜0．01），見(jiàn)圖6、表5。免疫印跡檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，OXA大鼠脊髓組織中BDNF和磷酸化TrkB（Y705）表達(dá)水平上調(diào)（P＜0．05）；而與OXA 組相比，ANA-12 處理后BDNF 和磷酸化TrkB表達(dá)水平均顯著降低（P＜0．01），見(jiàn)圖7、表5。

2.5 ANA-12 處理對(duì)NF-κB 信號(hào)活性的影響 免疫印跡檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組（1．00±0．00）相比，OXA 組脊髓組織中NF-κB 表達(dá)水平（1．52±0．02）增高（P＜0．01）；與OXA 組相比，OXA+ANA-12 組NFκB表達(dá)水平（0．91±0．03）降低（n=3，F(xiàn)=1 202．680，P＜0．01），見(jiàn)圖8。

Fig．6 Expression of BDNF in spinal dorsal horn of rats in each group(Immunofluorescent staining,scale bar=20 μm)圖6 各組大鼠脊髓背角BDNF的表達(dá)（免疫熒光染色，標(biāo)尺=20 μm）

Fig．7 Expression levels of BDNF,phosphorylated TrkB(Y705)and total TrkB in spinal cord of rats in each group detected by Western blot assay圖7 Western blot檢測(cè)各組大鼠脊髓組織中BDNF、磷酸化TrkB（Y705）和總的TrkB表達(dá)水平

Tab.5 Comparison of expression levels of BDNF,phosphorylated TrkB(Y705)and total TrkB in spinal cord between three groups of rats表5 各組大鼠脊髓組織中BDNF、磷酸化TrkB（Y705）和總的TrkB表達(dá)水平的作用比較（n=3，±s）

Tab.5 Comparison of expression levels of BDNF,phosphorylated TrkB(Y705)and total TrkB in spinal cord between three groups of rats表5 各組大鼠脊髓組織中BDNF、磷酸化TrkB（Y705）和總的TrkB表達(dá)水平的作用比較（n=3，±s）

＊＊P＜0．01；a與對(duì)照組比較，b與OXA組比較，P＜0．05。

組別對(duì)照組OXA組OXA+ANA-12組F pTrkB/TrkB 1．00±0．00 1．70±0．03a 0．88±0．05ab 466．694＊＊熒光強(qiáng)度1．00±0．00 1．60±0．12a 0．70±0．02ab 122．231＊＊BDNF 1．00±0．00 1．42±0．04a 1．10±0．06ab 99．464＊＊

Fig．8 Expression levels of NF-κB in spinal cord of rats detected by Western blot assay圖8 Western blot檢測(cè)各組大鼠脊髓組織中NF-κB表達(dá)水平

3 討論

3.1 OXA 過(guò)量使用誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥 化療是治療癌癥的一種常用的有效手段之一。第3代鉑類抗癌藥物OXA 可直接結(jié)合并交聯(lián)于DNA 上，抑制細(xì)胞DNA 的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，臨床上用于治療各類惡性腫瘤［12］。然而，當(dāng)使用累積劑量達(dá)到300 mg/m2時(shí)會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，主要表現(xiàn)為神經(jīng)損傷及病理性疼痛［13］。過(guò)量OXA誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷會(huì)造成外周傷害性信號(hào)上調(diào)，從而導(dǎo)致脊髓神經(jīng)突觸可塑性增強(qiáng)，進(jìn)而使神經(jīng)炎癥增加［14］。神經(jīng)炎癥表現(xiàn)為小膠質(zhì)細(xì)胞激活、促炎細(xì)胞因子水平增加、外周白細(xì)胞浸潤(rùn)和神經(jīng)組織損傷，其中激活的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生高水平的促炎細(xì)胞因子［15］。小膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的巨噬樣細(xì)胞，可快速響應(yīng)外界傷害性變化，在受到外界傷害后幾分鐘內(nèi)會(huì)發(fā)生快速的形態(tài)變化（如胞體增大和突起縮短），并分泌多種細(xì)胞因子（包括TNF-α 和IL-1β），參與疼痛的發(fā)生和維持［16］。據(jù)此，本研究中OXA 大鼠脊髓炎性因子表達(dá)上調(diào)的主要原因是外周傷害性信號(hào)誘導(dǎo)的脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。

3.2 抑制BDNF 信號(hào)緩解大鼠炎癥痛 BDNF 具有多種生物學(xué)功能，包括調(diào)節(jié)神經(jīng)元存活、生長(zhǎng)和分化并維持突觸可塑性以及在傷害性信號(hào)傳遞途徑中發(fā)揮調(diào)控作用［17］。多種痛覺(jué)模型證明，BDNF 在痛覺(jué)傳導(dǎo)區(qū)域過(guò)度表達(dá)。BDNF 是小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮作用的關(guān)鍵信號(hào)分子。研究表明，外周損傷可誘發(fā)脊髓釋放BDNF，從而介導(dǎo)炎癥及疼痛［18］。用TrkB 抗體或者TrkB-Fc 阻斷BDNF-TrkB 信號(hào)可有效防止小膠質(zhì)細(xì)胞誘發(fā)的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏；siRNA敲低BDNF可緩解小膠質(zhì)細(xì)胞誘發(fā)的疼痛行為［19］。炎癥誘導(dǎo)的痛覺(jué)過(guò)敏研究顯示，促炎刺激可上調(diào)脊髓背角BDNF/TrkB 通路；而阻斷BDNF/TrkB 信號(hào)通路可降低炎性疼痛進(jìn)展［20］。NF-κB 是炎癥激活的主要因子之一，BDNF 與TrkB 受體結(jié)合后能夠誘導(dǎo)NF-κB的表達(dá)。BDNF通過(guò)激活激酶Ikkα和Ikkβ誘導(dǎo)NFκB表達(dá)，同時(shí)這些激酶可以磷酸化并降解NF-κB的抑制單位IκBα，從而導(dǎo)致NF-κB 釋放以及p50/p65二聚體的形成，p50/p65 二聚體與DNA 結(jié)合并誘導(dǎo)與神經(jīng)元增殖、存活和炎癥反應(yīng)相關(guān)的基因表達(dá)［21］。NF-κB介導(dǎo)的促炎信號(hào)通路通過(guò)促進(jìn)促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的表達(dá)而參與炎癥反應(yīng)。在骨癌痛大鼠模型中，脊髓BDNF表達(dá)增強(qiáng)，阻斷其信號(hào)可減弱熱痛覺(jué)過(guò)敏和機(jī)械性痛覺(jué)超敏并抑制下游NF-κB通路［22］。在本研究中，OXA 大鼠脊髓BDNF/TrkB 信號(hào)活性上調(diào)并伴隨NF-κB 表達(dá)上調(diào)，ANA-12 可顯著減少上述蛋白的表達(dá)并緩解OXA 誘導(dǎo)的痛覺(jué)行為，表明抑制BDNF/TrkB 信號(hào)可通過(guò)降低OXA誘導(dǎo)的炎癥信號(hào)而緩解化療痛。

綜上所述，TrkB 受體拮抗劑ANA-12 對(duì)OXA 誘導(dǎo)的痛覺(jué)行為具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，主要是通過(guò)降低小膠質(zhì)細(xì)胞的激活、抑制BDNF/TrkB 信號(hào)下游NF-κB介導(dǎo)的炎癥信號(hào)，從而減少脊髓炎癥，發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng)。