李筱玲，鄧寒霜，石志輝，曾興瓊，林向軍

(1.商洛學(xué)院 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院，陜西 商洛 726000；2.陜西秦嶺特色生物資源產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，陜西 商洛 726000；3.湖南藥圣堂中藥科技有限公司，湖南 長沙 410120；4.陜西天士力植物藥業(yè)有限責(zé)任公司，陜西 商洛 726000)

丹參是唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge.)的根及根莖，具有通經(jīng)止痛、活血祛瘀、涼血消癰、清心除煩等功效[1]，主要含丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、隱丹參酮等脂溶性成分與丹參酚酸A、丹參酚酸B、原兒茶醛等水溶性酚酸類化合物[2]?，F(xiàn)代研究表明，丹參具有保護(hù)心肌、改善血液循環(huán)、促進(jìn)傷口愈合、保護(hù)肝細(xì)胞修復(fù)和再生、抗腫瘤等多種藥理作用[3-5]。傳統(tǒng)加工工藝對丹參的處理方式為在原產(chǎn)地采挖鮮藥材后水洗、去雜、干燥，即得丹參原藥材；藥材經(jīng)物流運(yùn)輸至飲片加工廠，再經(jīng)水處理軟化后切片、干燥，即得丹參飲片。重復(fù)的干燥、水處理過程，不但耗時耗力還會造成有效成分損失[6]。采用產(chǎn)地加工-炮制一體技術(shù)生產(chǎn)中藥飲片是解決上述問題的有效方法。在傳統(tǒng)中藥生產(chǎn)中，產(chǎn)地加工與炮制分屬兩個行業(yè)、兩個階段。產(chǎn)地初加工并無國家法定強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)，加工方法不一，產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，而飲片生產(chǎn)按《藥品管理法》規(guī)定，已納入藥品生產(chǎn)范疇?！耙惑w化”生產(chǎn)，將中藥材產(chǎn)地初加工與飲片生產(chǎn)合為一體，使得中藥產(chǎn)地加工有法可依，可從源頭控制中藥質(zhì)量，增強(qiáng)中藥飲片的可追溯性，有助于打破行業(yè)壁壘，排除中藥材作偽摻假的空間，更符合中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展趨勢[7-8]。陜西省藥監(jiān)局于2021年3月印發(fā)了《陜西省規(guī)范中藥材產(chǎn)地趁鮮加工工作指導(dǎo)意見》，明確指出要加強(qiáng)監(jiān)管，解決中藥材加工過程中因“二次浸潤”、切制造成成分流失和損耗增大的難題，且節(jié)省工序，縮短干燥時間，節(jié)省人力物力，也可減少藥材貯藏、運(yùn)輸、切片過程中因變質(zhì)造成的損耗。本研究采用多指標(biāo)綜合評價體系探究陜西商洛大宗道地藥材丹參的產(chǎn)地加工-炮制一體化生產(chǎn)技術(shù)，以期為推動“一體化”技術(shù)在中藥生產(chǎn)領(lǐng)域的發(fā)展奠定基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 藥材

新鮮丹參藥材采挖自陜西天士力植物藥業(yè)有限責(zé)任公司藥源基地，經(jīng)商洛學(xué)院生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院執(zhí)業(yè)藥師李筱玲鑒定為唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge.)的根及根莖。

1.2 儀器與試劑

LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津公司，配置為在線脫氣機(jī)、四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器)；SX-2.5-10型箱式電阻爐(北京科偉永興儀器有限公司)；ST-802型藥材切片機(jī)(瑞安賽特機(jī)電有限公司)；S-114型電子天平(丹佛儀器北京有限公司)；丹參酮ⅡA對照品(純度≥99%，中國食品藥品檢定研究院，批號201817)，丹酚酸B對照品(純度≥99%，中國食品藥品檢定研究院，批號：201803)；色譜純乙腈(美國Fisher公司)等。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測方法

2.1.1 丹參酮ⅡA含量 (1)溶液制備與色譜分析條件。供試品溶液、對照品溶液的制備方法，以及色譜分析條件參照2020年版《中華人民共和國藥典》(一部)丹參含量測定項下規(guī)定，得對照品溶液濃度為37.0 μg·mL-1。

(2)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10 μL進(jìn)樣分析，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以丹參酮ⅡA濃度為橫坐標(biāo)(X)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線得到丹參酮ⅡA的回歸方程：Y=59 208X+2 719.9，R2=0.999 9，線性范圍為7.4～37.0 μg·mL-1。

2.1.2 丹酚酸B含量 (1)溶液制備與色譜分析條件。供試品溶液、對照品溶液的制備方法，以及色譜分析條件參照2020年版《中華人民共和國藥典》(一部)丹參含量測定項下規(guī)定，得對照品溶液濃度為176.0 μg·mL-1。

(2)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10 μL進(jìn)樣分析，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以丹參酮ⅡA濃度為橫坐標(biāo)(X)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線得到丹參酮B的回歸方程：Y=4 459.8X-1 460.2，R2=0.999 9，線性范圍為35.2～176.0 μg·mL-1。丹參飲片含量測定HPLC見圖1。

注：a.丹參酮對照品；b.丹酸酸B對照品；c.丹參飲片中的丹參酮；d.丹參飲片中的丹酸酸B；1.丹參酮ⅡA；2.丹酚酸B。

2.1.3 水分 取待測丹參飲片樣品粉末(過二號藥典標(biāo)準(zhǔn)篩)約4.0 g，精密稱定質(zhì)量，按照2020年版《中華人民共和國藥典》(四部)通則0832下第二法(烘干法)測定。

2.1.5 灰分 取待測丹參飲片樣品粉末(過二號藥典標(biāo)準(zhǔn)篩)約5.0 g，精密稱定質(zhì)量，照藥典(2020年版 四部)通則2302規(guī)定，分別測定總灰分與酸不溶性灰分。

2.2 綜合評分方法

以水溶性浸出物、醇溶性浸出物、丹參酮類成分，以及丹酚酸B含量為評分指標(biāo)，丹參酮類和丹酚酸B含量各占40分，水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量各占10分；各評分指標(biāo)以含量最高的試驗處理為滿分，計算各處理得分，各項目評分之和為該處理最終得分；各試驗處理所得飲片性狀、含水量等指標(biāo)均應(yīng)符合2020年版《中華人民共和國藥典》相關(guān)要求。綜合評分=丹參酮類量×40+丹酚酸B量×40+水溶性浸出物量×10+醇溶性浸出物量×10。

2.3 丹參飲片生產(chǎn)工藝

2.3.1 傳統(tǒng)方法 產(chǎn)地加工：取鮮丹參，去泥沙，干燥，即得丹參原藥材。飲片炮制：取原藥材，除去雜質(zhì)與殘莖，搶水洗，潤透，軟化至適宜時，切厚片(3 mm)，干燥，即得丹參飲片。用傳統(tǒng)方法加工5組丹參飲片樣品，各項檢測項目結(jié)果見表1。

表1 傳統(tǒng)加工丹參的有效成分分析 (%，n=5)

由表1可知，各項檢測指標(biāo)RSD值均小于4.5%，說明試驗所用丹參藥材質(zhì)量較穩(wěn)定，樣品均一性良好。

2.3.2 產(chǎn)地加工-炮制一體化工藝 取鮮丹參，去泥沙，干燥至七成干，搶水洗，除去蘆頭、殘莖，切厚片(3 mm)，干燥，即得丹參飲片。技術(shù)路線見圖2。

圖2 丹參飲片生產(chǎn)技術(shù)路線

由圖2可知，采用“一體化”工藝生產(chǎn)丹參飲片，減少了重復(fù)的水處理及干燥環(huán)節(jié)，可提高工作效率，節(jié)約生產(chǎn)成本。

2.4 一體化生產(chǎn)最優(yōu)工藝研究

2.4.1 單因素試驗 (1)藥材含水量。取新鮮丹參藥材，自然晾曬，每天檢測一次含水量，在藥材含水量分別為69%、55%、46%、33%、26%時，取適量樣品照“2.3.2”中工藝路線制備丹參飲片，按“2.1”中規(guī)定檢測各項目指標(biāo)，按“2.2”中方法進(jìn)行綜合評分，結(jié)果見表2、圖3。

表2 不同含水量鮮藥切片所得飲片檢測結(jié)果 (%)

圖3 不同含水量鮮藥材切片

由圖3可以看出，含水量較高(>46%)的鮮丹參雖易于切制，但切后易褐變，斷面發(fā)黑且干燥后飲片皺縮，性狀不佳；含水量較低(26%～33%)的鮮丹參較易切制，切后斷面基本不變色，干燥后切面平整，有較明顯菊花心。傳統(tǒng)工藝加工的丹參飲片切面平整，顏色略深，菊花心明顯。由表2可知，鮮藥材含水量對切制后丹參飲片有效成分含量影響較小，綜合考慮外觀、性狀因素，鮮切丹參藥材含水量應(yīng)控制在26%左右，即生產(chǎn)中自然干燥約5～6 d所指的“七成干”。

2017年，黑龍江省委1號文件和實行河長制的意見、生態(tài)文明建設(shè)的相關(guān)文件，均將實行最嚴(yán)格水資源管理制度作為重要內(nèi)容。省政府召開全省視頻會議，對推進(jìn)最嚴(yán)格水資源管理制度做出全面安排；市縣黨委政府進(jìn)一步強(qiáng)化對實行最嚴(yán)格水資源管理制度的組織領(lǐng)導(dǎo)和政策支持，多個市縣政府召開了常務(wù)會議、辦公會議，研究推進(jìn)最嚴(yán)格水資源管理制度，政府負(fù)責(zé)、水利牽頭、部門協(xié)調(diào)配合的機(jī)制進(jìn)一步得到加強(qiáng)。

(2)烘干溫度。取含水量為26%的丹參藥材5份，照“2.3.2”中工藝路線制備丹參飲片，按“2.1”中規(guī)定檢測各項目指標(biāo)，按“2.2”中方法進(jìn)行綜合評分，結(jié)果見表3。

由表3可知，60 ℃下烘干所得丹參飲片品質(zhì)最佳，表明過高溫度會造成藥材中有效成分損失；過低的溫度可能會造成干燥不充分而影響含量。

表3 不同烘干溫度生產(chǎn)所得飲片檢測結(jié)果 (%)

(3)干燥時間。取含水量為26%的丹參藥材5份，固定烘干溫度為60 ℃，照“2.3.2”中工藝路線制備丹參飲片，按“2.1”中規(guī)定檢測各項目指標(biāo)，按“2.2”中方法進(jìn)行綜合評分，結(jié)果見表4。

表4 不同烘干時間生產(chǎn)所得飲片檢測結(jié)果 (%)

由表4可知，烘干5 h所得丹參飲片綜合評分最高，表明干燥時間過長不但造成能源浪費(fèi)，還會破壞有效成分含量；干燥時間太短則會因干燥不充分而影響品質(zhì)。

2.4.2 正交試驗 在單因素試驗基礎(chǔ)上，以鮮藥材含水量、干燥溫度、干燥時間為考察因素，進(jìn)一步優(yōu)化丹參產(chǎn)地加工-炮制一體化生產(chǎn)工藝條件。因素水平設(shè)計及試驗結(jié)果見表5、表6，方差分析見表7，各處理所得飲片性狀見圖4。

表5 正交試驗因素水平設(shè)計及結(jié)果

表6 正交試驗不同處理組各項目檢測結(jié)果 (%)

由圖4可以看出，含水量為38%的鮮藥切制所得飲片顏色發(fā)黑，不符合《中華人民共和國藥典》丹參飲片性狀要求；含水量16%的藥材切制所得飲片，碎片多，成片率低，損耗大；含水量25%的飲片外觀好，成片率高。由表5、表6可知，極差值A(chǔ)>B>C，即鮮藥材含水量對丹參飲片品質(zhì)影響最大，其次為烘干溫度，烘干時間影響最小；從表7的方差分析結(jié)果也可得出上述結(jié)果，但3個影響因素均不顯著。綜上，所得最優(yōu)組合為A1B2C2，即鮮藥含水量25%、烘干溫度60 ℃、烘干時間5 h，鮮切丹參藥材含水量應(yīng)控制在25%左右，即生產(chǎn)中自然干燥約5～6 d所指的“七成干”。

表7 方差分析

圖4 正交試驗各處理組所得飲片性狀

2.4.3 驗證實驗 取同一批新鮮丹參，以上述最優(yōu)工藝參數(shù)，照“2.3.2”中工藝路線平行加工5份丹參飲片，按“2.1”中規(guī)定檢測各項目指標(biāo)，按“2.2”中方法進(jìn)行綜合評分，結(jié)果見表8。

表8 驗證試驗結(jié)果 (%,n=5)

由表8、表5及表1可知，驗證試驗結(jié)果與正交試驗最優(yōu)組合綜合評分結(jié)果接近且顯著高于以傳統(tǒng)方法加工所得飲片，表明本研究所得最優(yōu)工藝參數(shù)穩(wěn)定、可靠。為進(jìn)一步驗證試驗結(jié)果，課題組從市場上收集了5批丹參飲片，采用相同的檢測方法檢測各項指標(biāo)，進(jìn)行對比，結(jié)果見表9。

表9 市售丹參飲片各有效成分 (%)

由于無法確定市售丹參飲片原藥材來源，因此僅記錄了市售飲片各項目檢測結(jié)果，不進(jìn)行綜合評分。對比表8、表9可以看出，采用本研究所得一體化加工技術(shù)生產(chǎn)所得丹參飲片品質(zhì)優(yōu)于部分市售丹參飲片。盡管造成此結(jié)果的原因可能是由于原藥材的品質(zhì)不同，但也可證明本工藝具有一定的推廣應(yīng)用價值。

3 結(jié)論與討論

中藥材的產(chǎn)地初加工與中藥飲片生產(chǎn)脫節(jié)，是長期困擾中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要問題之一。實施一體化生產(chǎn)，可有效減少生產(chǎn)加工環(huán)節(jié)、提升中藥飲片質(zhì)量，還可增加中藥的可追溯性，利于中藥質(zhì)量控制[9-11]。本研究探討了丹參產(chǎn)地加工-炮制一體化生產(chǎn)技術(shù)，得到其最優(yōu)加工工藝為鮮丹參采挖后除去泥沙，干燥至七成干(含水量25%)左右，搶水洗凈，除去雜質(zhì)，切厚片(3 mm)，于溫度60 ℃下，烘干5 h。由于本研究所用丹參藥材灰分指標(biāo)明顯低于《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，因而在后續(xù)實驗處理中未再檢測灰分。課題組還發(fā)現(xiàn)，以傳統(tǒng)方法生產(chǎn)丹參藥材時，由于丹參根莖粗細(xì)不一，大規(guī)模烘干不易控制干燥時間。如干燥時間過短，則粗根難以干透；如使粗根干透，則細(xì)根會烤焦、變黃甚至發(fā)黑。在實際生產(chǎn)中，多是烘至七、八成干，然后堆垛覆蓋油布使其自然干燥。因此存在干燥時間長、對生產(chǎn)經(jīng)驗要求高且易受天氣影響等不足。采用一體化生產(chǎn)工藝后，省略了中藥材生產(chǎn)環(huán)節(jié)，可有效避免上述情況出現(xiàn)。受試驗條件影響，本研究還存在不足之處，如鮮藥材含量水不易控制。今后可進(jìn)一步改進(jìn)方法，擴(kuò)大試驗量，為丹參產(chǎn)地加工-飲片炮制一體化生產(chǎn)技術(shù)的應(yīng)用推廣奠定基礎(chǔ)。