王麗娜 張勤 宋懷珠 李明月 呂毅

作者單位：450018 河南鄭州，河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心

輸血具有增加血液攜氧能力、減輕貧血癥狀、改善凝血功能、防止休克等作用，是臨床治療缺血性疾病的常用手段［1］。但人類的血型系統(tǒng)非常復(fù)雜，血型抗體可分為規(guī)則抗體和不規(guī)則抗體，規(guī)則抗體是指符合蘭德斯坦納（Landsteiner）命名法則的血型抗體，抗A、抗B 和抗AB 以外的其他血型抗體是不規(guī)則抗體［2］。這些抗體一般由于免疫性疾病、妊娠、輸血等刺激產(chǎn)生，可以導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)、交叉配血不合及輸注無效果等［3］。本研究通過對(duì)12 216 例臨床擬輸血患者不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行回顧和分析，旨在探討不規(guī)則抗體陽性樣本的分布特征及處理方法，從而保證患者輸血安全，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象及樣本采集 選擇2020 年7 月—2022 年6 月于本院申請輸血或手術(shù)備血的12 216 例患者作為研究對(duì)象，其中男性6 210例，女性6 006例；年齡1～96 歲，平均年齡（52.35±1.32）歲；既往有輸血史患者4 512 例，有妊娠史患者3 819 例。采集患者血樣2～4 mL，置于乙二胺四乙酸二鉀抗凝管。

1.2 儀器與試劑 TD-A 血型血清學(xué)用離心機(jī)、FYQ 型免疫微柱孵育器均由長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司提供；KA-2200 血型血清學(xué)專用離心機(jī)由日本久保田株式會(huì)社提供?？谷饲虻鞍讬z測卡由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞由長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，抗球蛋白試劑、譜細(xì)胞、各種抗體血清均由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供，凝聚胺試劑由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 研究方法

1.3.1 不規(guī)則抗體篩查 采用微柱凝膠卡式技術(shù)，具體操作：取50 μL 濃度為0.8%的篩檢紅細(xì)胞，加入標(biāo)記好的相應(yīng)微柱凝膠試劑卡中，采集50 μL 患者血漿，加入相應(yīng)微柱凝膠試劑卡中。于37 ℃條件下孵育15 min，使用血型血清學(xué)專用離心機(jī)（離心半徑為10 mm）,第一階段轉(zhuǎn)速為900 r/min 離心2 min，第二階段轉(zhuǎn)速為1 500 r/min 離心3 min。紅細(xì)胞沉淀于凝膠卡底部判定為陰性，紅細(xì)胞呈凝集和懸浮狀態(tài)則判定為陽性。

1.3.2 不規(guī)則抗體鑒定 對(duì)不規(guī)則抗體篩查結(jié)果為陽性的標(biāo)本，采用鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法分別進(jìn)行檢測，按文獻(xiàn)［4］方法操作。對(duì)照篩檢細(xì)胞的格局，找出適宜方法采用譜細(xì)胞進(jìn)行特異性抗體的鑒定。

1.4 倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)本院倫理審批（審批號(hào)：20220827），所有檢測均獲得過患者或家屬的知情同意。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本分布 12 216 份擬輸血患者標(biāo)本中共檢出不規(guī)則抗體陽性72 份，陽性率為0.6%。Rh 系統(tǒng)抗體40 例，其中抗E 抗體24 例，占比為33.3%（24/72）；抗D 抗體3 例，占比為4.2%（3/72）；抗Ec 7 例,占比為9.7%（7/72）；抗C 6 例，占比為8.3%（6/72）；MNSs 系統(tǒng)12 例，其中抗M抗體11 例，占比為15.3%（11/72）；抗S 抗體1例，占比為1.4%（1/72）；Kidd 系統(tǒng)（抗JKa）2 例，占比為2.8%（2/72）；Lewis 系統(tǒng)（抗Lea）10 例，占比為13.9%（10/72）；自身加同種抗體2 例，占比為2.8%（2/72）；冷抗體1 例；未檢測出特異性抗體5 例。見表1。

表1 12 216 例擬輸血患者在不同血型系統(tǒng)中的不規(guī)則抗體陽性樣本分布

2.2 不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本在不同人群中的分布 12 216 例不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)患者中，女性陽性檢出率明顯高于男性〔1.00%（60/6 006）比0.19%（12/6 210）〕，有輸血史患者檢出率明顯高于無輸血史患者〔1.02%（46/4 512）比0.34%（26/7 704）〕；女性患者中有妊娠史患者檢出率明顯高于無妊娠史患者〔1.52%（58/3 819）比0.09%（2/2 187）〕，妊娠兩次以上患者明顯高于妊娠兩次以下有妊娠史患者〔2.16%（52/2 412）比0.43%（6/1 407）〕；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 不同人群的不規(guī)則抗體陽性檢出率比較

2.3 不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本在不同科室的分布 產(chǎn)科不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本占比最高，為54.2%（39/72），高于其他科室之和〔45.8%（33/72）〕，血液內(nèi)科不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本占比為12.5%（9/72）；外科不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本占比為12.5%（9/72），婦科不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本占比為11.1%（8/72），其余科室不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本占比為9.7%（7/72）。見表3。

表3 72 份不規(guī)則抗體陽性樣本在不同科室中的分布

2.4 不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性樣本在不同疾病患者中的分布 72 例不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性患者中，孕產(chǎn)婦占比為65.3%（47/72），血液系統(tǒng)疾病患者占比為12.5%（9/72），外科疾病患者占比為12.5%（9/72），內(nèi)科疾病患者占比為4.2%（3/72），其他疾病患者占比為5.6%（4/72）。見表4。

表4 72 份不規(guī)則抗體陽性樣本在不同疾病類型患者中的分布

2.5 患者輸血效果評(píng)價(jià) 本研究72 例不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性患者中，有10 例患者通過篩選出相應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞成分進(jìn)行輸注，輸血后臨床觀察均無輸血不良反應(yīng)發(fā)生，患者貧血癥狀改善，評(píng)估輸血有效率為100%。

3 討論

目前臨床輸血已成為現(xiàn)代疾病治療中一種比較常見的方法，在進(jìn)行輸血治療前，臨床醫(yī)師對(duì)輸血可能傳播的疾病采取了多種措施進(jìn)行預(yù)防，但由于血液制品的復(fù)雜性，以及患者因病情需要反復(fù)輸血，而移植、共用針具、注射免疫原性物質(zhì)、女性妊娠等因素均可引起針對(duì)紅細(xì)胞抗原的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體，導(dǎo)致交叉配血不相合及輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。有文獻(xiàn)報(bào)道，抗體多數(shù)在初次免疫后2～6 個(gè)月產(chǎn)生，再次免疫后21 d 內(nèi)抗體水平達(dá)到高峰［5］，不規(guī)則抗體陽性患者再次輸注含有相應(yīng)抗原的血液制品時(shí)，會(huì)刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)生反應(yīng)，輕者出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹、寒顫，嚴(yán)重者可引起溶血性輸血反應(yīng)。

本研究對(duì)12 216 例擬輸血患者進(jìn)行不規(guī)則抗體試驗(yàn)篩查，結(jié)果顯示陽性檢出率為0.6%，與文獻(xiàn)報(bào)道中0.3%～2.0%的陽性率相符［6］。72 例不規(guī)則抗體試驗(yàn)陽性患者中以Rh 血型系統(tǒng)較多，占比為55.6%，低于侯玉濤等［7］報(bào)道的62.2%，其中以抗E抗體為主，占比為33.3%，與國內(nèi)抗E 高于抗D 的相關(guān)報(bào)道一致。分析此現(xiàn)象的主要原因是E 抗原在漢族人群中呈陰性的比例約為70%［8］，而D 抗原檢測在臨床上已列入常規(guī)檢測項(xiàng)目，卻未對(duì)E 抗原進(jìn)行常規(guī)檢測，建議在鑒定出不規(guī)則抗體為Rh 系統(tǒng)后，先篩選出獻(xiàn)血者的Rh 系統(tǒng)其他抗原類型，然后選擇相應(yīng)抗原陰性的懸浮紅細(xì)胞、濾白紅細(xì)胞或洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行不同方法學(xué)交叉配血。排在第二位的是MNSs 系統(tǒng)，占16.7%，主要為抗M 抗體，此抗體在患者低溫狀態(tài)下可以激活補(bǔ)體，易出現(xiàn)溶血反應(yīng)，應(yīng)選擇M 抗原陰性的紅細(xì)胞輸注，避免出現(xiàn)不良反應(yīng)［9］。其次是Lewis 系統(tǒng)，占13.9%，此類抗體自然生成，多為IgM 類抗體，但也有抗Lea為IgG 性質(zhì)的報(bào)道，具有臨床意義［10］。同時(shí)檢測出抗JKa抗體2 例，JKa抗體能結(jié)合補(bǔ)體，發(fā)生溶血，且在人體內(nèi)產(chǎn)生后消失很快，極易漏檢并引易起急慢性溶血性輸血反應(yīng)［11］。

本研究檢出的72 例不規(guī)則抗體陽性患者中，女性數(shù)量明顯高于男性數(shù)量，且女性患者中有妊娠史的占相當(dāng)大部分。對(duì)妊娠患者而言，胎兒可以刺激母體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，提示女性患者在妊娠過程中容易受到免疫刺激產(chǎn)生不規(guī)則抗體［12］。不規(guī)則抗體陽性患者中，血液系統(tǒng)疾病和外科疾病患者占比僅次于孕產(chǎn)期疾病患者，血液內(nèi)科患者疾病主要為自身免疫性溶血性貧血（autoimmune hemolytic anemia，AIHA）、骨髓增生異常綜合征、急慢性白血病等，患者均存在慢性失血，需反復(fù)輸血，受血者接觸非己抗原的概率會(huì)增大［13］。而外科患者因外科手術(shù)出血、輸血，刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫性抗體，因此有輸血史和妊娠史的患者在輸注血液前更需要進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)。

分析檢出7 例自身抗體聯(lián)合同種抗體。自身抗體能掩蓋同種抗體，可影響血型鑒定和交叉配血結(jié)果，此類患者較難獲得相合的血液。首先要排除自身抗體的干擾檢測血型，盡可能篩選出同種抗體的特異性，若篩選無特異性，應(yīng)選擇血型相同的多份血液制品盲配，選擇交叉配血反應(yīng)比自身對(duì)照弱的血液進(jìn)行輸注［14］。其中2 例患者篩選出無對(duì)應(yīng)抗原的血液進(jìn)行交叉配血，并選擇凝集強(qiáng)度弱于自身抗體的血液發(fā)往臨床，無輸血不良反應(yīng)，并評(píng)估輸血有效。

綜上所述，對(duì)擬輸血患者應(yīng)了解其輸血史和現(xiàn)病史，對(duì)女性患者應(yīng)了解妊娠史，在輸血前需要進(jìn)行不規(guī)則抗體試驗(yàn)檢測，選擇相應(yīng)抗原陰性的血液，并聯(lián)合應(yīng)用多種檢測方法進(jìn)行交叉配血，最大程度上保證患者安全輸血［15-16］。因患者體內(nèi)的抗體會(huì)隨著時(shí)間推移而逐漸減少，1 年之內(nèi)30%～35%的抗體檢測不到，10 年后約有50%的抗體檢測不到［17］。這些患者由于抗體水平降低，再次檢測配血時(shí)容易漏檢［18］，若輸血后激發(fā)再次免疫，會(huì)增大發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)［19］，建議輸血科收集和記錄不規(guī)則抗體陽性患者的信息資料，方便及時(shí)篩選合適的血液成分，既節(jié)約患者等待輸血的時(shí)間，也減少輸血不良反應(yīng)和輸注紅細(xì)胞無效的發(fā)生，保證臨床輸血的安全有效。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突