于溪 陳鐘鳴 鄭佳玲

作者單位：鹽城市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 鹽城 224001

腹瀉屬于臨床一類常見消化道疾病，指的是每日排便在3 次以上，排糞量在200 g/d 以上，糞便質(zhì)地稀薄，含水量在85%以上的情況[1]。結(jié)合病程長短能劃分成急性、慢性腹瀉兩類，其中前者主要原因?yàn)槟c道感染，后者原因比較復(fù)雜，多為結(jié)腸或者小腸疾病引起[2]。腹瀉發(fā)生后未及時(shí)進(jìn)行診斷和治療，能影響機(jī)體的營養(yǎng)狀態(tài)，導(dǎo)致腸神經(jīng)紊亂，對胃腸激素分泌產(chǎn)生不利影響[3]。腹瀉在臨床上易和其他的腸道疾病相混淆，如腹瀉型腸易激綜合征（diarrhea type of irritable bowel syndrome，D-IBS）以及大腸癌等，因此，積極探索出特異性檢測指標(biāo)對鑒別診斷腹瀉和制定正確治療方案有著重要意義。糞便鈣衛(wèi)蛋白（faecal calprotein，F(xiàn)CP）屬于一類炎癥活動(dòng)性的標(biāo)志物，來源于巨噬細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞，能和鈣離子相結(jié)合，于糞便當(dāng)中水平較為穩(wěn)定[4]。以往有關(guān)FCP 的研究多集中在炎癥性腸病的活動(dòng)性判斷中，有關(guān)其在腹瀉鑒別診斷中的作用臨床報(bào)道較少。為此，文章對2021 年6 月—2022 年5 月鹽城市第一人民醫(yī)院就診的單純腹瀉患者總共600 例的臨床資料開展回顧性分析，總結(jié)FCP 檢測用于腹瀉鑒別診斷中的意義，旨在為鑒別診斷腹瀉和制定后續(xù)治療方案提供參考依據(jù)，具體內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年6 月—2022 年5 月在鹽城市第一人民醫(yī)院就診的600 例單純腹瀉患者設(shè)為腹瀉組，其中包含男性356 例，女性244 例；年齡范圍在18 ～65 歲，平均（40.35±5.36）歲；文化程度：初中及以下365 例，高中及以上235 例。選取同時(shí)間段鹽城市第一人民醫(yī)院收治的30 例大腸癌患者設(shè)為大腸癌組，其中包含男性18 例，女性12 例；年齡范圍在18 ～64 歲，平均（40.26±5.48）歲；文化程度：初中及以下18 例，高中及以上12 例。30 例D-IBS 患者設(shè)為D-IBS 組，其中包含男性19 例，女性11 例；年齡范圍在20 ～60 歲，平均（40.76±5.02）歲；文化程度：初中或以下17 例，高中或以上13 例。30 例健康體檢者設(shè)為對照組，其中包含男性18例，女性12 例；年齡范圍在21 ～68 歲，平均（41.02±5.36）歲；文化程度：初中及以下19 例，高中及以上11 例。各組性別、年齡及例數(shù)等一般資料相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），數(shù)據(jù)之間具有可比性。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，同時(shí)取得研究對象知情同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）單純腹瀉組均結(jié)合X 線鋇劑灌腸或者腸鏡確診為單純腹瀉，大腸癌、D-IBS 組均經(jīng)臨床檢查及病理學(xué)檢查確診，對照組為經(jīng)體檢無任何異常者。（2）年齡不低于18 歲，依從性佳。（3）臨床資料無任何缺失。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在其他臟器嚴(yán)重者。（2）存在消化道腫瘤者。（3）存在認(rèn)知障礙、精神病等無法配合完成檢查者。（4）長期采取非甾體抗炎藥者。（5）處在妊娠或者哺乳階段女性。（6）酗酒和藥物成癮者。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 南京美寧康誠生物科技有限公司生產(chǎn)的FCP 測定試劑盒、樣本采集器以及Mokosensor-A300 膠體金免疫層析分析儀。

1.2.2 檢測方法 所有患者均接受FCP 檢測，方法如下：在結(jié)腸鏡檢查1 周以內(nèi)或者術(shù)前1 周以內(nèi)進(jìn)行10 ～20 g糞便標(biāo)本留取后送往檢測，對照組同樣留取10 ～20 g 糞便標(biāo)本后送檢，采取專用采集管進(jìn)行標(biāo)本采集，若為水樣便，采取采集器吸管吸取10 μL，后插入2.5 mL 標(biāo)本稀釋液內(nèi)混勻。若為其他類型糞便，將采集器采便棒插入糞便至刻度線，輕輕旋轉(zhuǎn)采集棒蘸取糞便，后插入樣本稀釋液混勻，在1 h 之內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室內(nèi)同時(shí)放在2 ～8℃的冰箱中保存，在48 h 以內(nèi)集中抽提，檢測前將留存的糞便放在室溫狀態(tài)下平衡解凍，采取一次性取樣環(huán)挑取50 ～100 mg 的糞便，放入帶螺口帽聚丙烯管15 mL，將取樣環(huán)一同放入后稱重，結(jié)合質(zhì)量/容積為1/49 的比例將抽提液加入，放在上海熙揚(yáng)儀器有限公司生產(chǎn)的YMT-2500 型多管渦旋混合器內(nèi)充分搖動(dòng)30 min，將樣本混勻之后選取1.5 mL 放在2 mL 的離心管內(nèi)，經(jīng)北京漢達(dá)森機(jī)械技術(shù)有限公司生產(chǎn)的MIKRO220 型微量離心機(jī)開展5 min 離心處理，后選擇1 mL 上清液放在-50℃的冰箱內(nèi)備用。采取瑞士Bnhl-mann 公司提供FCP 檢測試劑盒和酶聯(lián)免疫吸附方法開展檢測，操作者嚴(yán)格依據(jù)說明書中有關(guān)內(nèi)容開展操作。將提取液放在室溫狀態(tài)下平衡解凍，采取1 ∶50 的比例稀釋，后放于室溫下孵育，采取常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附方法。測定方法：設(shè)置酶標(biāo)儀成450 nm 開展檢測，標(biāo)準(zhǔn)品包含5 個(gè)不同的質(zhì)量濃度，分別為600、300、100、30、10 μg/g，總共開展樣本檢測2 次，濃度最高標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值是2.397 和2.284，采取四參數(shù)法進(jìn)行計(jì)算獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，采取1 ∶50 稀釋樣本若超出了標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍但未被檢測出，應(yīng)采取緩沖液開展進(jìn)一步稀釋處理，并重新檢測，直到檢測出結(jié)果為止，稀釋的倍數(shù)計(jì)算到最終結(jié)果當(dāng)中，單次樣本檢測需要重新建立起當(dāng)次標(biāo)準(zhǔn)曲線。撕開檢測卡外包裝鋁箔袋，取出檢測卡待用，滴入60 μL 稀釋過的樣本至檢測卡加樣孔中，開始反應(yīng)同時(shí)開始計(jì)時(shí)10 min。結(jié)束計(jì)時(shí)后，采取膠體金免疫層析分析儀對測定結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)束計(jì)時(shí)后應(yīng)在5 min 內(nèi)讀取結(jié)果，5 min 內(nèi)未讀取結(jié)果評定成無效，需要重新開展試驗(yàn)。本方法測定的FCP 可報(bào)告范圍在30 ～600 μg/g，當(dāng)結(jié)果低于線性范圍下限時(shí)結(jié)果報(bào)告為＜30 μg/g，當(dāng)結(jié)果超過線性范圍上限時(shí)結(jié)果報(bào)告為＞600 μg/g，檢測顯示FCP 水平＞50 μg/g 代表檢測結(jié)果為陽性[5]。

1.3 觀察指標(biāo)

比較單純腹瀉組與大腸癌組、D-IBS 組和對照組的FCP 水平及陽性率差異。FCP 陽性率=FCP 陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

經(jīng)SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以 （±s）代表，行t檢驗(yàn)，多組間計(jì)量資料比較采取方差分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

單純腹瀉組的FCP 水平及陽性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于大腸癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.572、χ2=4.082，P＜0.05），單純腹瀉組的FCP 水平及陽性率高于D-IBS 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=20.386、χ2=205.242，P＜0.05）；單純腹瀉組的FCP水平及陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（t=20.783、χ2=233.454，P＜0.05），見表1。

表1 四組FCP 水平及陽性率相比結(jié)果

3 討論

腹瀉是多病原以及多種因素所致的腸道疾病，主要表現(xiàn)是排便次數(shù)，及頻率增加、大便不成形等，會(huì)使患者產(chǎn)生程度不一的水電解質(zhì)和酸堿失衡，進(jìn)而影響其身體健康[6-7]。臨床治療期間，多以繼續(xù)進(jìn)食、維持營養(yǎng)以及合理調(diào)配為主要原則，同時(shí)迅速糾正患者的水電解質(zhì)紊亂等，從而緩解有關(guān)癥狀[8]。腹瀉癥狀也可出現(xiàn)在其他腸道疾病患者中，如腹瀉型腸易激綜合征、大腸癌、消化性潰瘍以及克羅恩病等，不同疾病的治療方式存在較大差異。因此，做好腹瀉和其他腸道疾病的鑒別診斷工作意義重大。

以往臨床多結(jié)合臨床癥狀、發(fā)病季節(jié)、病史以及大便性狀等方面開展判斷，但診斷準(zhǔn)確度不高，會(huì)直接影響到后續(xù)治療方案制定，存在一定的局限性，需要積極探索出其他更為高效的診斷指標(biāo)[9]。FCP 的來源主要為中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，可經(jīng)鱉合鋅離子而具備耐熱性，并和鈣離子相結(jié)合以抗蛋白酶活性，于腸腔、外界環(huán)境當(dāng)中能長期維持在一個(gè)相對穩(wěn)定的狀態(tài)，不被酶、細(xì)菌破壞，不會(huì)隨著糞便降解而被水解，樣本放置于室溫下5 d 不會(huì)導(dǎo)致其濃度顯著丟失[10]。據(jù)有關(guān)研究顯示，糞便內(nèi)FCP 含量高達(dá)血漿內(nèi)FCP 含量的6 倍左右[11]，檢測糞便中的炎癥標(biāo)志物較血清標(biāo)志物可以更敏感反映出消化道的炎癥程度。除此之外，F(xiàn)CP 具備調(diào)節(jié)免疫、抗微生物有關(guān)活性、炎癥反應(yīng)中調(diào)節(jié)蛋白等生物保護(hù)功能[12]。

舒利瓊等[13]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)CP 在克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎鑒別診斷中具有較高價(jià)值。葛秋霞等[14]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)CP 在炎癥性腸病、功能性腸病區(qū)分中的準(zhǔn)確度較高。但有關(guān)FCP 在腹瀉鑒別診斷中的研究較少。本文研究結(jié)果顯示：單純腹瀉組的FCP 水平及陽性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于大腸癌組、D-IBS 組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這說明FCP 能協(xié)助臨床鑒別診斷單純腹瀉和大腸癌、D-IBS 等疾病。單純腹瀉患者FCP 水平上升的原因可能是病原體到達(dá)腸道后于小腸內(nèi)不斷繁殖，同時(shí)黏附在黏膜中釋放出致病性的腸毒素，進(jìn)而在腸道內(nèi)引發(fā)分泌性反應(yīng)，最終造成腹瀉發(fā)生，且借助其侵襲能力能直接入侵腸上皮細(xì)胞，導(dǎo)致黏膜處在充血和水腫狀態(tài)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞浸潤以及炎性介質(zhì)滲出和潰瘍產(chǎn)生，中性粒細(xì)胞經(jīng)病變黏膜不斷前移到腸腔中促使FCP 水平上升，由糞便內(nèi)排出體外。D-IBS 是腸功能紊亂使得腸道動(dòng)力功能出現(xiàn)障礙，進(jìn)而引發(fā)的腹瀉，無腸黏膜炎癥以及組織受損，不存在中性粒細(xì)胞浸潤，不會(huì)導(dǎo)致FCP 水平上升。大腸癌患者腫瘤附近存在炎癥細(xì)胞浸潤，也能觀察到糞便FCP 水平上升的情況存在。筆者認(rèn)為，F(xiàn)CP 檢測只能作為單純腹瀉、大腸癌、D-IBS 等疾病鑒別診斷中的一項(xiàng)輔助指標(biāo)，疾病確診仍需依賴于X 線鋇劑灌腸或者腸鏡、病理學(xué)檢查等。既往學(xué)者將FCP 水平設(shè)定成50 μg/g 當(dāng)作臨界值以評定炎癥腸病患者活動(dòng)性，具備較高的敏感度和特異度[15]。本次研究中將FCP 的陽性臨界值同樣設(shè)定成50 μg/g。文章中體現(xiàn)了《成人急性感染性腹瀉診療專家共識》[16]的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，F(xiàn)CP 檢測作為一類無創(chuàng)、迅速且簡便的檢測方式，能為臨床診斷單純腹瀉和大腸癌、D-IBS 等疾病提供重要的參考依據(jù)，有助于臨床醫(yī)師制定后續(xù)治療方案。但此次研究中依舊還有不足之處存在，如文中未對FCP 在腹瀉和克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎鑒別診斷中的作用開展分析，未對FCP 的診斷效能如準(zhǔn)確度、敏感度和特異度等指標(biāo)進(jìn)行分析，且未對FCP鑒別診斷不同病原所致腹瀉的價(jià)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得出的結(jié)果依舊有局限性，還需在日后研究中加以完善，進(jìn)一步證實(shí)上述結(jié)論，指導(dǎo)臨床實(shí)踐。