胡 賀，陳 鵬，萬 兵，袁 化

1.江蘇福潤德科技有限公司，南京 210036；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，南京 210036；3.大連海洋大學(xué)，遼寧 大連 116023

異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）是運用雌核發(fā)育技術(shù)經(jīng)人工培育的品種，具有生長快、個體大、食性廣和抗逆性強等特點，其因良好的性狀優(yōu)勢已成為池塘養(yǎng)殖的優(yōu)質(zhì)品種之一。隨著養(yǎng)殖規(guī)模和養(yǎng)殖密度的加大，通過提供優(yōu)質(zhì)的飼料蛋白，提高氨基酸利用率，充分發(fā)揮生產(chǎn)性能，已成為餌料營養(yǎng)研究的主要任務(wù)。近年來，隨著對營養(yǎng)小肽代謝特點以及對養(yǎng)殖動物營養(yǎng)作用和生理功能的深入了解[1-3]，營養(yǎng)小肽已成為綠色飼料添加劑的首選，應(yīng)用和發(fā)展前景越來越受到重視[4-5]。

試驗選擇江蘇省東臺市弶港鎮(zhèn)養(yǎng)殖區(qū)，以養(yǎng)殖異育銀鯽為試驗動物。在基礎(chǔ)飼料中添加營養(yǎng)小肽，經(jīng)投喂養(yǎng)殖128 d 后，隨機抽樣檢測。通過觀察營養(yǎng)小肽對異育銀鯽血清生化指標(biāo)的影響以及腸道（前腸）和肝組織的病理情況，探討營養(yǎng)小肽作為飼料添加劑對養(yǎng)殖異育銀鯽的影響，為營養(yǎng)小肽作為飼料添加劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 基礎(chǔ)飼料和營養(yǎng)小肽

基礎(chǔ)飼料為混養(yǎng)魚配合飼料，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)為Q/320924 YCHD 001-2021。粗蛋白≥28.0%，粗脂肪≥2.5%，賴氨酸≥1.35%，水分≤12.2%，粗纖維≤11.5%，粗灰分≤15.0%，總磷≥0.7%。

營養(yǎng)小肽為江蘇福潤德科技有限公司產(chǎn)品，商品名為天樂泰（SBP）。以豆科植物為原料，選用四聯(lián)菌分階段式密閉深層發(fā)酵，通過生物發(fā)酵和物理處理等工藝消除抗?fàn)I養(yǎng)因子，同時保留豐富的不飽和脂肪酸，并充分分解釋放不同肽段的營養(yǎng)小肽類產(chǎn)品。部分檢測指標(biāo)含量：粗纖維0.9%，粗脂肪1.5%，粗蛋白4.3%，酸溶蛋白（占總蛋白）33.5%，水蘇糖和棉子糖均未檢出，活菌數(shù)乳桿菌22.6×107CFU/g，酵母1.02×107CFU/g，芽孢桿菌105CFU/g，pH 3.5。

1.2 養(yǎng)殖與管理

試驗在江蘇省東臺市弶港鎮(zhèn)養(yǎng)殖區(qū)進(jìn)行，試驗設(shè)2 個試驗組和1 個對照組，放養(yǎng)魚種的平均體重為50 g/尾。苗種放養(yǎng)7 d 后開始投喂飼料，對照組投喂基礎(chǔ)飼料，試驗組投喂添加天樂泰的飼料，天樂泰添加量為基礎(chǔ)飼料重量的2.0%。每天投餌前用已靜置24 h 的自來水將天樂泰溶解，充分混合后，在基礎(chǔ)飼料中均勻噴涂，待表面干燥后投喂。投餌量按魚體重2.0%～3.0%計算，每天投餌4 次，投喂時間為07:00、10:00、13:30 和16:30。養(yǎng)殖期間水溫26～33 ℃，溶氧3.5～8.3 mg/L，pH 8.5～8.8。

投餌養(yǎng)殖128 d 后，試驗組和對照組隨機取樣異育銀鯽10 尾，進(jìn)行體重、體長和體高檢測，觀察異育銀鯽的生長情況（表1）。

表1 添加營養(yǎng)小肽養(yǎng)殖128 d 異育銀鯽生長情況 （n=10）

1.3 血清制備

試驗組和對照組隨機取樣異育銀鯽5 尾，用一次性注射器尾靜脈取血（無抗凝劑），4 ℃靜置24 h后，2 500 r/min、-5 ℃離心5 min，取上層血清，-20 ℃保存，備用。

生化檢測儀為羅氏cobas C311 全自動生化分析儀，檢測指標(biāo)為總蛋白（TP2）、白蛋白（ALB2）、堿性磷酸酶（ALP2L）、脂肪酶(LIPC)、血糖（GLUC3）和尿素氮（U-BUN）。

1.4 組織病理

試驗組和對照組隨機取樣異育銀鯽5 尾，進(jìn)行解剖觀察，分別取前腸和肝組織。前腸以腸道開口處為起點至第1 個回折處之間的部分，切取0.5～1.0 cm 組織。肝組織取肝臟中間部分，修切0.5 cm×0.5 cm 組織。純凈水沖洗，浸泡4.0%甲醛溶液，固定24 h 后更換甲醛溶液（4.0%），備用。

病理切片采用美國賽默飛公司全自動組織脫水機（Xcelsior AS），染色機（Gemini AS），包埋機（Histo STAS）和切片機（HM 325）完成。切片厚度4～5 μm，HE 染色，中性樹膠封片，Olympus 光學(xué)顯微鏡觀察，顯微照片記錄。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)以Excel 整理，“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Means±SD）”表示。采用GraphPad prism 8.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析和多重比較，P＜0.01 差異極顯著，P＞0.05 無顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清生化指標(biāo)

在基礎(chǔ)飼料中添加營養(yǎng)小肽（天樂泰）投喂異育銀鯽128 d 后，試驗Ⅰ組和Ⅱ組血清總蛋白分別為（37.86±1.09）、（36.21±1.66） g/L，試驗組間比較無顯著差異，試驗組與對照組差異極顯著。試驗Ⅰ組、Ⅱ組和對照組的血清白蛋白分別為（16.20±0.32）、（15.08±0.30）和（12.08±1.18） g/L，試驗組與對照組比較均有極顯著差異。試驗Ⅰ組和Ⅱ組血清血糖分別為（2.60±1.03）、（2.90±0.44）mmol/L，對照組（7.46±1.97） mmol/L，試驗組間比較無顯著差異，試驗組與對照組比較差異極顯著。試驗Ⅰ組和Ⅱ組分別與對照組比較，血清堿性磷酸酶、血清脂肪酶、血清尿素氮均無顯著差異（表2）。

表2 營養(yǎng)小肽對異育銀鯽血清生化指標(biāo)的影響 （n=5）

2.2 腸組織病理觀察

解剖觀察，試驗組和對照組腸道緊連接食道之后，管徑逐漸變細(xì)，前、中、后腸分界不明顯，呈粉色。

組織病理觀察：腸道組織各層顯示清晰，由內(nèi)向外依次為黏膜層（A）、黏膜下層（B）、肌層（C）和漿膜層（D）。黏膜層是消化管的最內(nèi)層，有許多向腸腔凸出的腸絨毛組成；肌層有內(nèi)層環(huán)肌（F）和外層縱?。‥）2 層平滑肌組成；腸的外表面均覆1 層漿膜（圖1-A）。

試驗組2 層平滑肌結(jié)構(gòu)排列緊密，內(nèi)層環(huán)形肌層較為發(fā)達(dá)，外層縱行肌層則比較?。▓D1-A）。黏膜下層與肌層之間的基底層結(jié)構(gòu)清晰，明顯較厚且致密；腸絨毛結(jié)構(gòu)清晰，分叉明顯；黏膜層的上皮層由單層柱狀上皮細(xì)胞（M）構(gòu)成，其間散布杯狀細(xì)胞（N），上皮層下的固有層（L）清晰可見（圖1-B）。

對照組內(nèi)層環(huán)肌（f）結(jié)構(gòu)排列疏松，基底膜結(jié)構(gòu)清晰（h），基膜層和內(nèi)環(huán)肌層厚度比試驗組薄。腸絨毛稀疏（a），腸絨毛上單層柱狀上皮細(xì)胞（m）排列緊密，杯狀細(xì)胞極少，固有層（l）清晰（圖1-C）。

2.3 肝組織病理觀察

解剖觀察，試驗組和對照組肝臟大小形態(tài)正常，呈鮮亮的暗紅色，緊貼腸系膜上，膽囊與肝臟相連。

試驗組肝組織結(jié)構(gòu)較清晰，肝細(xì)胞形狀較規(guī)則（A），呈略帶圓形的多角形，細(xì)胞界限分明。細(xì)胞核1個，核仁清晰，位于細(xì)胞中間。細(xì)胞質(zhì)豐富，HE 紅染。肝細(xì)胞圍繞中央靜（C）脈呈放射狀排列，成串形成肝索樣結(jié)構(gòu)，每2～3 層肝細(xì)胞間可見肝血竇（B），中央靜脈和血竇中可見血細(xì)胞（圖2-A、圖2-B）。對照組肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列比試驗組密集，肝細(xì)胞大小略小于試驗組（圖2-C）。

3 討 論

3.1 營養(yǎng)小肽對異育銀鯽血清生化指標(biāo)的影響

魚類的血液承擔(dān)著能量運輸、生理調(diào)節(jié)和防御的功能[6]，血清總蛋白是反映動物的營養(yǎng)水平和動物對蛋白質(zhì)的消化程度以及魚的健康狀況的指標(biāo)[7-8]。尾崎久雄[7]認(rèn)為硬骨魚類血清總蛋白的含量為30～50 g/L。血清白蛋白由肝實質(zhì)細(xì)胞合成，具有維持血漿滲透壓和pH 的平衡，作為轉(zhuǎn)運蛋白調(diào)節(jié)被運輸物質(zhì)的生理作用。當(dāng)營養(yǎng)狀況良好時，血清蛋白維持在較高的水平[9]。試驗Ⅰ和Ⅱ組總蛋白分別為（37.86±1.09）、（36.21±1.66） g/L，白蛋白分別為（16.20±0.32）、（15.08±0.30）g/L，血清總蛋白和白蛋白檢測值均高于對照組，而且具有極顯著差異。因此，營養(yǎng)小肽（天樂泰）的添加在一定程度上促進(jìn)了養(yǎng)殖異育銀鯽血清蛋白質(zhì)的合成，魚體表現(xiàn)出良好的營養(yǎng)狀況。

血清堿性磷酸酶主要來源于肝臟、腸道和骨骼等組織，是動物生長和生存的重要調(diào)控酶，其活性在一定程度上反映了動物的生長速度[10-11]。試驗組血清堿性磷酸酶均高于對照組，結(jié)合異育銀鯽形體指標(biāo)檢測結(jié)果（表1），與羅莉等[11]堿性磷酸酶活性與動物的生長呈正相關(guān)理論相符合。

魚類的肝胰腺是生成脂肪酶的主要器官[12]，脂肪酶的活性與餌料中的脂肪含量呈正相關(guān)[13-16]。脂肪含量高的食物會增加脂肪酶活性，而攝食脂肪含量低的食物，則脂肪酶的活性也隨之降低。試驗組血清脂肪酶平均值略高于對照組，多重比較顯示無顯著差異，反映了異育銀鯽的脂質(zhì)代謝狀況和健康水平。

血糖是反映糖代謝和機體組織細(xì)胞功能狀態(tài)的重要指標(biāo)，同時也反映餌料和營養(yǎng)的合理性[17]。在基礎(chǔ)飼料中添加2%天樂泰后，試驗組血糖分別為（2.60±1.03）、（2.90±0.44） mmol/L，對照組為（7.46±1.97） mmol/L，多重比較顯示有極顯著差異。研究認(rèn)為，低蛋白的飼料中碳水化合物的比例相對較高，養(yǎng)殖動物為攝食足量的蛋白質(zhì)而加大攝食量，間接增加了碳水化合物的攝入量，導(dǎo)致血糖水平的升高[19-20]。因此，血糖含量隨飼料蛋白質(zhì)含量的升高而降低。

血清中尿素氮水平反映了肝臟和腎臟功能，以及體內(nèi)蛋白質(zhì)分解和沉積情況[21-22]。試驗結(jié)果顯示，試驗組血清尿素氮平均值與對照組相同。試驗結(jié)果與李清[23]的研究結(jié)果一致。營養(yǎng)小肽（天樂泰）具有促進(jìn)氨基酸的吸收、提高蛋白質(zhì)沉積率的作用。

3.2 營養(yǎng)小肽對異育銀鯽腸組織的影響

魚類腸道具有容納、運輸、消化食物和吸收營養(yǎng)的功能。腸道組織結(jié)構(gòu)主要分4 層：黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜層。腸道組織結(jié)構(gòu)的差異主要表現(xiàn)在肌層和黏膜層。黏膜皺襞的高低和疏密，上皮柱狀細(xì)胞和杯狀細(xì)胞數(shù)量與消化吸收能力密切相關(guān)[24]。

異育銀鯽攝食添加營養(yǎng)小肽的餌料128 d 后，在一定程度上對異育銀鯽的腸道結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。試驗組內(nèi)層環(huán)形肌層較為發(fā)達(dá)，結(jié)構(gòu)排列緊密，而對照組內(nèi)層環(huán)肌結(jié)構(gòu)排列疏松。環(huán)肌的波狀收縮形成腸的蠕動，縱肌的舒縮形成腸的擺動。因此，試驗組前腸的腸壁收縮力有助于食物的混勻和運輸。試驗組黏膜層的上皮層單層柱狀上皮細(xì)胞豐富，其間散布少量杯狀細(xì)胞，腸絨毛結(jié)構(gòu)清晰，分叉明顯。對照組單層柱狀上皮細(xì)胞排列緊密，杯狀細(xì)胞極少，腸絨毛稀疏。杯狀細(xì)胞能分泌黏液和消化酶，柱狀上皮細(xì)胞具有吸收作用，黏膜褶的增多，表現(xiàn)出較大吸收面積，有助于食物的消化和營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

黏膜下層由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，是腸黏膜的支柱，同時有利于腸壁相應(yīng)的擴張，將營養(yǎng)物質(zhì)由此輸入血液并到達(dá)全身[25]。試驗組較對照組黏膜下層中度增厚，細(xì)胞成分增多，還有待于進(jìn)一步研究探討。

3.3 營養(yǎng)小肽對異育銀鯽肝組織的影響

魚類的肝臟不僅是魚體代謝器官，也是魚體最大的腺體，是功能多樣化的新陳代謝器官之一。試驗組異育銀鯽肝臟表面被漿膜，大小形態(tài)正常，呈鮮亮的暗紅色。試驗組肝胰腺組織結(jié)構(gòu)較清晰，密集形成網(wǎng)狀，肝細(xì)胞呈略圓形的多角形，細(xì)胞界限分明。細(xì)胞核1 個，核仁清晰，位于細(xì)胞中間。細(xì)胞質(zhì)豐富，HE 紅染。肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，成串形成肝索樣結(jié)構(gòu)，每2～3 層肝細(xì)胞間可見肝血竇，中央靜脈和血竇中可見血細(xì)胞。在飼料中添加營養(yǎng)小肽有助于養(yǎng)殖異育銀鯽營養(yǎng)的吸收和糖元合成，增加新陳代謝和免疫抗病能力。

通過對異育銀鯽血清生化指標(biāo)檢測、腸和肝組織病理觀察發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼料中添加2%營養(yǎng)小肽（天樂泰），有助于食物的消化，促進(jìn)了氨基酸的吸收，提高了蛋白質(zhì)的合成，反映出異育銀鯽良好營養(yǎng)狀況和健康水平。營養(yǎng)小肽作為養(yǎng)殖魚類飼料添加劑，具有良好的促生長效果、無殘留、無抗藥性和無污染的優(yōu)勢，是作為綠色飼料添加劑的首選。