熊明彪，王 博，楊紹平，王乾鑫，張 恒，孫博文，紀(jì)丁愈，楊遠(yuǎn)祥*

(1.四川水利創(chuàng)新發(fā)展研究院，成都 611230；2.四川水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院，成都 611230；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，成都 611130；4.四川工商職業(yè)技術(shù)學(xué)院，成都 611830)

我國耕地土壤重金屬等污染物土壤點(diǎn)位超標(biāo)率達(dá)19.4%[1]重金屬污染形勢嚴(yán)峻。重金屬污染具有難降解、持續(xù)時間長、隱蔽性與滯后性等特點(diǎn)[2]，它們可以通過食物鏈進(jìn)入人體，對人體健康產(chǎn)生不良影響[3]。同時，土壤重金屬污染也嚴(yán)重阻礙我國的糧食生產(chǎn)[4]。因此急需有效控制土壤中重金屬，尤其是鉛、鎘進(jìn)入蔬菜或農(nóng)作物可食用部分或降低土壤中鉛、鎘含量，達(dá)到有效提高食品安全、保證人體健康。油菜是我國廣泛種植的一種油料作物，種植面積約6.6×106hm2，產(chǎn)量占世界的20%[5-6]，但我國食用油自給率只有38.1%，不能滿足國家發(fā)展需求。鑒于油菜作物對國家發(fā)展的重要性，為了提升油菜產(chǎn)量與食用油自給率，我國需要重視油菜的種植，尤其是在重金屬污染土壤中如何保證產(chǎn)量與安全值得探討與研究。植物修復(fù)技術(shù)作為土壤重金屬修復(fù)的關(guān)鍵技術(shù)之一，而超富集植物為該技術(shù)的核心載體[7]。蜀葵作為一種超富集植物，對土壤重金屬具有良好的修復(fù)效果，有研究表明蜀葵對鉛、鎘元素存在較強(qiáng)富集的特性[8-9]。據(jù)研究，在重金屬污染條件下，不同植物混作會影響混種植物對重金屬的積累[10]。在牛膝菊與生菜混作[11]、花卉與葡萄混種的試驗(yàn)[12]中，富集植物與作物混種能有效降低作物對重金屬的富集。

目前國內(nèi)外有關(guān)油菜與蜀葵混作對土壤重金屬修復(fù)效果影響、對油菜品質(zhì)影響的研究鮮見報道。鑒此，本研究選取全國廣泛種植的農(nóng)作物-油菜、四川地區(qū)原產(chǎn)花卉-蜀葵為材料，通過盆栽模擬重金屬污染的試驗(yàn)，探討在鉛、鎘污染條件下，農(nóng)作物與富集植物混作對油菜品質(zhì)、重金屬殘留的影響。希望能為土壤中鎘、鉛污染治理、農(nóng)作物品質(zhì)提升等提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試植物：油菜種子“德5油33號”、蜀葵種子購于成都市溫江區(qū)農(nóng)資公司。

供試土壤：取自四川農(nóng)業(yè)大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研發(fā)基地的水稻土。其基本理化性狀： pH 6.76、有機(jī)質(zhì)31.68g/kg、全氮3.53g/kg、全磷0.32g/kg、全鉀17.41g/kg、鎘0.06mg/kg、鉛45.26mg/kg、堿解氮194.00mg/kg、速效磷6.18mg/kg、速效鉀91.17mg/kg。

供試重金屬：鉛、鎘均為分析純(AR)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計

試驗(yàn)于2019年12月至2020年5月進(jìn)行，地點(diǎn)在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研發(fā)基地的人工大棚(103°51′39.72″E，30°42′21.87″N)，大棚內(nèi)通風(fēng)和透光良好。試驗(yàn)前，在稻田中取土樣，先將田塊均一分為4小塊，每小塊采取蛇形布設(shè)五點(diǎn)取樣進(jìn)行供試土樣的采集。每一個取樣點(diǎn)，先剝?nèi)ネ恋乇韺与s物，再取0～20cm的表土約20kg。將所有取樣點(diǎn)土樣混合均勻，去除石塊、根系等雜物后，將土壤裝入規(guī)格80cm×40cm×30cm的方形塑料盆，每個塑料盆的裝土需要達(dá)到約30kg。根據(jù)《土壤環(huán)境質(zhì)量 農(nóng)用地土壤污染風(fēng)險管控標(biāo)準(zhǔn)(試行)》(GB15618-2018)，每盆供試土壤鉛、鎘含量設(shè)置為700mg/kg、3.0mg/kg，為使供試土壤鉛、鎘含量達(dá)到要求值，根據(jù)計算稱取足量的Pb(NO3)2、CdCl2充分溶于去離子水中，然后將該溶液與土樣充分混勻、浸泡、靜置1個月。處理完成后備用。選用重量0.1kg的油菜、蜀葵種子，先晾曬2d，然后用水浸種10h，最后用0.1%～1%濃度的過氧化氫浸泡5h左右進(jìn)行消毒處理。采用普通培養(yǎng)皿發(fā)芽法，置于培養(yǎng)箱內(nèi)催芽后轉(zhuǎn)移至試驗(yàn)大棚無污染土壤中進(jìn)行幼苗培養(yǎng)約1個月。在培養(yǎng)出的幼苗中挑選大小形態(tài)類似的油菜、蜀葵幼苗，將其移栽至土壤重金屬處理后的塑料盆中，培養(yǎng)180d，培養(yǎng)過程中保證土壤含水量保持在70%左右。

每個塑料盆中種植的植株數(shù)量為8株，其中的蜀葵、油菜植株按照一定的數(shù)量比例進(jìn)行混作。根據(jù)蜀葵與油菜不同的混作比例，本試驗(yàn)分成5個是試驗(yàn)組，分別為CK、YH1、YH2、YH3、YH4。5個試驗(yàn)組中的蜀葵與油菜的混作比例見表1。

表1 不同混作比例

1.3 樣品采集

移栽培養(yǎng)70d時，取油菜、蜀葵新鮮葉片供酶活測定。采集的油菜、蜀葵葉片樣品先用自來水沖洗干凈，之后用20 mmol/L Na2-EDTA交換20min，再用去離子水洗凈，用吸水紙擦干，立即檢測相關(guān)指標(biāo)或者放入液氮速凍保存，保存于-75℃(ThermoFreezer 700，USA)超低溫冰箱以免鮮樣中酶失去活性。

移栽培養(yǎng)180d時，收割整株油菜、蜀葵。收割的油菜、蜀葵植物樣品，先105℃殺青30min，然后75℃烘干至恒重，稱植物干重，最后用不銹鋼粉碎機(jī)粉碎樣品保存于干燥器中備用。

1.4 測定方法

對植物樣品分析測定，分析測定方法見表2。

表2 植物樣品指標(biāo)及分析測定方法

根據(jù)測定結(jié)果計算富集系數(shù)、轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)和耐性指數(shù)，用于判斷植物對Pb、Cd的吸附和轉(zhuǎn)運(yùn)能力[14]，公式如下：

富集系數(shù)(Bioconcentration coefficient，BCF)=植株體積累的重金屬濃度/土壤中重金屬濃度

轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)(Translocation coefficient，TF)=植物地上部重金屬濃度/植物地下部重金屬濃度

耐性指數(shù)(Tolerance index，TI)=處理組植物生物量/對照組植物生物量

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤來表示，采用Microsoft Excel 2010軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，用SPSS20.0進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)，最小顯著差異法(LSD)在α=0.05水平進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同混作比例對蜀葵和油菜生物量的影響

將單作蜀葵(YH4)作為對照，混作蜀葵地上、地下部分的生物量均下降。當(dāng)混作比例為蜀葵∶油菜=1∶3時，蜀葵地上、地下部分的生物量分別下降16.23%、23.85%；當(dāng)蜀葵∶油菜=2∶2時，蜀葵生物量分別下降8.30%、21.36%；當(dāng)蜀葵∶油菜=3∶1時，蜀葵生物量分別下降5.48%、11.26%。

圖1 混作蜀葵的生物量

將單作油菜(CK)作為對照，混作油菜地上、地下部分以及油菜籽的生物量是上升的。當(dāng)混作比例為蜀葵∶油菜=1∶3時，油菜的油菜籽與地上、地下部分生物量分別上升12.75%、11.97%、34.43%；當(dāng)蜀葵∶油菜=2∶2時，油菜生物量分別上升80.18%、76.75%、125.88%；當(dāng)間蜀葵∶油菜=3∶1時，油菜生物量分別上升94.86%、189.15%、248.34%。

圖2 混作油菜的生物量

蜀葵與油菜的耐性指數(shù)變化規(guī)律與生物量變化規(guī)律一致，與單作相比，混作蜀葵耐性指數(shù)下降，混作油菜耐性指數(shù)上升。但是在混作蜀葵、油菜中，蜀葵數(shù)量占比越高，兩者耐性指數(shù)越高。所以試驗(yàn)組YH1 、YH2、 YH3中，蜀葵的耐性指數(shù)比對照組YH4依次減少0.20、0.14、0.08，油菜的耐性指數(shù)比對照組CK依次增加0.14、0.82、1.96。

2.2 不同混作比例對蜀葵和油菜Pb、Cd含量的影響

蜀葵中的Pb、Cd主要積累在根部，與蜀葵的單作試驗(yàn)組YH4相比，混作蜀葵地上、地下部分的Pb、Cd含量是下降的，從YH1至YH3，地上部分Pb含量下降39.80%、30.83%、17.93%，Cd含量下降28.43%、19.52%、13.15%。地下部分Pb含量下降70.58%、41.38%、18.66%，Cd含量下降35.80%、23.33%、12.99%。油菜中的Pb、Cd也主要積累在根部，與油菜的單作試驗(yàn)組CK相比，混作油菜的地上、地下部分以及油菜籽的Pb、Cd含量也是下降的，從YH1至YH3，地上部分Pb含量下降19.72%、31.43%、42.52%，Cd含量下降32.72%、39.76%、50.15%。地下部分Pb含量下降13.68%、18.88%、31.45%，Cd含量下降3.15%、10.39%、26.53%。油菜籽Pb含量下降20.81%、31.98%、46.51%，Cd含量下降33.57%、40.56%、51.05%。

圖3 混作油菜與蜀葵的耐性指數(shù)

表3 不同混作比例對蜀葵、油菜鉛、鎘含量的影響

2.3 不同混作比例對蜀葵和油菜Pb、Cd富集系數(shù)與轉(zhuǎn)移系數(shù)的影響

在不同混作比例中，隨著蜀葵的數(shù)量占比升高，蜀葵的Pb、Cd富集系數(shù)升高，而轉(zhuǎn)移系數(shù)下降。當(dāng)混作比例為蜀葵∶油菜=1∶3時，蜀葵的Pb、Cd富集系數(shù)最低而轉(zhuǎn)移系數(shù)最高，與單作蜀葵的最高富集系數(shù)、最低轉(zhuǎn)移系數(shù)相比，Pb分別相差0.17、0.25，Cd分別相差0.07、0.06。而隨著蜀葵的數(shù)量占比升高，油菜的Pb、Cd富集系數(shù)與轉(zhuǎn)移系數(shù)都隨之下降，當(dāng)混作比例為蜀葵∶油菜=3∶1時，油菜的Pb富集系數(shù)與轉(zhuǎn)移系數(shù)最低，與單作油菜的最高富集系數(shù)與轉(zhuǎn)移系數(shù)相比，Pb分別相差0.11、0.03，Cd分別相差0.06、0.20。

2.4 不同混作比例對蜀葵和油菜葉片抗氧化酶活性的影響

混作油菜抗氧化酶活性(SOD、POD、CAT)低于單作油菜，混作蜀葵除了POD活性高于單作蜀葵，SOD、CAT活性也低于單作蜀葵。在混作比例中，蜀葵的數(shù)量占比升高，混作蜀葵的抗氧化酶中POD呈下降趨勢，SOD、CAT為上升趨勢，而油菜的抗氧化酶呈下降趨勢。當(dāng)混作比例為蜀葵∶油菜=3∶1，與單作蜀葵相比，混作蜀葵的SOD含量下降3.50%、POD含量上升6.40%、CAT含量下降13.42%。與單作油菜相比，混作油菜的SOD下降16.79%、POD含量下降8.12%、CAT含量下降37.65%。

表4 不同混作比對蜀葵、油菜富集系數(shù)和轉(zhuǎn)移系數(shù)的影響

表5 不同混作比例對蜀葵和油菜葉片抗氧化酶活性的影響

2.5 不同混作比例下油菜吸收Pb、Cd的相關(guān)性分析

根據(jù)表7數(shù)據(jù)所示，不同混作比例與油菜地上部分Cd含量、地下部分Cd含量、Cd富集系數(shù)具有負(fù)相關(guān)性，與地上生物量具有正相關(guān)性，與油菜地上部分Pb含量、油菜地下部分Pb含量、Pb富集系數(shù)具有顯著負(fù)相關(guān)性(r=-0.989*、-0.987*、-0.989*)，與油菜地下生物量有顯著正相關(guān)性(r=0.973*)。

表6 不同混作比例下油菜吸收Pb、Cd的相關(guān)性分析

3 討論

根據(jù)本次試驗(yàn)，混作油菜與單作(CK)相比，其生物量與耐性指數(shù)升高，且混作試驗(yàn)組中，蜀葵的數(shù)量占比越高，油菜的生物量與耐性指數(shù)越高。有研究表明，在土壤重金屬脅迫條件下，富集植物與普通植物混作能降低重金屬的生物有效性以及對普通植物的毒性[15]。與本次試驗(yàn)結(jié)果一致，蜀葵降低Pb、Cd的生物有效性以及毒性，對油菜起保護(hù)作用。根據(jù)徐彥紅[16]的試驗(yàn)，富集植物紫花苜蓿與其他植物混作時，生物量會降低。與本次試驗(yàn)蜀葵情況一致，說明蜀葵與油菜間存在種間競爭。

在植物體內(nèi)Pb、Cd的分布特征為地下>地上，說明植物吸收的Pb、Cd主要積累在根部，與楊績?nèi)坏闹亟饘僭囼?yàn)結(jié)果一致[17]。富集植物與作物混作，富集植物能有效抑制作物對重金屬的吸收，與黃佳璟等人的試驗(yàn)結(jié)果一致[18]。因此，與單作油菜相比，混作油菜地上、地下部分與油菜籽的Pb、Cd含量都會下降，且隨著混作中的蜀葵數(shù)量比例增大，油菜地上、地下部分的Pb、Cd下降量增大。根據(jù)閆秀秀的研究，富集植物一方面通過活化土壤周圍的重金屬，促進(jìn)作物吸收重金屬，另一方面通過競爭吸收、化感等方式抑制作物吸收重金屬[19]。本次試驗(yàn)中，富集植物蜀葵地下部分的Pb、Cd含量相比單作是降低的，而作物油菜地上、地下部分的Pb、Cd含量相比單作也是下降的，這與歐發(fā)剛等人的試驗(yàn)結(jié)果一致[20]。說明蜀葵、油菜的根系在Pb、Cd吸收的相互作用中，油菜與蜀葵相互抑制各自對Pb、Cd的吸收，但蜀葵在Pb、Cd的吸收方面比油菜更有優(yōu)勢，進(jìn)而抑制油菜對Pb、Cd的吸收。在轉(zhuǎn)移系數(shù)方面，與陳建軍[21]等人的試驗(yàn)結(jié)果一致，混作蜀葵與單作相比轉(zhuǎn)移系數(shù)上升，而混作油菜與單作相比轉(zhuǎn)移系數(shù)下降。說明蜀葵能一定程度上抑制了油菜的Pb、Cd污染物從地下向地上部分轉(zhuǎn)移，最終使油菜地上部分的Cd、Pb含量下降。

在重金屬脅迫下, 植物體內(nèi)會產(chǎn)生 SOD、POD、CAT 等抗氧化的物質(zhì), 通過生化反應(yīng)來清除體內(nèi)活性氧等物質(zhì)[22]。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，混作蜀葵、油菜的SOD含量比單作更低。根據(jù)朱秀紅[23]等人的試驗(yàn)結(jié)果，植物體內(nèi)SOD的活性基本會先隨重金屬濃度升高而升高，本次試驗(yàn)中，蜀葵與油菜相互抑制對Pb、Cd的吸收，使混作油菜、蜀葵體內(nèi)的重金屬含量減少，SOD活性也減少。不同植物體內(nèi)的抗氧化酶對重金屬能表現(xiàn)出不同的生態(tài)效應(yīng)[24]，本次與單作相比，混作蜀葵POD是下降的，CAT是上升的，而混作油菜的POD與CAT都是下降的。油菜與蜀葵抗氧化酶的變化，也說明植物在重金屬脅迫下，混作可以改變植物自身酶的合成機(jī)制。

根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》(GB2762-2017)，油菜屬于葉菜蔬菜，因此油菜的Pb、Cd安全標(biāo)準(zhǔn)分別為0.3mg/kg、0.2mg/kg。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，處理組油菜籽的Cd含量達(dá)到安全標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)混作以及Pb、Cd復(fù)合脅迫對油菜吸收Pb、Cd的影響[25]，油菜籽的Cd含量最終符合食品安全標(biāo)準(zhǔn)。而由于土壤中的Pb含量過高，雖然混作使油菜籽Pb含量降低，但未降至安全標(biāo)準(zhǔn)。

4 結(jié)論

蜀葵與油菜混作能有效降低油菜地上部分的重金屬含量，增加油菜地上部分生物量，對油菜的安全質(zhì)量有積極作用。在本試驗(yàn)中，混作比例為油菜∶蜀葵=1∶3時，蜀葵對油菜在Pb、Cd積累的抑制作用最佳。