中藥調(diào)節(jié)銀屑病相關(guān)分子研究進展

2022-11-12 07:29:54林立王姍姍楊素清

中國中醫(yī)藥信息雜志 2022年5期

林立，王姍姍，楊素清

1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱 150040；

2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江哈爾濱 150040

臨床上，銀屑病是以皮膚潮紅、斑塊、鱗屑為主要皮損表現(xiàn)的炎癥性皮膚疾病，微觀上可見角質(zhì)形成細胞（KCs）異常分化增殖背景下的真皮上層血管增生和免疫細胞在真皮和表皮層的浸潤擴張。目前，免疫系統(tǒng)紊亂、血管新生、遺傳和環(huán)境因素被認為是關(guān)鍵病因，也是其發(fā)病機制探索和研究的熱點。雖然生物制劑在中重度銀屑病治療中已被廣泛使用，但其安全性仍有待觀察，而傳統(tǒng)藥物如維A酸類、皮質(zhì)類固醇、維生素D衍生物、煤焦油等療效不佳。中藥多效應(yīng)、多靶點、廣覆蓋的優(yōu)勢在銀屑病治療中發(fā)揮出良好作用。近年來，隨著靶向細胞、信號通路及基因水平研究的深化，有關(guān)中藥治療銀屑病作用的分子機制研究不斷出現(xiàn)，茲就相關(guān)研究綜述如下。

1 分子機制研究

1.1 免疫炎癥相關(guān)分子

銀屑病發(fā)病機制的核心源于免疫介導(dǎo)，其所覆蓋的多種免疫細胞和分子通過交互作用開啟特定免疫通路，影響銀屑病的發(fā)病。在眾多免疫介導(dǎo)機制中，以T淋巴細胞為基點涉及多亞群、多因子、多交互的免疫反應(yīng)被認為是銀屑病發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。從經(jīng)典的Th1/Th2平衡偏移，到Th17介導(dǎo)的白細胞介素（IL）-23/IL-17通路，以至Th17/Treg動態(tài)平衡對銀屑病的影響，所涉及的分子通過發(fā)揮對靶細胞正向調(diào)節(jié)或反向抑制作用，構(gòu)建了龐大且復(fù)雜的免疫機制網(wǎng)絡(luò)體系。

1.1.1 干擾素-γ

干擾素-γ（IFN-γ）具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性，能誘導(dǎo)KCs過度增殖，致表皮增厚而產(chǎn)生銀屑病皮損。作為Th1細胞的標(biāo)志性分子，其在銀屑病中高表達，提示Th1/Th2平衡處于Th1占優(yōu)勢、Th2受抑制的免疫狀態(tài)。

高揚等實驗發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方銀屑1號（白花蛇舌草、土茯苓、板藍根、生地黃、白鮮皮、車前草、半邊蓮、大黃等）可緩解咪喹莫特（IMQ）誘導(dǎo)的銀屑病小鼠角質(zhì)增生，降低小鼠外周血清中炎癥相關(guān)因子IFN-γ、IL-6和IL-17含量，下調(diào)核因子（NF）-κB蛋白及mRNA表達。提示銀屑1號可減少IFN-γ分泌，控制KCs異常增生和干預(yù)皮損部位炎性反應(yīng)，而其對IFN-γ調(diào)控可能受NF-κB信號通路的影響。陰俊等研究顯示，制備順濃度梯度五倍子膏劑，局部應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因K14-VEGF銀屑病小鼠，連續(xù)用藥4周后，ELISA檢測到小鼠外周血清IFN-γ含量下降，且以高劑量組最為明顯，IL-4水平未見明顯變化。表明五倍子可特異性下調(diào)IFN-γ，并通過抑制IFN-γ分泌，糾正Th1優(yōu)勢的Th1/Th2失衡狀態(tài)，弱化銀屑病炎癥刺激。季天皓等臨床觀察發(fā)現(xiàn)，在青黛丸（青黛、土獲、丹參、白術(shù)、建曲等）聯(lián)合甲氨蝶呤治療銀屑病8周后，以銀屑病皮損面積和嚴重性指數(shù)（PASI）-75為閾值，聯(lián)合治療組達到PASI-75者的IFN-γ水平比單用甲氨蝶呤組患者下降更為明顯；實時熒光定量PCR測定顯示，GATA3和IL-4 mRNA表達高于IFN-γ、IL-12和T-bet mRNA表達。故推測復(fù)方青黛丸通過抑制IFN-γ同時增強IL-4分泌，參與調(diào)節(jié)銀屑病Th1/Th2免疫應(yīng)答過程，且此途徑受到T-bet和GATA-3之間相對表達的制約。

1.1.2 腫瘤壞死因子-α

腫瘤壞死因子-α（TNF-α）具有促進多種炎癥細胞活化和相關(guān)因子分泌、擴大炎癥級聯(lián)反應(yīng)的能力，既參與Th17介導(dǎo)的免疫異常，又直接作用于KCs促進其增殖，故與銀屑病的發(fā)病和進行性加重密切相關(guān)。

揭英桃等實驗發(fā)現(xiàn)，與口服給藥方式比較，L-茶氨酸（綠茶中所提取的一種游離性氨基酸）局部涂抹IMQ誘導(dǎo)的銀屑病模型小鼠病損部位皮膚，能減少小鼠咬/舔和畏縮2種自發(fā)性行為，廣泛抑制小鼠表皮和真皮層TNF-α三聚體和單體表達，并阻止瘙癢相關(guān)分子TRPV1上調(diào)。表明L-茶氨酸通過下調(diào)TNF-α表達和抑制外周感覺神經(jīng)纖維異常生長途徑，表現(xiàn)出局部慢性抗炎與緩解銀屑病瘙癢的作用。陳夢雅等設(shè)置對照實驗，探究銀屑1號對中性粒細胞分泌TNF-α的影響，ELISA檢測顯示銀屑1號可明顯降低銀屑病患者外周血中性粒細胞分泌TNF-α，且其抑制程度隨藥液濃度下降而減弱，中藥原液組的抑制程度優(yōu)于雷公藤對照組。推測下調(diào)中性粒細胞TNF-α表達，進而抑制Th1免疫反應(yīng)，減緩炎癥發(fā)生及KCs增殖，可能是銀屑1號有效治療銀屑病的途徑之一。Xiang等研究顯示，氧化苦參堿能抑制IMQ誘導(dǎo)的小鼠瘙癢，減輕皮膚角質(zhì)化和炎癥浸潤；蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)等分析發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿干預(yù)可下調(diào)p-P38和p-ERK因子表達，降低TNF-α、IL-17等炎性分子水平，KCs受TNF-α和IFN-γ刺激后高表達的熱休克蛋白90、60受抑制。表明氧化苦參堿可通過抑制熱休克蛋白90、60介導(dǎo)MAPK信號通路下調(diào)TNF-α等，以緩解銀屑病瘙癢和炎癥。

1.1.3 Th17相關(guān)分子

以IL-23/Th17/IL-17軸為基點的免疫機制對包括銀屑病在內(nèi)的多種炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要。作為該通路的上游調(diào)節(jié)分子，IL-23通過與Th17細胞上的特異性IL-23受體結(jié)合，刺激Th17增殖分化和炎性因子分泌，并維持其穩(wěn)定。IL-17是該通路的下游調(diào)節(jié)分子，也是構(gòu)建和維持銀屑病免疫和炎癥表型的基礎(chǔ)分子，可作用于KCs、樹突狀細胞等靶細胞，加劇皮膚炎癥反應(yīng)。

徐嘉智等實驗觀察到，以不同濃度洋金花提取物灌胃處理IMQ誘導(dǎo)的銀屑病模型小鼠，均可見小鼠背部銀屑病樣皮損改善、表皮厚度變薄、皮膚鱗屑減少；洋金花提取物可阻礙CD4T細胞聚集、下調(diào)銀屑病模型小鼠皮損處炎癥分子IL-17、IL-23和NF-κB表達。表明洋金花提取物緩解炎癥反應(yīng)和阻礙KCs生成作用是通過下調(diào)IL-23和IL-17水平，干預(yù)IL-23/IL-17軸，進而抑制下游NF-κB信號通路完成。王麗等臨床觀察顯示，經(jīng)典方清營湯可明顯降低銀屑病血熱證患者中醫(yī)證候、PASI及皮膚病生活質(zhì)量指數(shù)評分；經(jīng)過清營湯干預(yù)，患者外周血Th17細胞百分比和相關(guān)分子（IL-17、IL-23、IL-22、IL-21）水平下降，信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）和維甲酸相關(guān)孤兒核受體γt（RORγt）明顯低表達。推測清營湯通過調(diào)節(jié)STAT3和RORγt而影響IL-23/Th17軸，抑制IL-17分泌，進而對銀屑病血熱證患者起治療作用。任國華等研究顯示，白芍總苷能減小中重度銀屑病皮損面積，對比單用窄譜中波紫外線照射治療，加用白芍總苷的聯(lián)合治療組患者外周血清IL-23、IL-17下降更為明顯，皮損內(nèi)KCs的PAR-2染色平均吸光度值更低。提示白芍總苷對IL-23和IL-17的抑制作用或許對削弱KCs內(nèi)PAR-2的前炎癥效應(yīng)有積極影響，是其減輕病情、縮短治療時間的原因之一。王霧等探究人參皂苷CK對銀屑病的治療作用發(fā)現(xiàn)，人參皂苷CK給藥后，IMQ誘導(dǎo)銀屑病模型小鼠背部紅斑、鱗屑皮損減輕，表皮增厚明顯減弱，皮損組織IL-23、IL-17表達顯著下降，JAK1、JAK2、STAT3磷酸化水平降低?？烧J為人參皂苷CK下調(diào)IL-23和IL-17，抑制 JAK1/2-STAT3活化，逆向調(diào)節(jié)IL-23/IL-17-JAK1/2-STAT3的作用機制與緩解病變部位皮損聯(lián)系緊密。

1.1.4 調(diào)節(jié)性T細胞

IL-10是一種免疫抑制分子，可誘導(dǎo)靶細胞活性和免疫應(yīng)答能力下降，而轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）具有抑制免疫活性細胞增殖等作用，二者協(xié)同維持調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）的免疫抑制功能。Th17/Treg免疫失衡機制已被證實在銀屑病中存在，IL-10及TGF-β表達水平影響Th17/Treg平衡的偏移，因而在銀屑病發(fā)病過程中的地位不容忽視。

Tuekam等研究表明，雷公藤多苷能改善銀屑病樣皮損，增加IL-10含量，降低IL-17、IL-23分泌，提示雷公藤多苷對銀屑病機體已失衡的免疫穩(wěn)態(tài)修復(fù)作用依賴于對IL-10、IL-17、IL-23等Th17/Treg相關(guān)分子的調(diào)控，進而激活Treg的免疫耐受，拮抗Th17的炎癥加劇。王菲菲等研究顯示，清熱涼血方（蛇莓、白英、土茯苓、白花蛇舌草、牡丹皮、生地黃、赤芍、紫草）可有效改善潮紅、脫屑的銀屑病皮損，上調(diào)外周血CD4T細胞表面TIGIT和IL-10表達，降低IFN-γ和IL-17A水平。表明清熱涼血方通過上調(diào)CD4T細胞表面TIGIT表達，刺激IL-10釋放，抑制IFN-γ、IL-17A分泌，調(diào)節(jié)局部免疫狀態(tài)紊亂，進而實現(xiàn)“涼血清熱、活血解毒”之功治療血熱型銀屑病。熱比姑麗?伊斯拉木等實驗表明，土大黃乙醇提取物作用于銀屑病小鼠背部皮膚可增強病損部位TGF-β1及神經(jīng)纖毛蛋白1（NRP-1）表達，且增強程度表現(xiàn)出濃度相關(guān)性。提示土大黃乙醇提取物能通過上調(diào)皮損組織TGF-β1及NRP-1表達而增強Treg對其他效應(yīng)性T細胞增殖活性的抑制功能，糾正Th17/Treg失衡，此效應(yīng)對調(diào)節(jié)下游IL-23/IL-17軸，維持或恢復(fù)表皮組織免疫穩(wěn)態(tài)，促進銀屑病向愈有積極意義。一項關(guān)于龍膽瀉肝湯對尋常型銀屑病的研究顯示，銀屑病患者皮損處p38 MAPK蛋白及基因表達與炎性分子水平呈正相關(guān)，龍膽瀉肝湯在減輕皮損、改善臨床癥狀同時，降低外周血TGF-β、IL-6、IL-17、IL-23等炎性因子水平。表明TGF-β、IL-6低表達可抑制Th17分化，下調(diào)其他炎性因子水平，這種以p38 MAPK和Th17作為端點的信號通路可能是龍膽瀉肝湯治療尋常型銀屑病的作用靶點。

1.2 血管新生相關(guān)分子

銀屑病皮損處早期病理改變源于新血管形成及分布異常，其過程主要受兩大類分子調(diào)控，即促進血管新生類和抑制血管新生類，二者間拮抗對立效應(yīng)失衡是導(dǎo)致血管異常增生，影響銀屑病發(fā)生發(fā)展的因素。在已被證實與銀屑病發(fā)病機制高度相關(guān)分子中，血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）是促血管新生的代表，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物在拮抗血管生成中扮演關(guān)鍵角色。

1.2.1 血管內(nèi)皮細胞生長因子

作為一種特異性促血管生成因子，VEGF在血管新生過程中發(fā)揮重要作用。在銀屑病中，VEGF家族成員與特定受體結(jié)合形成二聚體激活不同信號通路，影響血管內(nèi)皮細胞增生和遷移，致新血管形成，為維持KCs異常增殖創(chuàng)造條件，建立惡性循環(huán)，導(dǎo)致皮損進行性加重。

Lv等研究表明，養(yǎng)血解毒方（當(dāng)歸、生地黃、丹參、雞血藤、麥冬、玄參、土茯苓、白花蛇舌草、天花粉等）可降低銀屑病模型小鼠PASI評分，減少微血管數(shù)量；另外，ELISA及Western blot分析顯示VEGF、Survivin水平下調(diào)，p-Akt、p-Gαq、GSK3β、β-catenin水平降低。表明養(yǎng)血解毒方能通過PI3K/Akt通路抑制Survivin表達，下調(diào)VEGF水平，調(diào)節(jié)微血管凋亡和生成，從而改善銀屑病皮損部位微循環(huán)病變。王鵬等臨床觀察顯示，銀屑病血熱證患者經(jīng)涼血消風(fēng)散（水牛角、生地黃、紫草、雞血藤、牛蒡子、金銀花、荊芥、赤芍、生石膏等）治療后，皮膚病損緩解、中醫(yī)癥狀總積分下降；對比常規(guī)西醫(yī)治療，聯(lián)合涼血消風(fēng)散治療下調(diào)患者外周血VEGF、MMP-9、TGF-β1、TNF-α水平更明顯。提示涼血消風(fēng)散有助于抑制血管新生，減輕免疫損傷，促進銀屑病皮損修復(fù)。

1.2.2 基質(zhì)金屬蛋白酶

MMP是一種胞外與膜相關(guān)的鈣依賴性和含鋅內(nèi)肽酶，參與包括血管新生、腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移、細胞生長和凋亡在內(nèi)的多種病生理過程。MMP-2和MMP-9均可由樹突狀細胞（DCs）和KCs分泌，前者促進胞外蛋白水解，后者調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞通透性，二者協(xié)同參與銀屑病皮損處新生血管的形成。

李龍妹等研究表明，重樓皂苷Ⅰ可抑制細胞增殖和浸潤，并以濃度依賴性下調(diào)MMP-2、MMP-9和NF-κB p65 mRNA和蛋白表達，且NF-κB p65過表達后逆轉(zhuǎn)了重樓皂苷Ⅰ對MMP-2、MMP-9 mRNA下調(diào)。表明重樓皂苷Ⅰ通過抑制NF-κB p65通路抑制下游MMP-2和MMP-9表達，進而阻礙細胞增殖和轉(zhuǎn)移過程，對銀屑病治療機制的研究或有建設(shè)性意義。張紅珍等以補陽還五湯灌胃培養(yǎng)后的大鼠血清作用于體外培養(yǎng)的血管平滑肌細胞，RT-PCR檢測顯示MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA、Rho激酶mRNA表達均下調(diào)。表明補陽還五湯含藥血清可通過抑制Rho激酶活性，下調(diào)MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表達，調(diào)控MMP-2和MMP-9水平而抑制血管平滑肌細胞增殖，此機制或可用于銀屑病治療。崔陽臨床觀察顯示，涼血退銀湯（土茯苓、白花蛇舌草、生地黃、大青葉、苦參、玄參、薏苡仁、黃柏、青蒿、黃芩）可緩解銀屑病患者皮損，改善其中醫(yī)證候積分；治療后患者皮損中的VEGF、MMP-2、MMP-9陽性率明顯降低；相關(guān)性分析顯示，VEGF、MMP-2、MMP-9與中醫(yī)證候積分和PASI評分均呈正相關(guān)。提示涼血退銀湯治療銀屑病促進皮損愈合，提高治療效果，與對皮損中VEGF、MMP-2、MMP-9水平的負向干預(yù)作用關(guān)系緊密。

1.2.3 基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物

作為一種特異性MMPs內(nèi)源性抑制劑，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物（TIMP）通過直接抑制MMPs活性和間接調(diào)節(jié)血管重塑過程，拮抗MMPs對細胞外基質(zhì)降解，調(diào)節(jié)細胞增殖和運動，抑制血管新生，在銀屑病皮損前變化中產(chǎn)生重要作用。

林小英等研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿苷可使MMP-2、TIMP-1蛋白表達下調(diào)，MMP-9蛋白表達上調(diào)。推測基于淫羊藿苷對MMP-9/TIMP-1失衡糾正和對MMP-2表達影響的機制，應(yīng)用淫羊藿于銀屑病的治療中對疾病向愈存在積極意義。韓科等臨床觀察顯示，膿皰型銀屑病患者經(jīng)化銀解毒湯（生地黃、赤芍、丹參、土茯苓、紫草、黃藥子等）治療后血清TGF-β1、MMP-9、TIMP-1水平明顯下降；與阿維A膠囊對照組近期療效相當(dāng)，而遠期效果化銀解毒湯明顯優(yōu)于阿維A膠囊。提示化銀解毒湯通過影響TGF-β1及調(diào)控MMP-9/TIMP-1發(fā)揮治療膿皰型銀屑病的作用。周牡娜等實驗表明，六味地黃醇提物（主要成分為多糖、丹皮酚、黃酮等）可誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡；細胞內(nèi)VEGF、促血管生成素-2（Ang-2）蛋白表達明顯降低，血小板反應(yīng)素（TSP）、TIMP-2蛋白表達明顯升高。說明六味地黃醇提物可能通過下調(diào)細胞內(nèi)血管相關(guān)因子VEGF、Ang-2，上調(diào)TSP、TIMP-2表達，而增強對異?；罨毎囊种谱饔?，此效應(yīng)可指導(dǎo)調(diào)節(jié)血管相關(guān)分子，阻礙KCs過度增殖的銀屑病治療方案。

1.3 遺傳相關(guān)分子

表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)平衡的破壞已被證實與銀屑病發(fā)生發(fā)展聯(lián)系密切。miRNA是基因表達和調(diào)控的關(guān)鍵分子，通過多靶點、多通路抑制其他信使RNA翻譯過程，加強負調(diào)控基因表達效應(yīng)，調(diào)節(jié)相關(guān)因子水平，參與細胞增殖分化、免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等病理生理過程。異常表達的miRNA被認為可能是銀屑病潛在標(biāo)志物和治療的新型切入點?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)銀屑病異常表達的miRNA超過250個，其中miR-21、miR-155、miR-124、miR-203等均被認為參與銀屑病的發(fā)生。

劉依璐等研究發(fā)現(xiàn)，紫草素能濃度依賴性抑制人類永生化表皮細胞（HaCaT）增殖，并明顯拮抗表皮生長因子（EGF）對HaCaT細胞增殖的正向刺激；同時對miR-21模擬劑和miR-21抑制劑作類比實驗發(fā)現(xiàn)，miR-21抑制劑可下調(diào)HaCaT細胞增殖細胞核抗原（PCNA）蛋白表達，表現(xiàn)出類紫草素樣結(jié)果，而miR-21模擬劑對受紫草素干預(yù)的HaCaT細胞增殖細胞核抗原（PCNA）蛋白下調(diào)表現(xiàn)出逆轉(zhuǎn)作用，且重復(fù)實驗結(jié)果相似。推測紫草素參與治療銀屑病的機制與下調(diào)miR-21，破壞miR-21-KCs反饋調(diào)節(jié)，進而抑制KCs增殖有關(guān)。安月鵬等研究表明，蜈蚣敗毒飲（蜈蚣、紫草、土茯苓、鬼箭羽、烏梢蛇、甘草）可劑量依賴性改善IMQ誘導(dǎo)銀屑病鼠模型皮損（MPASI）；并檢測到miR-155 mRNA下調(diào)，SOCS1 mRNA上調(diào)，JAK2/STAT3通路相關(guān)蛋白表達抑制，尤以高劑量組最為明顯；數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，miR-155、JAK2、STAT3與ΔMPASI間呈負相關(guān)。說明蜈蚣敗毒飲可通過下調(diào)miR-155干預(yù)其下游SOCS1-JAK2/STAT3信號通路，從而發(fā)揮治療作用。肖月園等實驗發(fā)現(xiàn)，竹黃顆粒含藥血清可有效抑制KCs增殖和遷移；并檢測到Keratin6、Keratin16、MMP1、MMP9蛋白表達明顯下調(diào)，PI3K/Akt和ERK通路蛋白被顯著抑制，miR-124-3p降低，F(xiàn)GFR2升高的異常水平得到恢復(fù)。表明竹黃顆粒治療銀屑病或可能通過表達miR-124-3p和/或下調(diào)成纖維細胞生長因子受體2（FGFR2），抑制下游PI3K/Akt及ERK激活，以制約KCs增殖方式實現(xiàn)。張抒等研究顯示，姜黃素對HaCaT細胞增殖有明顯抑制作用，且在安全濃度范圍內(nèi)高濃度姜黃素可明顯降低受VEGF干預(yù)和未經(jīng)處理的HaCaT細胞miR-203水平。表明姜黃素通過下調(diào)miR-203，干預(yù)其介導(dǎo)的細胞內(nèi)信號通路，從而表現(xiàn)出對VEGF拮抗和減弱KCs增殖，達到治療銀屑病目的。

2 展望

銀屑病病理機制涉及多靶點、多細胞、多通路，目前治療方式雖不斷更新迭代，但臨床效果并不顯著。中藥成分復(fù)雜且作用廣泛，對銀屑病療效突出，是臨床治療的良好補充和替代藥物。包括免疫分子、血管新生分子、遺傳分子等在內(nèi)的多種分子作為“細胞-分子-通路-分子-表型”的核心橋梁因素，在銀屑病中聯(lián)系著微觀病理的病變異常，介導(dǎo)了宏觀疾病的表達發(fā)生。中藥對這些銀屑病相關(guān)分子進行有效調(diào)控，豐富了對銀屑病分子機制的認知，擴大了治療的選擇范圍。