池鑫宇，楊 柯，曾春暉

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，南寧 530200）

隨著我國第七次人口普查數(shù)據(jù)的公布[1]，人口年齡結(jié)構(gòu)變化及社會老齡化進(jìn)一步加深等問題再一次受到全社會熱議，其中老年疾病包括神經(jīng)退行性疾病，高血糖、高血壓、高血脂，腫瘤等尤其需要引起重視。以認(rèn)知功能障礙記憶缺失為外在特征的阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD），在國際上已成為繼腫瘤、心血管疾病之后居第3 位的致死性疾病[2]。全球65 歲以下患病率約為4%，75 歲以上患病率驟升至40%左右，AD 的高發(fā)病率和較高的死亡率使其成為全球公共健康問題之一[3]。

何首烏，蓼科多年生草本植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥塊根。何首烏中主要含有二苯乙烯苷類，蒽醌類，多糖類，卵磷脂等有效活性成分。在何首烏藥理作用方面，學(xué)者們的研究集中于抗氧化，免疫調(diào)節(jié)，神經(jīng)保護(hù)，抗衰老，降血脂等方面，其在中醫(yī)臨床治療AD 中的使用頻率較高，同時學(xué)者們發(fā)現(xiàn)何首烏炮制后藥理作用效果出現(xiàn)差異[4]。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是近年來快速發(fā)展起來的一門綜合系統(tǒng)生物學(xué)、生物信息學(xué)、計算機(jī)科學(xué)等學(xué)科的新興學(xué)科[5]。中醫(yī)通過整體的方法治療疾病，其所使用的中藥在分子層面呈現(xiàn)多成分，多靶點特征與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究藥物作用機(jī)制的核心思想異途同歸。為研究何首烏改善AD的作用機(jī)制和不同何首烏成分的作用差異，通過文獻(xiàn)資源整合和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法將何首烏中有效成分作用靶點與AD發(fā)病機(jī)制相關(guān)聯(lián)，匹配找出何首烏作用于AD 的靶點和通路，同時在實驗中加以驗證并探討不同蒸曬程度何首烏的作用差異。

1 材料和方法

1.1 動物、細(xì)胞和主要試劑

30 只SD 大鼠（180～200 g，雌雄各半），由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物公司（實驗動物生產(chǎn)許可證：SCXK 2019-0004）提供；30 只APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠[16 周齡，（27±2）g，雄性]和5 只野生型C57BL/6小鼠[16周齡，（25±2）g，雄性]由常州卡文斯實驗動物公司提供（實驗動物生產(chǎn)許可證：SCXK 2016-0010）。大小鼠分不同房間飼養(yǎng)在SPF 級動物房設(shè)施內(nèi)，溫度（24±3）°C，濕度（70±15）%，光/暗交替周期為12 h，不受限制地獲得食物和水，實驗開始前適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d。成年大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞系PC12 細(xì)胞由廣西中醫(yī)藥大學(xué)夏星教授惠贈，ATCC細(xì)胞數(shù)據(jù)庫編號：CRL-1721。

何首烏生品飲片購買于何首烏地道產(chǎn)區(qū)中國廣東德慶藥材批發(fā)市場，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)郭敏副教授鑒定為蓼科植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥塊根。白細(xì)胞介素1β（IL-1β，ERC007.96）、腫瘤壞死因子α（TNF-α，ERC102a.48）和白細(xì)胞介素6（IL-6，ERC003.96）的ELISA試劑盒購買自欣博盛生物公司，F(xiàn)luo-3AM 熒光探針購買自碧云天生物公司。IL-1β（16806-1-AP）、TNF-α（17590-1-AP）蛋白抗體購買自Proteintech 生物公司，IL-6（bs-6309R）蛋白抗體購買自博奧森公司。

1.2 文獻(xiàn)資源整合

通過檢索全球文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫，收集了近10年來與AD發(fā)病機(jī)制、何首烏藥理作用相關(guān)的文獻(xiàn)，提取其中的關(guān)鍵句段進(jìn)行整合。探討AD發(fā)病機(jī)制與何首烏藥理作用之間的潛在關(guān)聯(lián)，并繪制關(guān)聯(lián)圖。

1.3 何首烏潛在作用AD的蛋白靶點收集

本研究通過挖掘中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺數(shù)據(jù)庫（integrative pharmacology-based research platform of traditional Chinese Medicine，TCMIP，http://www.tcmip.cn）[6]，收集何首烏中主要有效成分，利用Pubchem（www.pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）進(jìn)行確證，運用Pharmmapper（www.lilab-ecust.cn/pharmmapper）預(yù)測靶點，篩選可信度≥0.800的蛋白靶點并整合草藥成分目標(biāo)平臺（herbal ingredients'targets platform，HIT）數(shù)據(jù)庫中何首烏蛋白靶點。在GeneCards（http://www.genecards.org）與DisGeNet數(shù)據(jù)庫（https://www.disgenet.org/）中檢索AD相關(guān)疾病基因。繪制韋恩圖將獲得的疾病靶點與獲得的何首烏靶點取交集，即得到何首烏改善AD 的潛在作用靶點。

1.4 蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）構(gòu)建與關(guān)鍵作用靶點篩選

將上述得到的潛在作用靶點導(dǎo)入STRING（www.string-db.org）網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫中[7]，設(shè)置篩選參數(shù)，選擇物種為“homo sapiens”，將交互得分最高置信度設(shè)置為≥0.7，隱藏游離靶點，其余參數(shù)保持默認(rèn)設(shè)置，得到靶蛋白之間的PPI網(wǎng)絡(luò)。將PPI網(wǎng)絡(luò)相互作用信息導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1 軟件中[8]，使用MCODE 插件設(shè)置參數(shù)，Degree Cutoff：2.0、Node Score Cutoff：0.2、K-core：2.0、Max.Depth：100.0，篩選出核心關(guān)鍵靶點網(wǎng)絡(luò)。

1.5 蛋白靶點通路富集分析

基于上述篩選得到的核心關(guān)鍵靶點，使用R 語言，載入ggplot2、clusterProfiler、AnnotationHub、org.Hs.eg.db等程序包對何首烏作用AD的靶點進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG 通路富集分析[9]，并對富集分析的結(jié)果進(jìn)行可視化。

1.6 何首烏“九蒸九曬”法炮制與藥物制備

本實驗依照傳統(tǒng)黑豆汁制“九蒸九曬”炮制方法對何首烏進(jìn)行炮制[10-11]。稱取10 kg 黑豆，加8 倍量水，煎煮4 h，濃縮熬汁約15 kg，黑豆渣再加水煮3 h，熬汁10 kg，合并得黑豆汁約25 kg。用制備好的黑豆汁將100 kg何首烏生品飲片浸潤1 h，后放入常壓蒸箱96 ℃蒸制4 h，取出，攤平置于日光下曝曬6 h，大約至七成干，如此重復(fù)9次，依次分別制備得到“一蒸一曬”制何首烏（Process-1，P1），“二蒸二曬”制何首烏（Process-2，P2）至“九蒸九曬”制何首烏（Process-9，P9）9 個程度的炮制品與何首烏生品（Raw-0，R0），均按比例留樣備用。

取何首烏R0，P3，P6與P9四種藥材各10 kg，加入8倍量水，浸潤1 h，煮制1.5 h過濾藥液，何首烏藥渣再加入8倍量水煎煮1.5 h，合并藥液，減壓濃縮至約1.5 g（生藥）/g的流浸膏狀態(tài)，稱重準(zhǔn)確計算生藥重量與流浸膏重量比值，低溫保存待用。取SD 大鼠以體重為依據(jù)進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組化分組分為5 組，6 只/組，雌雄各半，分別灌胃制備的何首烏R0，P3，P6，P9不同炮制程度何首烏流浸膏生理鹽水稀釋藥液，20 g（生藥）/kg，20 mL/kg，2次/d，8:00 am與8:00 pm各1次，連續(xù)5 d，另有一組大鼠灌胃相同容積生理鹽水為空白血清組。末次灌胃1.5 h 后，麻醉，腹主動脈采血，離心分離上層血清。56 ℃水浴滅活血清30 min。同組雌雄大鼠血清混勻后過0.22 nm 濾膜除菌，-20 ℃保存待用[12]。

1.7 篩選含藥血清干預(yù)濃度

在PC12 細(xì)胞達(dá)到對數(shù)生長期時，消化細(xì)胞，以3×105/mL，100 μL/孔將細(xì)胞接種于96 孔板內(nèi)，培育24 h待其貼壁后，分組。換液給藥，100 μL/孔，對照組給予含10%胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）培養(yǎng)基，空白組給予含10%空白小鼠血清培養(yǎng)基，何首烏含藥血清組給予R0，P3，P6，P9 四種炮制程度何首烏的10%（10%含藥血清+0%空白血清），5%（5%含藥血清+5%空白血清），1%（1%含藥血清+9%空白血清）含藥血清，孵育24 h。MTT 法檢測不同炮制品含藥血清對細(xì)胞增殖的影響，以此來篩選合適的含藥血清干預(yù)濃度。

1.8 含藥血清對于模型細(xì)胞增殖的影響

在PC12 細(xì)胞達(dá)到對數(shù)生長期時，將細(xì)胞以3×105/mL，100 μL/孔接種于96 孔板，培育24 h 待其貼壁后，分為空白組、模型組、R0 組、P3 組、P6 組和P9組，將空白組、模型組換為含10%空白大鼠血清培養(yǎng)基，何首烏組換為對應(yīng)炮制程度的含藥血清培養(yǎng)基，孵育18 h，之后將空白組細(xì)胞上清換為無血清DMEM培養(yǎng)基，其余組換為含10 mg/L脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的無血清DMEM 培養(yǎng)基，孵育造模18 h。而后使用MTT 法檢測各組的細(xì)胞活力水平。

1.9 含藥血清對細(xì)胞因子水平和細(xì)胞狀態(tài)的影響

細(xì)胞種板分組和含藥血清干預(yù)步驟與“1.8 項”相同。吸取上層細(xì)胞培養(yǎng)基，離心取上清，按對應(yīng)ELISA細(xì)胞因子試劑盒說明書檢測培養(yǎng)基中IL-1β、IL-6和TNF-α細(xì)胞因子的活力水平。

通過Fluo-3 am探針標(biāo)記細(xì)胞Ca2+，以熒光度值來評估細(xì)胞活力[13]。將對數(shù)生長期PC12 細(xì)胞以3×105/mL，1 mL/孔接種于35 mm 培養(yǎng)皿中，培育24 h待其貼壁，后續(xù)LPS干預(yù)方法同上述實驗。吸棄去細(xì)胞上清，滴加入2 mL PBS 緩沖液吹打潤洗2 次，加入2.5 μM/L Fluo-3 am 探針對細(xì)胞內(nèi)Ca2+離子進(jìn)行染色標(biāo)記。使用倒置熒光顯微鏡，488 nm波長激發(fā)熒光，觀察細(xì)胞熒光強(qiáng)度和細(xì)胞形態(tài)。

1.10 動物給藥及蛋白表達(dá)水平檢測

5 只野生型C57BL/6 設(shè)為正常對照組，將APP/PS1小鼠隨機(jī)分為6組，模型組灌胃生理鹽水，陽性組灌胃給藥0.02 mg/kg石杉堿甲藥液，R0組、P3組、P6 組、P9 組分別灌胃不同炮制程度何首烏水煎液，10 g（生藥）/kg，灌胃容積：20 mL/kg，1 次/d，連續(xù)180 d。

180 d實驗終點處死APP/PS1小鼠，經(jīng)心臟灌流4℃生理鹽水，取腦。切取含海馬部分的腦組織，采用蛋白免疫印跡法（Western Blotting，WB）對小鼠腦組織中IL-1β、TNF-α、IL-6 蛋白相對表達(dá)水平進(jìn)行檢測。使用BCA蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量，稀釋調(diào)節(jié)蛋白濃度，使后續(xù)電泳上樣體積為5 μL，蛋白量為30 μg。使用配制10%電泳凝膠，上樣，電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉。依據(jù)預(yù)染蛋白marker所標(biāo)記的不同分子量位置，將PVDF 膜據(jù)實驗中目的蛋白的前期實驗中摸索的分子量位點切割為條帶。一抗稀釋液稀釋抗體，IL-1β，TNF-α，IL-6 和β-actin 的稀釋比例為1∶1 000。搖床4℃孵育過夜，洗膜，加入二抗室溫孵育2 h，洗膜。將ECL顯影液反應(yīng)顯影，化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)曝光拍攝條帶圖像。使用Image Lab軟件處理分析圖像，計算灰度值與相對蛋白表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1 AD發(fā)病機(jī)制與何首烏藥理作用的關(guān)聯(lián)

AD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，多種發(fā)病假說相互關(guān)聯(lián)，研究分析整合了五種流行的致病假設(shè)的研究（表1）；同時研究也整合了何首烏的藥理作用（表2）。何首烏藥理作用與AD發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)如圖1繪制所示。

表1 AD發(fā)病機(jī)制文獻(xiàn)整合表

表2 何首烏藥理作用文獻(xiàn)整合表

圖1 何首烏藥理作用與AD發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)圖

2.2 何首烏作用AD的蛋白靶點

通過TCMIP平臺檢索到何首烏18個主要有效化合物，通過Pharmmapper 預(yù)測得到何首烏可信度≥0.800 的靶點共361 個，在HIT 數(shù)據(jù)庫中篩選得到262 個靶點，二者整合去重復(fù)后得到何首烏作用靶點413 個。GeneCards 數(shù)據(jù)庫檢索得到AD 相關(guān)靶點3 397個，DisGeNet數(shù)據(jù)庫檢索得到AD相關(guān)靶點1 749個。何首烏與疾病集合共有靶點為181個，見圖2。構(gòu)建PPI并通過Cytoscape 的MCODE 插件篩選出核心靶點共88個（圖3），度值前20靶點，見表3。

表3 何首烏改善AD的關(guān)鍵靶點

圖2 藥物與疾病靶點的交集靶點

圖3 PPI網(wǎng)絡(luò)與關(guān)鍵靶點的篩選

2.3 何首烏改善AD靶點的GO/KEGG富集分析

GO富集結(jié)果包括3個模塊，分別為生物學(xué)過程（BP）、細(xì)胞組成（CC）和分子功能（MF）。BP主要涉及細(xì)胞對化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)，對氧化應(yīng)激的反應(yīng)，對脂多糖的反應(yīng)，細(xì)胞對氧化應(yīng)激的反應(yīng)，對細(xì)菌來源分子的反應(yīng)等（圖4）。在KEGG 通路富集分析中，何首烏改善AD主要富集在AGE-RAGE信號通路，脂質(zhì)和動脈粥樣硬化，流體剪切應(yīng)力和動脈粥樣硬化，HIF-1，PI3K-Akt，TNF 等信號通路上（圖5）。

圖4 何首烏改善AD靶點GO富集分析

圖5 何首烏改善AD靶點KEGG富集分析

2.5 何首烏含藥血清對正常細(xì)胞活力的影響

含藥血清干預(yù)濃度篩選實驗結(jié)果如圖6A 所示，結(jié)果表明在10%含藥血清濃度的干預(yù)下，細(xì)胞活力沒有表現(xiàn)出顯著變化差異，5%濃度時P3 顯著高于P6 組，1%濃度干預(yù)的P9 組細(xì)胞活力相較其他組有升高的趨勢。基于上述結(jié)果，在后續(xù)實驗中將采用10%含藥血清作為干預(yù)濃度，在該濃度時R0組，P3 組，P6 組和P9 組細(xì)胞活力無顯著差異，且與細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)時使用的胎牛血清濃度相同，同時可提供較大的藥物劑量。

2.6 何首烏含藥血清對模型細(xì)胞的干預(yù)作用

MTT 法檢測結(jié)果表明（圖6B），模型組的細(xì)胞活力低于對照組（P＜0.01），頁R0 組（P＜0.01），P3 組（P＜0.05），P6 組（P＜0.000 1）和P9 組（P＜0.000 1）細(xì)胞活力水平均顯著高于模型組，且細(xì)胞活力有隨著炮制程度加深而增加的趨勢，P9組細(xì)胞活力顯著高于R0組（P＜0.05）。

2.7 熒光探針標(biāo)記的細(xì)胞狀態(tài)

Flu-3AM 探針標(biāo)記的熒光激發(fā)拍攝圖像如圖6C 所示，在相同曝光增益參數(shù)條件下，觀察到對照組細(xì)胞熒光度值較高，細(xì)胞突觸正常，而模型組細(xì)胞整體熒光度值較暗，僅可見個別細(xì)胞在細(xì)胞核處較亮，細(xì)胞突觸長度變短，R0 組細(xì)胞形態(tài)較模型組有一定轉(zhuǎn)好，P3組，P6組與P9組細(xì)胞整體熒光度值高，細(xì)胞突觸較正常，細(xì)胞狀態(tài)轉(zhuǎn)好。

圖6 不同蒸曬程度何首烏含藥血清對細(xì)胞的干預(yù)作用

2.8 何首烏含藥血清對細(xì)胞因子水平的影響

細(xì)胞上清液所測定的細(xì)胞炎癥因子水平檢測結(jié)果顯示（圖7），模型組IL-1β水平顯著高于空白組（P＜0.01），而R0 組（P＜0.05），P3 組（P＜0.000 1），P6 組（P＜0.001）和P9 組（P＜0.05）IL-1β 水平顯著低于模型組；模型組TNF-α 水平顯著高于空白組（P＜0.000 1），而R0 組，P3 組和P6 組TNF-α 水平有降低的趨勢，其中P6顯著低于模型組（P＜0.05）；與對照組比較，模型組IL-6 水平有升高趨勢，但無顯著差異（P＞0.05）；不同炮制程度何首烏含藥血清組有一定降低趨勢，但無顯著差異（P＞0.05）。

圖7 不同蒸曬程度何首烏含藥血清對PC12細(xì)胞因子水平的影響

2.9 何首烏對AD模型小鼠腦組織炎癥因子的影響

如圖8 所示，模型組的APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織中IL-1β、TNF-α、IL-6 的相對表達(dá)水平較正常對照組顯著升高（P＜0.01）。P3組和P9組小鼠腦組織中IL-1β 的相對表達(dá)水平較模型組顯著降低（P＜0.05）。R0 組，P3 組，P6 組和P9 組TNF-α 的相對表達(dá)水平較模型組顯著降低（P＜0.05），各給藥組IL-6表達(dá)水平有下降趨勢。

圖8 何首烏給藥對小鼠腦組織細(xì)胞因子水平的影響

3 討論

在本研究的文獻(xiàn)整合部分，多種AD 發(fā)病機(jī)制假說相互關(guān)聯(lián)。在現(xiàn)有研究中，β-淀粉樣蛋白假說和Tau 蛋白假說在AD 的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵的誘導(dǎo)作用，Aβ 異常沉積會引起Tau 蛋白異常磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)炎癥，損傷神經(jīng)元細(xì)胞。神經(jīng)炎癥假說和氧化應(yīng)激假說等在導(dǎo)致AD發(fā)病過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。同時，在梳理AD 發(fā)病機(jī)制和何首烏藥理作用的潛在關(guān)聯(lián)后，我們發(fā)現(xiàn)何首烏可以在一些方面改善AD，如可拮抗Aβ 引起的認(rèn)知功能降低，調(diào)節(jié)免疫功能，下調(diào)異常炎癥因子的表達(dá)，減少ROS、自由基等的釋放，起到抗氧化應(yīng)激的作用。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，何首烏可以抑制AChE 的活性，增加ChAT的表達(dá)，從而改善神經(jīng)細(xì)胞之間的信號傳遞。

IL-1β 具有多種功能，它對各種細(xì)胞有多種作用，具有較強(qiáng)的促炎活性，可誘導(dǎo)多種促炎介質(zhì)，如細(xì)胞因子和趨化因子并導(dǎo)致廣泛的炎癥反應(yīng)，IL-1β的局部激活是介導(dǎo)促炎反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)，導(dǎo)致繼發(fā)性炎癥介質(zhì)（包括IL-6）的激活。與IL-1β 相似，TNF-α是一種多效性促炎細(xì)胞因子，屬于TNF配體超家族。TNF-α在調(diào)節(jié)多種發(fā)育和免疫過程中發(fā)揮著不同的作用，包括炎癥、分化、脂質(zhì)代謝和凋亡，與多種疾病有關(guān)，如感染、自身免疫性疾病、癌癥、動脈粥樣硬化、AD等。

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果，探討了何首烏改善AD 的可能機(jī)制。通路富集分析表明，何首烏可通過炎癥反應(yīng)相關(guān)PI3K-Akt，TNF等等信號通路如發(fā)揮改善AD的作用，在PPI網(wǎng)絡(luò)核心靶點中發(fā)現(xiàn)何首烏可以作用于IL-1β、TNF-α和IL-6等靶點。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)神經(jīng)炎癥反應(yīng)在AD 進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。近些年來，更多的研究表明AD 與炎癥密切相關(guān)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，AD 患者的大腦表現(xiàn)出不同程度的炎癥[24]。臨床藥物報告顯示，經(jīng)何首烏湯治療后，AD患者外周血炎癥因子水平趨于預(yù)期，智力記憶表現(xiàn)有所改善。PC12 細(xì)胞是來源于一種可移植的大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤，為一種實驗中常用的神經(jīng)細(xì)胞株。本研究使用LPS 刺激PC12 細(xì)胞造成神經(jīng)炎癥模型，并使用不同蒸曬程度何首烏含藥血清進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果表明，何首烏含藥血清可以改善LPS 造成的細(xì)胞損傷，降低炎癥因子的釋放。同時也發(fā)現(xiàn)，制何首烏改善效果優(yōu)于生何首烏，說明經(jīng)過“九蒸九曬”炮制后何首烏藥效發(fā)生改變。中藥血清藥理學(xué)研究，動物灌胃給予中藥，藥物經(jīng)吸收代謝后進(jìn)入機(jī)體循環(huán)，多次給藥后達(dá)到血藥濃度平衡，采取血液，分離得到含有一定量該藥物成分的含藥血清。將血清用于干預(yù)體外細(xì)胞模型，觀察其作用于細(xì)胞的藥理作用。與細(xì)胞培養(yǎng)體系中直接添加中藥提取物相比，含藥血清實驗可排除中藥及其制劑的多種影響因素（如pH，滲透壓，雜質(zhì)等），使得結(jié)果更加可靠且貼近體內(nèi)實驗[40]。

APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠[41]，可表達(dá)外源性突變的人類早老素（PS1ΔE9）和外源性人鼠淀粉樣前蛋白（APPswe）融合體，其中外源基因所表達(dá)的APPswe 蛋白對β-分泌酶親和力較內(nèi)源性基因表達(dá)的APP蛋白強(qiáng)，故轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)APP蛋白經(jīng)由淀粉樣蛋白代謝途徑的比例會升高，進(jìn)而導(dǎo)致生成Aβ沉積增加，而Aβ異常沉積導(dǎo)致神經(jīng)炎癥，損傷神經(jīng)元細(xì)胞。通過給藥后AD模型小鼠的行為學(xué)得到相當(dāng)程度的改善，通過檢測自發(fā)交替率和物體識別實驗發(fā)現(xiàn)何首烏能夠改善小鼠的認(rèn)知障礙，同時發(fā)現(xiàn)P3與P6對于認(rèn)知的改善作用較好。腦內(nèi)炎癥因子蛋白測定發(fā)現(xiàn)，何首烏可以顯著降低IL-1β和TNF-α因子表達(dá)水平，并有降低IL-6 因子表達(dá)水平的趨勢，制何首烏改善效果有優(yōu)于生品的趨勢。

綜上所述，通過文獻(xiàn)資源整合，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和細(xì)胞動物實驗研究表明何首烏能夠通過不同機(jī)制改善AD癥狀，改善神經(jīng)炎癥癥狀，且實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)生/制何首烏作用效果存在差異，炮制后何首烏改善炎癥反應(yīng)的作用強(qiáng)于何首烏生品。何首烏炮制后成分含量的變化和藥理作用的變化的關(guān)聯(lián)還需要進(jìn)一步的實驗進(jìn)行探究。