胃癌是威脅人類生命健康的主要疾病，在世界惡性腫瘤中發(fā)病率居第5位，死亡率居第3位

。近年來，我國已成為全球胃癌高發(fā)國家，胃癌的發(fā)病率居高不下，目前對于胃癌的治療方式主要是通過手術(shù)切除病灶或化療，但預(yù)后往往較差

。目前臨床認為D2淋巴結(jié)清掃可以作為胃癌的標準術(shù)式

。而腫瘤的大小、位置、分化程度及組織學(xué)分型也會影響胃癌患者的預(yù)后

。隨著分子生物學(xué)研究的發(fā)展，有研究指出分子機制的改變可以影響胃癌預(yù)后，如癌基因的激活、miRNA、腫瘤干細胞表達等

。miRNA是非編碼的小核糖核酸，在眾多細胞活動中起調(diào)節(jié)作用，參與細胞的增殖

。有研究

指出，miR-20a-5p能調(diào)節(jié)正常細胞的生長發(fā)育，可參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展，miR let-7a在胃癌中呈低表達，但其具體功能機制尚不清楚。為了進一步深入探討miR-20a-5p、miR let-7a表達在胃癌患者中的變化情況，以及上述血清表達對胃癌患者1年內(nèi)死亡的預(yù)測價值，本研究選取180例胃癌患者進行探討，以期指導(dǎo)臨床治療，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

選取我院2019年1月至2021年5月收治的180例初診胃癌患者記為癌癥組，另招募同時間段153名健康志愿者記為對照組。癌癥組中男95例，女85例，年齡(60.05±10.11)歲(41～86歲)；管狀腺癌83例，黏液腺癌97例；腸型胃癌78例，彌漫型胃癌102例；膨脹型胃癌104例，浸潤性胃癌76例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期62例，Ⅲ～Ⅳ期118例；未/低分化88例，中/高分化92例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移83例；有遠處轉(zhuǎn)移65例；手術(shù)切除病灶100例，化療80例。對照組中男78名，女75名，年齡(59.75±9.92)歲(40～85歲)。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(

>0.05)。本研究經(jīng)我院醫(yī)院倫理委員會審批通過(審批號：201812-002)。

納入標準：(1)癌癥組符合胃癌診斷標準

，且均為初診患者；(2)對照組均為體檢健康者；(3)均對本研究知情并簽署同意書。

排除標準：(1)有其他可能影響miR-20a-5p、miR let-7a表達的疾病者，如乳腺癌、睪丸惡性腫瘤、食管癌、鼻咽癌等；(2)合并有心、肺、肝、腎等疾病者；(3)患有感染性疾病者，如肺炎、肝炎、流感等；(4)患有慢性病者，如糖尿病、高血壓等；(5)自身免疫性疾病，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等；(6)合并其他部位惡性腫瘤者；(7)合并嚴重心腦血管等重大疾病者，如腦動脈硬化癥、腦梗塞、腦栓塞等；(8)已接受治療或復(fù)發(fā)病例者。

聲樂是一門集藝術(shù)性、知識性、技術(shù)性和實踐性于一體的藝術(shù)門類，是人類用于抒發(fā)情感，交流情感的一種自然而普遍的形式。唱天唱地唱人物，唱哭唱笑唱憤怒，都是唱情。它是一門音樂與語言相結(jié)合的藝術(shù)，通過悅耳的聲音和清晰的語言表達內(nèi)心豐富的感受。無情不唱，不唱無情。這是我們對歌唱的真實感悟。大詩人白居易說：“感人之心，莫先于情?！毖莩叱暮陀^眾感心的藝術(shù)加工過程。歌唱者通過歌唱及表演來將作品中的每一個音符表達出來，也是理解情感——獲得情感——表達情感的過程。由此可見，情感是演唱的靈魂。

癌癥組Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠處轉(zhuǎn)移患者血清miR-20a-5p表達均高于Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠處轉(zhuǎn)移的患者(

<0.05)；癌癥組Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠處轉(zhuǎn)移患者血清miR let-7a表達均低于Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠處轉(zhuǎn)移的患者(

<0.05)(見表2)。

根據(jù)規(guī)范和教科書來看，巖礦石標本電性參數(shù)的測量方法主要分為兩種：一是露頭法，二是標本法。露頭法測量一般多采用露頭小四極法或小極距測深法[2]；標本法測量常用的測量方法主要為蠟封法、雙盆邊架法、標本架法、泥(面)團法[3]。野外生產(chǎn)中多采用標本架法和泥(面)團法。

1.2.1 檢測方法：癌癥組于入院時、對照組于體檢當天，均采集靜脈血3 ml，采用RT-PCR法檢測血清miR-20a-5p、miR let-7a表達，將患者靜脈血置于離心管中，混勻，在4 ℃條件下，3 000 r/min離心10 min，在-108 ℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｔ? ℃條件下，以5 000 r/min進行離心，10 min后取清液，取出血清解凍，溶解，試管中放入300 μl血清，采用北京雷根生物技術(shù)有限公司的Trizol試劑，貨號為R21086-100，提取總RNA，使用由江蘇科晶生物科技有限公司提供的RT-PCR試劑盒，貨號為SD102，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，在-108 ℃的冰箱中保存。根據(jù)生物分類數(shù)據(jù)庫確定miR-20a-5p、miR let-7a的引物序列，內(nèi)參為U6，miR-20a-5p上游序列：5′-ACGTTGTCTAGCTTATCAGACTG-3′，下游序列：5′-AATGGTTGTTCTCCACACTCTC-3′；miR let-7a上游序列：5′-AGTGAACATTCAACGCTGTCGCT-3′，下游序列：5′-CCCATAGGGTACAATCAACGGTCG-3′；U6上游序列：5′-CTGAGATCGGATAGCTA-3′，下游序列：5′-CTGAGATATGCGATAGC-3′。反應(yīng)條件如下：95 ℃預(yù)變性10 min，74 ℃變性15 s，60 ℃退火，進行38個循環(huán)。通過2

法計算血清miR-20a-5p、miR let-7a的相對表達量。

1.2.3 治療和隨訪：參照《胃癌規(guī)范化診療指南(試行)》對患者實施常規(guī)抗腫瘤治療，包括新輔助化療、手術(shù)、行術(shù)后化療放療、維持治療、中醫(yī)藥治療等

。隨訪：通過電話和復(fù)診方式對胃癌患者進行隨訪，每3個月隨訪1次，隨訪1年。

癌癥組1年內(nèi)死亡率為17.78%，Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠處轉(zhuǎn)移、血清miR-20a-5p表達、未遵醫(yī)囑治療均是影響癌癥組1年內(nèi)死亡的危險因素(

=4.076、4.100、4.845、4.968、5.924、4.768，

<0.05)，血清miR let-7a表達是其保護因素(

=0.587，

<0.05)(如表3～4)。

(1)比較癌癥組與對照組血清miR-20a-5p、miR let-7a表達。(2)比較癌癥組不同臨床病理特征患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表達，包括性別、年齡、臨床分期、分化程度、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否有遠處轉(zhuǎn)移。(3)記錄癌癥組1年內(nèi)死亡的影響因素及各影響因素的系數(shù)(

)、標準誤(

)、統(tǒng)計值(

值)、

值、

值及其95%

。(4)分析血清miR-20a-5p、miR let-7a表達對癌癥組1年內(nèi)死亡的預(yù)測價值，其中任何一項指標預(yù)測癌癥組1年內(nèi)死亡即認為聯(lián)合預(yù)測陽性，記錄各指標預(yù)測癌癥組1年內(nèi)死亡的靈敏度、特異度、曲線下面積(

)及其95%

。

2 結(jié)果

血清miR-20a-5p、miR let-7a表達聯(lián)合預(yù)測癌癥組1年內(nèi)死亡的靈敏度、

均高于單獨預(yù)測，特異度與單獨預(yù)測對比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(見表5、圖1)。

1.2.2 臨床病理特征采集：標本采集主要包括患者的性別、年齡、臨床分期、分化程度、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否有遠處轉(zhuǎn)移。具體如下：統(tǒng)計患者的性別、年齡等一般資料；根據(jù)2016年10月國際抗癌聯(lián)盟及美國腫瘤聯(lián)合會頒布的第8版胃癌TNM分期系統(tǒng)

，統(tǒng)計患者的臨床分期資料；結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)、內(nèi)鏡及組織病理學(xué)、影像學(xué)檢查等進行胃癌的分化程度和鑒別診斷；根據(jù)患者的疼痛及其他臨床特征診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠處轉(zhuǎn)移。

2）設(shè)備破損丟失。學(xué)生天天守著一臺臺的設(shè)備，思維活躍的學(xué)生很容易產(chǎn)生過度動手操作的欲望，進行非正常操作，很容易導(dǎo)致設(shè)備損壞，甚至配件丟失。

(1)胡家莊碳酸巖型稀土礦流體包裹體以氣液兩相H2O包裹體為主，均一溫度和鹽度變化范圍與微山稀土礦極具相似性，表明與其具有相似的成礦物理環(huán)境。

癌癥組血清miR-20a-5p表達均高于對照組(

<0.05)，而血清miR let-7a表達低于對照組(

<0.05)(見表1)。

2.1.2 對照藥材溶液的制備 分別取茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)對照藥材各0.8g，加甲醇10mL，超聲處理15min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。

3 討論

近年來，胃癌診斷及治療方面取得了巨大進展，但進展期患者術(shù)后轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的風(fēng)險高。本研究中癌癥組1年內(nèi)死亡率為17.78%，與既往相關(guān)報道

中胃癌1年內(nèi)死亡率17.92%基本相符，提示胃癌1年內(nèi)死亡率高。因此，探討胃癌患者病情進展、預(yù)后的生物學(xué)分子具有重要的臨床意義。

本研究中，癌癥組血清miR-20a-5p表達高于對照組，提示胃癌患者中血清miR-20a-5p表達高。有研究

指出，miR-20a-5p在肝癌、結(jié)腸癌、肺癌腫瘤組織中表達上調(diào)，血漿中均發(fā)現(xiàn)miR-20a-5p的表達升高，并且miR-20a-5p參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠處轉(zhuǎn)移的癌癥患者血清miR-20a-5p表達均高于Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠處轉(zhuǎn)移的患者，提示血清miR-20a-5p表達與胃癌患者臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)。有研究

發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中miR-20a-5p的低表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)。Zhi等

研究表明，miR-20a-5p高表達與胃癌的臨床分期有關(guān)。本研究與該文獻報道一致。羅林等

研究表明，有遠處轉(zhuǎn)移的癌癥患者血清miR-20a-5p表達高。上述研究結(jié)果說明miR-20a-5p的表達可以影響惡性腫瘤患者的病理特征。

本研究還發(fā)現(xiàn)，癌癥組血清miR let-7a表達低于對照組，且Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠處轉(zhuǎn)移患者血清miR let-7a表達均低于Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠處轉(zhuǎn)移的患者，提示胃癌患者中血清miR let-7a表達低，且與胃癌患者臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)。miR let-7a作為應(yīng)用最廣泛的miRNA，在腫瘤的多種病理中發(fā)揮重要作用。在非小細胞肺癌中，miR let-7a可通過靶向作用多個具有促癌作用的基因，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起到關(guān)鍵作用

。miR let-7a能夠抑制內(nèi)皮細胞的活性，阻礙癌組織生長

。有研究

指出，miR let-7a的表達與患者的年齡、性別及腫瘤大小無明顯相關(guān)性，而與胃癌的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者血清miR let-7a的表達顯著高于Ⅰ期。以上研究表明，血清miR let-7a的改變是胃癌發(fā)生的早期事件，可能用于胃癌早期診斷，并有望成為胃癌早期診斷的分子標志物。

本研究還發(fā)現(xiàn)，血清miR-20a-5p、miR let-7a表達聯(lián)合預(yù)測癌癥組1年內(nèi)死亡的靈敏度高于單獨預(yù)測，

也高于單獨預(yù)測，提示血清miR-20a-5p、miR let-7a表達對胃癌近期生存率具有一定的評估價值，臨床上，通過監(jiān)測血清miR-20a-5p、miR let-7a水平，有助于對胃癌患者1年內(nèi)死亡的情況進行早期評估，以便于指導(dǎo)臨床工作者及時制定相關(guān)預(yù)防對策，以控制病情進展，促進患者恢復(fù)。有研究

顯示，胃癌組織中血清miR-20a-5p、miR let-7a表達均可影響患者復(fù)發(fā)率和1年生存率等預(yù)后情況。因此，對胃癌組織中miR-20a-5p、miR let-7a表達的檢測有助于其預(yù)后情況判斷，及時進行干預(yù)以改善胃癌患者的預(yù)后情況。miR let-7a表達影響預(yù)后可能是由于血管位蛋白樣2可促進腫瘤血管生成，進而促進胃癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，而miR-20a-5p可通過調(diào)控雌激素表達而促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，進而影響患者的生存期。

點E運動的路徑長取決于兩個方面：第一是點E的大致路線.點A是定點，PC=PA是不變的關(guān)系，∠PAC=45°是不變的量，所以點C的路線在“以A為端點、在AB左側(cè)、且與AB成45°角的一條射線”上.根據(jù)“平移過程中所有對應(yīng)點的連線一定平行(或在同一直線上)且相等”這一性質(zhì)，點E的運動路徑長轉(zhuǎn)化為點C的運動路徑長；第二是點C的運動范圍，即點C的起點和終點.顯然，點C的起點是點P與點A重合的位置，終點是點P與點B重合的位置.由此最終確定點C的運動路線.

本研究經(jīng)多因素Cox回歸分析顯示，Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠處轉(zhuǎn)移、未遵醫(yī)囑治療均是胃癌1年內(nèi)死亡的影響因素，提示上述因素均可增加胃癌患者近期死亡的風(fēng)險。與既往大量研究

報道結(jié)果一致。胃癌患者血清miR-20a-5p水平與胃癌組織分化程度相關(guān)，胃癌患者病理分化程度受血清癌胚抗原影響，分化程度越低，胃癌惡性潛能越高，患者病情發(fā)展越迅速，且臨床抗腫瘤治療的難度越大，因此患者死亡的風(fēng)險越高；而早期胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與腫瘤大小、浸潤深度等有關(guān)，也會進一步加強死亡風(fēng)險；存在遠處轉(zhuǎn)移患者胃癌組織表皮生長因子受體會異常表達，影響胃癌的發(fā)生與發(fā)展。未遵醫(yī)囑治療也會加重患者病情，增加死亡風(fēng)險。

綜上所述，在胃癌患者中血清miR-20a-5p表達明顯升高，miR let-7a表達低，且與臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移均有關(guān)。血清miR-20a-5p、miR let-7a表達聯(lián)合對胃癌患者1年內(nèi)死亡有預(yù)測價值。

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