譚秋芬 許芳怡 溫坤

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，為了尋找胃癌的治療靶點(diǎn)、監(jiān)測(cè)病情及預(yù)測(cè)預(yù)后，需開展大量的胃癌基礎(chǔ)研究，以期找到敏感、特異的分子標(biāo)志物。多配體聚糖結(jié)合蛋白（Syndecan binding protein，SDCBP）又稱黑色素瘤分化相關(guān)蛋白-9（MDA-9），近年研究表明，其參與了多種癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移信號(hào)傳導(dǎo)，除了在黑色素瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮作用，還在乳腺癌、尿路上皮細(xì)胞癌、腸癌、肝癌等多個(gè)腫瘤中高度表達(dá)[1]。但其與胃癌之間的關(guān)系尚缺乏研究，為此，本研究檢測(cè)不同胃組織中SDCBP的表達(dá)情況，并分析其與胃癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 隨機(jī)抽取2017年1月～2020年10月在我院行胃癌根治術(shù)患者的癌組織及對(duì)應(yīng)的癌旁組織各60份，均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)。所有患者在手術(shù)前均未接受過(guò)放化療、中藥、免疫療法等治療，其中男31例，女29例；年齡42～77歲，平均（58.23±7.62）歲；腫瘤直徑1.3～7.6cm；浸潤(rùn)深度：T0～T2 38例，T3～T4 22例；按2016年AJCC胃癌分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ期37例；腫瘤分化程度：低分化39例，中、高分化21例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。所有標(biāo)本收集后即刻放入10%中性福爾馬林中保存。

1.2 檢測(cè)方法 采用免疫組化染色法檢測(cè)SDCBP表達(dá)水平。組織切片包埋入石蠟，4μm連續(xù)切片，脫蠟、3%H2O2孵育后用磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗，之后進(jìn)行EnvisionTM二步法，試劑盒為北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。其中所用的兔抗人、鼠抗人抗體均為SantaCruz公司產(chǎn)品，DAB顯色試劑盒為南京博奧生物科技公司產(chǎn)品。

1.3 結(jié)果判定 由兩位觀察者采用雙盲法對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定，隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，SDCBP為細(xì)胞漿染色，按半定量積分方法：①染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)著色記0分，黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分；②細(xì)胞陽(yáng)性率評(píng)分：視野中陽(yáng)性細(xì)胞所占的比例≤5%計(jì)0分，占6%～25%計(jì)1分，占26%～50%計(jì)2分，占51～75%計(jì)3分，＞75%計(jì)4分。最后將①和②相乘，0～1分為-，2～5分為+，6～8分為++，9～12分為+++。根據(jù)Fromowitz標(biāo)準(zhǔn)：-和+為低表達(dá)，++、+++為高表達(dá)。

1.4 隨訪 本組患者隨訪最短11個(gè)月，最長(zhǎng)50個(gè)月，平均隨訪（32.72±6.52）個(gè)月，無(wú)一例患者死于胃癌以外原因。無(wú)病生存期定義為自確診日起至疾病復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移之間的時(shí)間。總生存期定義為自確診日起至末次隨訪之間的時(shí)間。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)和方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用±s表示，多組間比較采用多因素方差分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，行χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。采用Log-rank進(jìn)行生存分析，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析影響胃癌預(yù)后的相關(guān)因素。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同胃組織中SDCBP的表達(dá)情況 SDCBP在胃癌組織中的高表達(dá)率為55.0%（33/60），在癌旁組織中的高表達(dá)率為3.3%（2/60），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同胃組織中SDCBP的表達(dá)情況（n）

2.2 SDCBP表達(dá)與胃癌臨床特征的關(guān)系 SDCBP在胃癌組織中的表達(dá)水平與患者的性別、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化程度無(wú)關(guān)（P＞0.05），與年齡、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。見表2。

表2 SDCBP表達(dá)與胃癌臨床特征的關(guān)系[n（%）]

2.3 SDCBP不同表達(dá)水平患者的生存情況 SDCBP高表達(dá)組的中位無(wú)病生存時(shí)間和中位總生存時(shí)間分別為19個(gè)月、28個(gè)月，無(wú)病生存率和總生存率分別為15.15%（5/33）、36.36%（12/33）；SDCBP低表達(dá)組的中位無(wú)病生存時(shí)間和中位總生存時(shí)間分別為21個(gè)月、34個(gè)月，無(wú)病生存率和總生存率分別為29.63%（8/27）、66.67%（18/27）。經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，SDCBP高表達(dá)組與低表達(dá)組的無(wú)病生存率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而SDCBP高表達(dá)組的總生存率明顯低于低表達(dá)組（P＜0.05）。

2.4 影響胃癌預(yù)后的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析 單因素Cox回歸分析顯示，浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者無(wú)病生存期的危險(xiǎn)因素，經(jīng)進(jìn)一步多因素Cox回歸分析顯示，TNM分期是影響胃癌患者無(wú)病生存期的危險(xiǎn)因素。見表3。

表3 胃癌患者無(wú)病生存期的單因素及多因素Cox回歸分析

單因素Cox回歸分析顯示，浸潤(rùn)深度、TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SDCBP表達(dá)是影響胃癌患者總生存期的危險(xiǎn)因素，經(jīng)進(jìn)一步多因素Cox回歸分析顯示，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者總生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見表4。

表4 胃癌患者總生存期的單因素及多因素Cox回歸分析

3 討論

早期胃癌經(jīng)規(guī)范治療一般預(yù)后較好，但臨床上確診時(shí)多為局部進(jìn)展期胃癌，預(yù)后不佳，術(shù)后易復(fù)發(fā)，5年生存率不到15%[2]。我國(guó)有超過(guò)70萬(wàn)的胃癌患者在診斷時(shí)已進(jìn)入進(jìn)展期[3]，因此患者不得不面臨腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡風(fēng)險(xiǎn)。近些年人們一直在探索新的分子標(biāo)志物，以期提高胃癌早期診斷、靶向治療及預(yù)后判斷的水平。

SDCBP是一種具有多種生物活性的支架-PDZ結(jié)構(gòu)域蛋白。PDZ結(jié)構(gòu)域是許多支架蛋白的共同結(jié)構(gòu)域，可促進(jìn)蛋白質(zhì)支架和蛋白復(fù)合物組裝，不同的蛋白復(fù)合物構(gòu)型可形成很多信號(hào)和調(diào)控通路，對(duì)很多細(xì)胞過(guò)程發(fā)揮重要作用。SDCBP在細(xì)胞質(zhì)中可與多種跨膜蛋白C-末端的結(jié)構(gòu)域結(jié)合，從而影響細(xì)胞形狀及蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和轉(zhuǎn)錄因子的激活等。SDCBP的高表達(dá)與多種惡性腫瘤相關(guān)，可通過(guò)與細(xì)胞膜受體蛋白的結(jié)合和分離，參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的運(yùn)輸、細(xì)胞骨架的構(gòu)建和轉(zhuǎn)錄因子的激活，從而提高腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤血管形成能力。有研究表明SDCBP在正常人類細(xì)胞和不同來(lái)源的人類癌細(xì)胞中表達(dá)時(shí)是一個(gè)前轉(zhuǎn)移基因，具有誘導(dǎo)侵襲和轉(zhuǎn)移的能力[4]。癌癥基因組圖譜（The cancer genome atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫(kù)顯示，與SDCBP低表達(dá)的腫瘤相比，SDCBP高表達(dá)的患者預(yù)后較差，生存率較低[5]。也有研究顯示SDCBP在調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附過(guò)程中起核心作用，且SDCBP還參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞表面的靶向作用、神經(jīng)突觸傳遞和軸突生長(zhǎng)[6]。

本研究結(jié)果顯示，SDCBP在胃癌組織與癌旁組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證明SDCBP與胃癌關(guān)系密切。目前SDCBP對(duì)腫瘤影響的機(jī)制尚未完全清楚，在黑色素瘤和膠質(zhì)瘤中，SDCBP可通過(guò)原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src/p38 MAPK信號(hào)通路參與NF-κB活化，從而上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）等NF-κB靶基因的表達(dá)，這是一種參與腫瘤細(xì)胞侵襲的關(guān)鍵分泌金屬蛋白酶[7]。本研究發(fā)現(xiàn)≥60歲胃癌患者的SDCBP高表達(dá)比例明顯高于＜60歲者，同時(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度為T3～T4期患者的SDCBP高表達(dá)比例明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T0～T2者，而不同性別、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化程度的胃癌患者SDCBP表達(dá)水平無(wú)顯著性差異。提示SDCBP高表達(dá)對(duì)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要作用，胃癌導(dǎo)致的壽命損失隨年齡增加呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，在70～80歲達(dá)到高峰[8]，而SDCBP在老年胃癌患者中的表達(dá)升高，促進(jìn)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移，可能是老年患者壽命損失的一個(gè)潛在內(nèi)因。

本研究結(jié)果顯示SDCBP的表達(dá)對(duì)胃癌患者的總生存時(shí)間產(chǎn)生影響。經(jīng)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析，排除了SDCBP是影響胃癌患者無(wú)病生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而單因素分析中SDCBP是影響胃癌患者總生存期的危險(xiǎn)因素，說(shuō)明SDCBP作為促基因在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，它可能成為評(píng)價(jià)胃癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的一個(gè)有價(jià)值的指標(biāo)，為指導(dǎo)臨床治療提供新的靶點(diǎn)。本研究局限性，任何一種基因都不可能是決定腫瘤轉(zhuǎn)移的唯一因素，且多因素分析排除了SDCBP是總生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此需要進(jìn)一步的研究與探索，將SDCBP與其他相關(guān)因素結(jié)合起來(lái)，以提高臨床診斷價(jià)值。

綜上，本研究初步揭示了SDCBP在胃癌組織中的表達(dá)上調(diào)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，由于樣本數(shù)較少，其對(duì)胃癌高危預(yù)警、早期診斷、靶向治療及預(yù)后判斷的價(jià)值尚需大樣本、高質(zhì)量研究進(jìn)一步探討。