王曉芹,浮飛翔,于 暢,劉 錦,佟宇浩,湯 芳
病毒性呼吸道感染是指由多種病毒引起的急性呼吸道感染(acute respiratory trac tinfection,ARTI)總稱,引起病毒性呼吸道感染的病原體種類較多,如流感病毒(influenza viruses, IFV)、人副流感病毒(human parainfluenza viruses, HPIV)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)、人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)、人偏肺病毒(human metapneumovirus,HMPV)、人博卡病毒(human bocavirus,HBoV)、人腺病毒(human Adenovirus, HAdV)、人冠狀病毒(human Coronavirus, HCoV)等。本研究擬對某部駐訓(xùn)期間發(fā)熱呼吸道綜合征(febrile respiratory syndrome, FRS)患者進行病毒性呼吸道感染病原學(xué)監(jiān)測,以了解致病病原體種類和發(fā)病規(guī)律,為開展部隊ARTI的臨床診斷和預(yù)防控制提供科學(xué)依據(jù)。
1.1 對象 采用重大傳染病防治科技重大專項傳染病監(jiān)測平臺《發(fā)熱呼吸道綜合征監(jiān)測技術(shù)方案》中的FRS病例定義:(1)急性感染表現(xiàn)(至少符合下列任何一項),發(fā)熱(從發(fā)病開始有報告和記錄),WBC升高或降低或WBC分布異常,寒顫,體溫降低(考慮年齡);(2)呼吸道臨床表現(xiàn)(至少符合下列任一項),咳嗽(新發(fā)或咳嗽加重),咳痰,氣短,聽診呼吸音異常(濕啰音、干啰音、哮鳴音、濁音),呼吸急促,胸痛;(3)胸部X線片提示肺部炎性改變(如肺部片狀陰影或肺實變影等)。本研究將某部駐訓(xùn)期間(2019年8-11月)符合FRS患者定義的人群共101例納入調(diào)查對象,該部駐地為南部沿海地區(qū),屬于亞熱帶季風(fēng)氣候,夏季高溫多雨,冬季溫和少雨。
1.2 調(diào)查方法 采用回顧性調(diào)查和現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查方法,由專業(yè)流調(diào)人員對FRS病例進行面對面的問卷調(diào)查,內(nèi)容包括:(1)基本人口統(tǒng)計學(xué)信息特征:年齡、性別、籍貫、部別等;(2)流行病史:調(diào)查對象與FRS患者的密切接觸史、外出史等;(3)臨床癥狀與檢查:發(fā)熱、咳嗽、寒顫、流涕、咽痛、乏力、肌肉酸痛、呼吸困難、腹瀉等臨床癥狀;(4)藥物治療史:藥物名稱、用法、用量、療程;(5)疫苗接種史:疫苗種類、接種時間。
1.3 檢測方法 在標本采集、運輸及實驗室工作過程中,均按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》等相關(guān)規(guī)定,做好生物安全工作。
1.3.1 主要試劑與儀器 咽拭子標本采集系統(tǒng)(BD Universal Viral CulturetteTM Transport System);核酸提取試劑盒(QIAampMiniElute Virus Spin DNA/RNA kit,Qiagen);逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(SuperScript Ш RT,Invitrogen);引物、探針(上海生工公司);PCR擴增儀(Eppendorf);實時定量PCR擴增儀(7500,ABI)。
1.3.2 標本采集 采集101例FRS患者的臨床標本。用拭子擦拭咽后壁及扁桃體隱窩、側(cè)壁等處,反復(fù)擦拭3~5次,收集黏膜細胞,立即送檢。血液標本:使用真空EDTA抗凝管和非抗凝管采集血液標本各5 ml,存放于-80 ℃冰箱待測。
1.3.3 標本處理 (1)咽拭子標本處理:在安全柜內(nèi)打開咽拭子管蓋,用滅菌止血鉗夾住拭子枘,攪拌數(shù)次并擠出棉拭子上的液體,保證細胞充分脫落,提高檢出率,并分裝管中用于核酸檢測的標本。(2)血液標本處理:抗凝血提取外周血單個核細胞(PBMC),-80 ℃凍存?zhèn)溆茫环强鼓M行血清分離、分裝,-80 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>
1.3.4 核酸檢測 RNA病毒檢測采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)方法,將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,DNA病毒檢測采用PCR方法。將核酸(RNA或DNA)分別進行IFV(IFV-A、IFV-B和IFV-C)、HPIV(HPIV-1、HPIV-2、HPIV-3和HPIV-4)、HRV、RSV(RSV-A和RSV-B)、HMPV、HBoV、HAdV、HCoV(HCoV-229E、HCoV-OC43 HCoV-HKU1和HCoV-NL63)檢測。操作方法按照試劑盒說明書及實驗室標準化流程(SOP)操作。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 25.0軟件進行數(shù)據(jù)處理,計數(shù)資料采用%表示,不同組別之間的差異比較采用檢驗,<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1 基本情況 共納入FRS病例101例,均為男性,年齡18~45歲,平均(22.81±4.26)歲,其中18~29歲97例(96.04%),戰(zhàn)士98例(97.03%),干部3例 (2.97%)。
2.2 病原檢測情況 101例FRS咽拭子標本中,檢出病毒陽性標本37例,陽性率為36.63%,其中IFV陽性率最高26.73%(27例),其后依次為HPIV 3.96%(4例)、RSV 2.97%(3例)、HRV 2.97%(3例)、HMPV 1.98%(2例);HBoV、HAdV、HCoV均未檢出陽性標本。27例IFV陽性標本中,IFV-B 26例,IFV-A H3N2 1例。4例HPIV陽性標本中,HPIV-3 3例,HPIV-11例。3例RSV陽性標本均為RSV-A。37例陽性標本中,2例標本存在混合感染,檢出率為5.41%,分別為IFV-B和RSV、IFV-B和HRV混合感染。
2.3 臨床癥狀情況 101例FRS病例中,均出現(xiàn)發(fā)熱癥狀(≥37.5 ℃),平均體溫(38.4±0.50)℃,均未出現(xiàn)腹痛、腹瀉、嘔吐等消化道癥狀,無重癥病例報道。部分病例伴有咽痛(28.71%)、咳嗽(28.71%)、頭痛(35.64%)、乏力(49.50%)、咳痰(14.85%)、寒顫(21.78%)、流涕(23.76%)、肌肉酸痛(38.61%)、扁桃體腫大(12.87%)等癥狀,且咳嗽(=26.968,=0.000)、咽痛(=26.968,=0.000)、乏力(=12.865,=0.000)、頭痛(=17.901,=0.000)、肌肉酸痛(=10.704,=0.001)5種癥狀在陽性病例組與陰性病例組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。
FRS是一組以發(fā)熱、咳嗽、咳痰、寒顫等具有相似臨床癥狀和體征的呼吸系統(tǒng)疾病,其中ARTI是人類最常見的傳染性疾病之一,90%以上的ARTI是由病毒引起的。病毒性呼吸道感染具有發(fā)病率高、傳染性強、傳播速度快、流行范圍廣、病原體不斷變化的特點,感染率在不同國家或地區(qū)、不同時間或季節(jié)、不同人群中分布特征有所不同,特別是一系列新發(fā)現(xiàn)的病原體也被認為與ARTI相關(guān),如SARS-CoV2、MERS-CoV、H7N9禽流感和SARS-CoV等,疾病的迅速傳播給人類健康和世界經(jīng)濟造成巨大負擔(dān)。部隊是一個特殊群體,由于人群聚集性、流動性、多元性等特點,很容易發(fā)生疫情并造成區(qū)域性暴發(fā)流行。因此,開展駐訓(xùn)部隊官兵呼吸道感染病原學(xué)監(jiān)測,對提高部隊戰(zhàn)斗力具有重要意義。
3.1 FRS病例臨床特點分析 本研究結(jié)果顯示,F(xiàn)RS所有病例均有發(fā)熱癥狀,以咳嗽、咽痛、頭痛、乏力、肌肉酸痛等癥狀為主,與病原檢測陰性病例相較,病原陽性病例更容易出現(xiàn)上述癥狀,提示病原診斷不明確時,加強對癥治療是有效和必要的。由于不同病原所致的ARTI臨床癥狀相似,對于陰性病例可重復(fù)檢測或擴大病原譜檢測范圍,尋找感染病原,為鑒別診斷、臨床救治和預(yù)防控制提出針對性更強的建議。
3.2 FRS病例病原譜監(jiān)測分析 本研究結(jié)果顯示,101例FRS病例標本中,呼吸道病毒陽性檢出率為36.63%,主要優(yōu)勢毒株與駐地流感監(jiān)測結(jié)果一致??v觀全國FRS調(diào)查顯示,IFV也是引起我國大部分地區(qū)FRS最常見的病毒性病原體和呼吸道感染的主要原因。IFV感染病例在嚴重急性呼吸道感染(severe acute respiratory infection, SARI)病例數(shù)中約占13%,IFV高峰期有47%的SARI病例為IFV感染者。我國IFV具有明顯地域性、季節(jié)性特征,南方地區(qū)存在春季、夏季和冬季三個流行高峰,北方地區(qū)存在春季、冬季兩個流行高峰,優(yōu)勢病毒株為IFA-H3N2、IFA-H1N1、IFB周期性更替流行或共同流行。部隊ARTI病原學(xué)檢測發(fā)現(xiàn),呼吸道病毒陽性檢出率為14.79%~44.81%,其中以IFB、IFA、HAdV檢出率最高。國家CDC對ARTI病原學(xué)監(jiān)測表明,呼吸道病毒陽性檢出率為34.8%,其中IFV檢出率最高34.8%,5歲以下兒童最高46.9%,5~17歲降至30.2%,成年為26.9%,老年25.1%。馮錄召在ARTI住院病例中檢測發(fā)現(xiàn),IFV是成年和老年人群的優(yōu)勢病原,RSV是2歲以下兒童最常見的病毒性病原,年齡組越小,病毒多樣性越明顯。
3.3 FRS病例監(jiān)控及預(yù)防建議 基于本次調(diào)查,提出以下建議:(1)在部隊集訓(xùn)時,要及時掌握駐地地理環(huán)境、氣候條件及疾病流行情況,監(jiān)測分析訓(xùn)練期間可能出現(xiàn)的FRS疫情,加強衛(wèi)生防疫力量配置,嚴格落實體溫監(jiān)測、疫情報告、消毒隔離、預(yù)防用藥等制度,提高呼吸道傳染病防控意識和能力;(2)新兵入伍后,訓(xùn)練強度較大,生活作息緊張,心理負擔(dān)較重,對駐地氣候條件及環(huán)境不適應(yīng),是呼吸道傳染病防控重點人群,應(yīng)該加強對新兵健康宣教,采取預(yù)防性措施;(3)出現(xiàn)FRS集中暴發(fā)時,建議采用高通量檢測技術(shù)和宏基因組測序技術(shù)等檢測方法以便更全面地檢測呼吸道病原菌,如低熱者發(fā)病3~6 d內(nèi)采集標本可能更有利于病原體的檢出,更有利于達到防控呼吸道傳染病、指導(dǎo)臨床用藥及預(yù)測預(yù)警目的。