趙文欣，李佳潞，項 戀，程 磊，張晶晶，杜庭婉，馬 玲

西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室（瀘州 646000）

非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一種受代謝、基因、環(huán)境和腸道微生物等多種因素調(diào)節(jié)的代謝應(yīng)激性肝臟疾病，主要表現(xiàn)為肝臟脂肪沉積與炎癥壞死等[1]。NAFLD 患病率不僅在歐美等發(fā)達(dá)國家逐年上升，在我國發(fā)病率亦逐年上升，目前NAFLD 已經(jīng)超越病毒性肝炎成為全球患病率最高的慢性肝病[2]，是威脅全世界人民健康的重大公共衛(wèi)生問題。2008 年至2018 年共10 年間，我國NAFLD 患病率從18%增長至29.2%，預(yù)計2030 年患病人數(shù)將增至3.1458 億例；同期北美患病率為18.8%，在超重人群中患病率為28%；在意大利，78.8%的代謝綜合征病人存在NAFLD[1,3-5]。維生素D 是一種脂溶性維生素，分為維生素D2和維生素D3，主要參與調(diào)節(jié)機體鈣、磷代謝和糖脂代謝。經(jīng)膳食攝入或皮膚合成的維生素D3在肝臟被羥化為25(OH)D3后釋放入血，經(jīng)由維生素D 結(jié)合蛋白攜帶進(jìn)入腎臟進(jìn)一步被羥化為活性1,25(OH)2D3并重新釋放入血，到達(dá)相應(yīng)靶器官發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。人群研究發(fā)現(xiàn)，維生素D 缺乏是NAFLD 的一項危險因素[6-8]，其缺乏時可加重肝臟的胰島素抵抗（insulin resistance，IR）、脂質(zhì)沉淀、壞死性炎癥和進(jìn)展性纖維化等，這可能經(jīng)由下調(diào)參與脂質(zhì)代謝的維生素D受體（vitamin D receptor，VDR）的表達(dá)[9]，及下調(diào)肝臟中與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)而實現(xiàn)[10-11]。故本研究采用維生素D3干預(yù)高脂飲食誘導(dǎo)建立的NAFLD 模型大鼠，探究其是否可以改善NAFLD的脂質(zhì)代謝和肝細(xì)胞損傷情況。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF 級雄性Wistar 大鼠48 只，5 w 齡，體重140～150 g，由成都達(dá)碩實驗動物有限公司供應(yīng)，實驗單位使用許可證號：SYXK（川）2018-065，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2015-030。大鼠飼養(yǎng)于西南醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心屏障系統(tǒng)，環(huán)境溫度19 ℃～26 ℃、濕度40%～70%、12 h/12 h明暗交替，自由攝食飲水，每3 d更換一次墊料。動物實驗方案得到了西南醫(yī)科大學(xué)動物倫理委員會的批準(zhǔn)許可。

1.2 實驗飼料

高脂飼料及標(biāo)準(zhǔn)對照飼料均由北京博泰宏達(dá)生物技術(shù)有限公司提供。高脂飼料HDOO1 配方為：25.4%脂肪，2%膽固醇，24.2%蛋白質(zhì)，42.1%碳水化合物，5.8%粗纖維，1.7%鈣，1.1%磷；能量占比4.7 kcal/gm。標(biāo)準(zhǔn)對照飼料配方為：4.5%脂肪，21.1%蛋白質(zhì)，60.6%碳水化合物，7.7%粗纖維，1.8%鈣，1.2%磷；能量占比3.6 kcal/gm。

1.3 試劑與儀器

1.3.1 試劑與試劑盒 維生素D3（粉劑，67-97-0，美國Sigma）；玉米油（8001-30-7，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；游離脂肪酸試劑盒（比色法，A042-1-1，南京建成生物工程研究所）；甘油三酯試劑盒（微板法，A110-1-1，南京建成生物工程研究所）；25(OH)D3的ELISA試劑盒（E-EL-0015c，Elabscience）。

1.3.2 儀器 全自動生化分析儀（日本Olympus AU680）；轉(zhuǎn)輪式切片機（徠卡-2016，德國）；TSJ-Ⅱ型全自動封閉式組織脫水機（常州市中威電子儀器有限公司）；BMJ-Ⅲ型包埋機（常州郊區(qū)中威電子儀器廠）；PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司）；數(shù)碼三目攝像顯微鏡（BA400Digital，麥克奧迪實業(yè)集團有限公司）；生物顯微鏡CX40（配數(shù)碼相機）等。

1.4 大鼠造模、動物分組及干預(yù)

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后根據(jù)體重進(jìn)行分層，按隨機數(shù)字大小進(jìn)行分籠，分為對照組（CON 組，n=16）和模型組（HFD 組，n=32），分別應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)對照飼料和高脂飼料喂養(yǎng)6 w，第6 w末兩組分別解剖8只大鼠，以觀察到肝組織HE 染色切片中脂肪變性的肝細(xì)胞占單位面積的1/3 以上和血液生化指標(biāo)中TC 和TG 水平較CON組明顯增加[12]作為判斷造模成功的指標(biāo)，剩下的HFD組分別以8 只為一組分成3 個處理組，分別是模型組（HFD 組，n=8）、干預(yù)組（HFD+VD3組，n=8）、溶媒對照組（HFD+Oil組，n=8），各組給予飼料的方式和時間不變，自由攝食、飲水。第7～13 w 每日16:00，維生素D3干預(yù)組以濃度為2.5 μg/mL 溶于玉米油的維生素D3[12.5 μg/(kg·bw)]灌胃，溶媒對照組直接灌胃玉米油[5 mL/(kg·bw)]，干預(yù)期間觀察大鼠生命體征及體重變化。

1.5 動物處置和樣本制備

標(biāo)準(zhǔn)對照飼料和高脂飼料喂養(yǎng)至第6 w時，所有大鼠禁食不禁水12 h，次日從CON 組和HFD 組各隨機抽取8 只大鼠采用戊巴比妥鈉[1 g/(kg·bw)]麻醉，心臟取血，血清離心后于-80 ℃貯存，收集肝臟并稱量濕重，取肝最大葉的同一部位，肝組織與多聚甲醛溶液（1:10）常溫固定保存，待病理組織觀察。維生素D3干預(yù)至第13 w時以同樣方法收集血清和肝臟。

1.6 體重、肝重、肝臟指數(shù)測定

從實驗開始到結(jié)束，所有大鼠每隔1 d 測一次體重。取肝臟，用預(yù)冷的生理鹽水清洗后，濾紙拭干，采用萬分之一天平稱量肝重，Lee’s指數(shù)=[體重(g)1/3×1 000]/體長(cm)，肝臟指數(shù)（%）=肝臟重量（g）/體重（g）×100%。

1.7 血生化指標(biāo)及TG、FFA和25(OH)D3含量的測定

采用Olympus AU680 全自動生化分析儀測定血清生化指標(biāo)：總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），肝功能指標(biāo)：天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）水平。采用甘油三酯試劑盒與游離脂肪酸試劑盒測定肝臟組織的甘油三酯（TG）與游離脂肪酸（FFA）含量。采用ELISA 試劑盒測定血清25(OH)D3含量。所有操作按說明書進(jìn)行。

1.8 肝臟組織病理檢查

委托成都里來生物科技有限公司進(jìn)行肝臟組織HE染色并鏡檢觀察肝臟組織病理學(xué)改變。

1.9 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）描述，滿足參數(shù)檢驗條件的用方差分析（多組間）或t檢驗（兩組間），α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 高脂飲食干預(yù)6 w 對大鼠血脂、病理組織形態(tài)學(xué)的影響

2.1.1 高脂飲食干預(yù)6 w對大鼠血脂的影響 高脂飲食干預(yù)6 w 后，HFD 組血清TG、TC 和LDL-C 水平較CON組均顯著增高（P＜0.05），血清HDL-C水平較對照組略有提高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1、圖1。

表1 高脂飲食干預(yù)6 w對大鼠血脂的影響（，n=8）Table 1 Effects of high-fat diet intervention for 6 weeks on bloods lipids in rats（，n=8）

表1 高脂飲食干預(yù)6 w對大鼠血脂的影響（，n=8）Table 1 Effects of high-fat diet intervention for 6 weeks on bloods lipids in rats（，n=8）

注：a表示與CON組相比，P ＜0.05

圖1 高脂飲食干預(yù)6 w對大鼠血脂的影響（，n=8）Figure 1 Effects of high-fat diet intervention for 6 weeks on blood lipids in rats（，n=8）

2.1.2 高脂飲食干預(yù)6 w 對大鼠病理學(xué)形態(tài)的影響HE染色后，顯微鏡下可觀察到CON組肝臟組織結(jié)構(gòu)較為清晰，被膜完整，肝小葉分葉不明顯，肝細(xì)胞呈放射狀排列，少量肝細(xì)胞內(nèi)可見圓形透明脂滴，其他未見明顯病理改變；HFD組肝小葉分葉不明顯，脂肪變性的肝細(xì)胞占單位面積的1/3以上，見變性細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)大量圓形透明脂滴聚集，脂滴大小不等，肝細(xì)胞氣球樣變，門管區(qū)周圍或肝小葉內(nèi)不等量的肝細(xì)胞小灶狀壞死及少量炎細(xì)胞浸潤，成模率達(dá)到100%，見圖2～5。

圖2 高脂飲食干預(yù)6 w肝臟HE染色：CON(×200)Figure 2 Liver HE staining after high-fat diet intervention for 6w:CON(×200)

圖3 高脂飲食干預(yù)6 w肝臟HE染色：HFD(×200)Figure 3 Liver HE staining after high-fat diet intervention for 6w:HFD(×200)

圖4 高脂飲食干預(yù)6 w肝臟HE染色：CON(×400)Figure 4 Liver HE staining after high-fat diet intervention for 6w:CON(×400)

圖5 高脂飲食干預(yù)6 w肝臟HE染色：HFD(×400)Figure 5 Liver HE staining after high-fat diet intervention for 6w:HFD(×400)

2.2 維生素D3干預(yù)7 w 對NAFLD 大鼠血脂、肝功、病理學(xué)形態(tài)等的影響

2.2.1 維生素D3干預(yù)7 w 對NAFLD 大鼠肝重、體重、肝指數(shù)、Lee’s指數(shù)的影響 與CON組相比，HFD組大鼠體重、肝重、肝指數(shù)、Lee’s指數(shù)均顯著升高（P＜0.05）。與HFD+Oil 組相比，HFD+VD3組肝指數(shù)明顯降低（P＜0.05），Lee’s指數(shù)和肝重降低，體重上升，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與HFD組相比，HFD+VD3組上述四項指標(biāo)均有降低；HFD+Oil 組肝重和體重降低，肝指數(shù)和Lee’s指數(shù)上升，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。綜上，不可以忽略溶媒對于大鼠的影響，即不能用HFD組數(shù)據(jù)代替HFD+Oil 組，故后續(xù)數(shù)據(jù)僅比較HFD+Oil組與HFD+VD3組之間的差異以觀察干預(yù)組所產(chǎn)生的效應(yīng)，見表2、圖6。

表2 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝重、體重、肝指數(shù)、Lee’s指數(shù)的影響（，n=8）Table 2 Effects of VD3 intervention for 7 w on liver index，body index，liver index and Lee’s index in NAFLD rats（，n=8）

表2 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝重、體重、肝指數(shù)、Lee’s指數(shù)的影響（，n=8）Table 2 Effects of VD3 intervention for 7 w on liver index，body index，liver index and Lee’s index in NAFLD rats（，n=8）

注：a表示與CON組相比，P ＜0.05；aa 表示與CON組相比，P ＜0.001；b表示與HFD+Oil組相比，P ＜0.05

圖6 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝重、體重、肝指數(shù)、Lee’s指數(shù)的影響（，n=8）Figure 6 Effects of VD3 intervention for 7 w on liver index，body index，liver index and Lee’s index in NAFLD rats（，n=8）

2.2.2 維生素D3干預(yù)7 w 對NAFLD 大鼠血脂的影響與CON 組相比，HFD 組血清TG、HDL-C 水平均顯著降低（P＜0.001），LDL-C水平明顯升高（P＜0.001），TC水平有一定程度的下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與HFD+Oil 組相比，HFD+VD3組血清TG、TC、LDL-C 水平均明顯降低（P＜0.001），HDL-C 水平有下降但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3、圖7。

表3 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDLC的影響（，n=8）Table 3 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum level of TG，TC，HDL-C and LDL-C in NAFLD rats(，n=8）

表3 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDLC的影響（，n=8）Table 3 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum level of TG，TC，HDL-C and LDL-C in NAFLD rats(，n=8）

注：a 表示與CON組相比，P ＜0.05；aa 表示與CON組相比，P ＜0.001；b 表示與HFD+Oil 組相比，P ＜0.05；bb 表示與HFD+Oil 組相比，P ＜0.001

圖7 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C的影響（，n=8）Figure 7 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum levels of TG，TC，HDL-C and LDL-C in NAFLD rats(，n=8）

2.2.3 維生素D3干預(yù)7 w 對NAFLD 大鼠肝組織脂質(zhì)含量的影響與CON組相比，HFD組大鼠的肝組織TG、FFA 含量升高（P＜0.05）。與HFD+Oil 組相比，HFD+VD3組上述兩指標(biāo)均顯著降低（P＜0.001），見表4、圖8。

表4 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝組織TG、FFA含量的影響（，n=8）Table 4 Effects of VD3 intervention for 7 w on TG，F(xiàn)FA level in liver tissue of NAFLD rats（，n=8）

表4 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝組織TG、FFA含量的影響（，n=8）Table 4 Effects of VD3 intervention for 7 w on TG，F(xiàn)FA level in liver tissue of NAFLD rats（，n=8）

注：a 表示與CON組相比，P ＜0.05；aa 表示與CON組相比，P ＜0.001；b 表示與HFD+Oil組相比，P ＜0.05；bb 表示與HFD+Oil組相比，P ＜0.001

圖8 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝組織TG、FFA含量的影響（，n=8）Figure 8 Effects of VD3 intervention for 7 w on TG，F(xiàn)FA level in liver tissue of NAFLD rats（，n=8）

2.2.4 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝功能的影響與CON 組相比，HFD 組血清AST、ALT 水平顯著增高（P＜0.05），AST/ALT 比值顯著降低（P＜0.05）。與HFD+Oil 組相比，HFD+VD3組血清AST、ALT 水平均明顯降低（P＜0.05），AST/ALT 比值略有上升但無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），見表5、圖9～10。

圖9 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清AST、ALT水平的影響（，n=8）Figure 9 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum levels of AST and ALT in NAFLD rats（，n=8）

表5 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清AST、ALT、AST/ALT水平的影響（，n=8）Table 5 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum levels of AST，ALT and AST/ALT in NAFLD rats（，n=8）

表5 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清AST、ALT、AST/ALT水平的影響（，n=8）Table 5 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum levels of AST，ALT and AST/ALT in NAFLD rats（，n=8）

注：a 表示與CON組相比，P ＜0.05；b 表示與HFD+Oil組相比，P ＜0.05

圖10 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清AST/ALT水平的影響（，n=8）Figure 10 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum levels of AST/ALT in NAFLD rats（，n=8）

2.2.5 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清維生素D的影響 與CON 組相比，HFD 組血清25(OH)D3水平顯著降低（P＜0.001）。與HFD+Oil 組相比，HFD+VD3組血清25(OH)D3水平顯著升高（P＜0.001），見表6、圖11。

表6 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清25(OH)D3水平的影響（，n=8）Table 6 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum levels of 25(OH)D3 in NAFLD rats（，n=8）

表6 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清25(OH)D3水平的影響（，n=8）Table 6 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum levels of 25(OH)D3 in NAFLD rats（，n=8）

注：aa 表示與CON組相比，P ＜0.001；bb 表示與HFD+Oil組相比，P ＜0.001

圖11 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠血清25(OH)D3水平的影響（，n=8）Figure 11 Effects of VD3 intervention for 7 w on serum levels of 25(OH)D3 in NAFLD rats（，n=8）

2.2.6 維生素D3干預(yù)7 w 對NAFLD 大鼠肝組織脂肪變性程度的影響CON 組肝組織未出現(xiàn)脂肪變性情況（0/4例），HFD組與HFD+Oil組所有大鼠均出現(xiàn)脂肪變性程度最高（3 級）的狀態(tài)（4/4 例），HFD+VD3組所有大鼠均發(fā)生脂肪變性（4/4例），但程度不一。與CON組相比，HFD 組肝細(xì)胞炎癥活動度顯著提高（P＜0.001）。與HFD+Oil 組相比，HFD+VD3組血清25(OH)D3水平顯著降低（P＜0.001），見表7。

表7 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝組織脂肪變性程度的影響（，n=4）Table 7 Effects of VD3 intervention for 7w on the degree of hepatic steatosis in NAFLD rats（，n=8）

表7 維生素D3干預(yù)7 w對NAFLD大鼠肝組織脂肪變性程度的影響（，n=4）Table 7 Effects of VD3 intervention for 7w on the degree of hepatic steatosis in NAFLD rats（，n=8）

注：aa 表示與CON 組相比，P ＜0.001；bb 表示與HFD+Oil 組相比，P ＜0.001

3 討論

高脂飲食是NAFLD 發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中一個重要因素。本實驗所采用的高脂飲食誘導(dǎo)建立NAFLD 大鼠模型屬于營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型的一種，此方法成熟穩(wěn)健、成模率高[12-14]。

1,25(OH)2D3是維生素D3的生物活性形式，由皮膚吸收或膳食攝取后經(jīng)一系列轉(zhuǎn)化再活化入血，進(jìn)而作用于小腸、骨、腎等靶器官產(chǎn)生效應(yīng)。隊列研究[15]證實，血清維生素D 與眾多血清脂質(zhì)代謝產(chǎn)物存在強大的相關(guān)性。隨著干預(yù)時間的延長，各組大鼠肝重、體重、肝指數(shù)與血清維生素D水平各有波動：HFD組除血清維生素D 濃度顯著降低外，上述其余數(shù)值始終高于CON組；給予維生素D3干預(yù)后，該組大鼠血清維生素D濃度顯著回升，肝指數(shù)顯著降低，肝重與體重略有起伏但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。上述結(jié)果表明非酒精性脂肪性肝病的確能夠?qū)е聶C體本身的維生素D3水平降低，而通過膳食干預(yù)補充適宜劑量的外源性維生素D3可以幫助恢復(fù)其在體內(nèi)的水平，繼而延緩疾病進(jìn)程甚至扭轉(zhuǎn)疾病轉(zhuǎn)歸。此外，外源性的維生素D3還能夠在一定程度上緩解肝臟病變所致使的肝臟重量增加，這種重量的降低更多的發(fā)生于內(nèi)臟而非全身，此現(xiàn)象與宋佳奇等[16]的研究結(jié)果不謀而合；而王鋒[17]和張虹[18]等的研究發(fā)現(xiàn)，維生素D3還可以降低脂肪肝大鼠的體重，這與上述結(jié)論相悖。JAHN 等[19]的研究發(fā)現(xiàn)低劑量的維生素D 干預(yù)（500 IU/kg）聯(lián)合高脂飲食能夠顯著提高大鼠肝重、體重及脂肪含量，而在高劑量干預(yù)（10 000 IU/kg）時上述指標(biāo)均顯著降低。究其原因，或許與維生素D3的給藥劑量和時長密切相關(guān)：補充較大劑量維生素D3且時間較長情況下，可引起體重、臟器重量等減輕；而劑量和時間都相對較少的條件下，所得到的變化也就相對不顯著，而兩者間界限暫未可知。眾多研究表明維生素D 缺乏與肥胖癥密切相關(guān)，同時也可能通過下調(diào)肝臟內(nèi)白介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）的mRNA表達(dá)以抑制炎癥，對NAFLD產(chǎn)生保護效應(yīng)，但臨床試驗結(jié)果也如上述多項研究般不一致，故作用機制一直未被闡明確證[20]。

肝臟是機體代謝脂質(zhì)的主要器官，在脂代謝過程中參與脂質(zhì)攝取、儲存、合成、代謝等，上述任意環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題均可能引起脂質(zhì)堆積、胰島素抵抗（IR）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等，繼而誘發(fā)NAFLD[21-22]。維生素D3具有抗炎、抗纖維化、提高胰島素敏感性等多種生物學(xué)活性[23]，維生素D通過與其受體VDR結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。余夢麗等[24]研究發(fā)現(xiàn)，VDR 缺乏可異常激活NF-κB 這一炎癥介質(zhì)引起機體多種炎癥反應(yīng)，同時可增加腸道肝螺桿菌（Helicobacter hepaticus，H.h）豐度及減少益生菌豐度而引起腸道菌群紊亂，進(jìn)而加重腸道炎癥反應(yīng)、阻礙腸道對于食物的消化吸收進(jìn)一步導(dǎo)致脂代謝紊亂。NANDI 等[25]研究發(fā)現(xiàn)，低維生素水平可以影響機體脂肪酸水平：增加肝臟和血漿中花生四烯酸和飽和脂肪酸等促進(jìn)脂質(zhì)生成的脂肪酸水平、降低血漿和肝臟中單不飽和脂肪酸等具有抗炎特性的脂肪酸水平。本研究中，維生素D3干預(yù)可顯著降低NAFLD 大鼠血清TC、TG、LDL-C 水平及肝組織中TG、FFA 水平。即補充維生素D3同樣可以降低FFA這類脂質(zhì)合成原料的脂肪酸水平，與上述研究結(jié)論一致。故推測維生素D3參與調(diào)控脂質(zhì)的合成與分解，在脂代謝紊亂時及時促進(jìn)分解、抑制合成，逐漸調(diào)整回正常水平。

AST、ALT是專一性的轉(zhuǎn)氨酶，主要存在于細(xì)胞內(nèi)，在血清中活性很低，在肝細(xì)胞受損或細(xì)胞膜通透性增高的情況下即大量釋放入血，造成血清中轉(zhuǎn)氨酶活性明顯升高[26-27]，故血清AST、ALT、AST/ALT 水平常作為判斷肝功能是否正常的指標(biāo)[28]。本研究中HFD組大鼠血清AST、ALT、AST/ALT水平均顯著高于CON組，提示肝細(xì)胞內(nèi)皮損傷、肝功能異常，印證了上述肝細(xì)胞受損后轉(zhuǎn)氨酶水平顯著提高的結(jié)論[6,12]。進(jìn)行維生素D3干預(yù)后，血清AST、ALT 水平顯著降低，表明紊亂的肝功能得到了調(diào)整和改善，提示維生素D3對肝臟具有良好的損傷修復(fù)意義。

在維生素D3較大劑量和較長時間干預(yù)下不僅能降低NAFLD大鼠肝重，還能延緩體重的增長速度，提示維生素D3對機體代謝、脂質(zhì)代謝及肝細(xì)胞損傷修復(fù)的積極調(diào)節(jié)作用。這與現(xiàn)有研究中病人機體血清25（OH）D3水平與脂肪肝病變嚴(yán)重程度呈負(fù)向相關(guān)的結(jié)論大體吻合[29]，但仍出現(xiàn)了如對體重?zé)o顯著性改變等陰性結(jié)果。由于體重、病理形態(tài)改變、炎癥性變化等均屬于宏觀表現(xiàn)，是在脂代謝異常量變積累后引起的質(zhì)變，猜測在尚未表現(xiàn)出明顯癥狀、體征的大鼠體內(nèi)可能存在基因、分子等微觀層面的細(xì)小量變，后續(xù)可通過檢測上述更深層次的結(jié)構(gòu)探索維生素D3對NAFLD 的改善治療機制。

4 結(jié)論

維生素D3經(jīng)膳食干預(yù)能順利對NAFLD 模型大鼠發(fā)揮效應(yīng)，達(dá)到降低血清及肝組織脂質(zhì)水平、阻止AST、ALT 大量入血引起血清轉(zhuǎn)氨酶活性升高的作用，同時還能降低肝臟組織脂肪變性程度、改善炎癥。

（利益沖突：無）