謝巴圖白音,李 偉,張勇剛

結(jié)直腸癌(CRC)在臨床中較常見，老年男性多發(fā)，其致死率僅次于胃癌、食管癌，此病早期并無明顯癥狀，在病情進(jìn)展后就醫(yī)多為中晚期，大多數(shù)患者會(huì)因此錯(cuò)過治療進(jìn)而影響預(yù)后[1]。為提高患者生存質(zhì)量延長生存期限，提高CRC早期診斷率十分重要。癌胚抗原(CEA)在CRC診斷中具有一定的應(yīng)用價(jià)值，但在部分良性疾病中也會(huì)升高,限制了其在CRC早期診斷中的應(yīng)用[2]。熱休克蛋白60(HSP60)在CRC病變?cè)缙诰涂沙尸F(xiàn)為高表達(dá)，對(duì)CRC早期診斷有重要的參考價(jià)值[3]。有研究表明，SEPT9基因甲基化可參與CRC細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移[4]?；诖耍狙芯客ㄟ^分析CEA、HSP60、SEPT9在CRC患者中表達(dá)情況，了解三者聯(lián)合檢測對(duì)CRC早期診斷、預(yù)后的評(píng)估價(jià)值。

1 資料與方法

1.1臨床資料 將2013年12月—2018年12月在本院行手術(shù)治療的CRC 81例作為CRC組。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)為CRC者；臨床資料完整；符合《結(jié)直腸癌診療規(guī)范》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者；存在心、肝、腎等器官嚴(yán)重疾病者；存在免疫系統(tǒng)疾病者；入院前接受相關(guān)治療者；合并急慢性感染、創(chuàng)傷者。CRC組中男59例，女22例；年齡45～78(58.87±4.33)歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期48例。另選取本院同期行健康體檢人群78例作為對(duì)照組，男51例，女27例；年齡44～78(57.10±4.95)歲。2組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1CEA、HSP60、SEPT9檢測方法：CRC組入院后次日清晨在空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血5 ml，對(duì)照組則在體檢當(dāng)日清晨抽取靜脈血5 ml，離心半徑10 cm， 3000 r/min離心10 min，取上清液，待檢。應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法檢測CEA。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測HSP60。SEPT9檢測：取冷凍血清置室溫30 min，按照檢測試劑盒(Plasma Quick Kit試劑)說明書操作提取血清游離DNA，隨后進(jìn)行PCR檢測，實(shí)驗(yàn)步驟根據(jù)相關(guān)說明書進(jìn)行，用ABI 7500 Fast PCR儀自帶軟件(pplied Bio Systems公司)進(jìn)行結(jié)果判讀；質(zhì)控樣品內(nèi)參照β-actin的Ct值≤32.1以保證樣本中DNA足量，SEPT9 Ct值<45.0為陽性結(jié)果；3次平行的PCR中有2次及以上陽性則判定為陽性，反之為陰性，其他結(jié)果無效。

1.2.2隨訪：對(duì)CRC患者隨訪3年，時(shí)間截至2021年12月31日，觀察患者預(yù)后，發(fā)生復(fù)發(fā)、死亡則為預(yù)后不良，反之為預(yù)后良好。

1.3觀察指標(biāo) 對(duì)比不同人群中CEA、HSP60、SEPT9表達(dá)情況；對(duì)比不同分期及預(yù)后CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表達(dá)情況；分析CEA、HSP60、SEPT9對(duì)CRC早期診斷價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1不同人群中CEA、HSP60、SEPT9表達(dá)情況 CRC組CEA、HSP60水平及SEPT9陽性率均高于對(duì)照組(P<0.01)。見表1。

表1 不同人群CEA、HSP60、SEPT9表達(dá)情況

2.2不同分期CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表達(dá)情況 Ⅲ～Ⅳ期CEA、HSP60水平及SEPT9陽性率均高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.01)。見表2。

表2 不同分期CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表達(dá)情況

2.3不同預(yù)后患者CEA、HSP60、SEPT9表達(dá)情況 隨訪3年，81例均未失訪，其中預(yù)后良好52例，預(yù)后不良29例。預(yù)后不良組CEA、HSP60水平及SEPT9陽性率均高于預(yù)后良好組(P<0.01)。見表3。

表3 不同預(yù)后CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表達(dá)情況

2.4CEA、HSP60、SEPT9對(duì)CRC早期診斷價(jià)值 依據(jù)ROC曲線可知，三者聯(lián)合檢測對(duì)CRC早期診斷敏感度和特異度分別為80.20%、74.40%；AUC為0.765(95%CI：0.669，0.833)，明顯高于三者單獨(dú)檢測。見表4。

表4 CEA、HSP60、SEPT9對(duì)CRC早期診斷價(jià)值

3 討論

CEA廣泛應(yīng)用于消化道腫瘤的診斷、監(jiān)測及預(yù)后評(píng)估[6-8]。CEA在胚胎時(shí)期通過肝胰、腸道合成，含量極少，在以往研究中發(fā)現(xiàn)CEA在消化道及內(nèi)胚層惡性腫瘤組織中陽性率高。本研究結(jié)果顯示，CRC組中CEA表達(dá)水平升高，且分期越高、預(yù)后不良者CEA水平更高，提示CEA可為CRC早期診斷及預(yù)后評(píng)估提供一定參考信息[9]。而腫瘤標(biāo)志物的缺點(diǎn)在于特異度較差，因此臨床中建議多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測，進(jìn)而為臨床早期診斷提供更全面參考信息[10-11]。

HSP60屬于高度保守的蛋白質(zhì)家族，是具有多種功能的大分子物質(zhì)，其可參與蛋白質(zhì)的折疊、轉(zhuǎn)移，同時(shí)在細(xì)胞增殖、凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)中也有一定的作用[12]。有研究表明，在正常細(xì)胞中HSP60幾乎不釋放，在宮頸癌、前列腺癌等腫瘤中其水平明顯升高[13]。本研究也表明，CRC患者中HSP60表達(dá)明顯升高，且隨著分期增加其表達(dá)水平也越高，與以往研究結(jié)果相符[14]。提示HSP60可能與CRC的發(fā)生與發(fā)展關(guān)系密切。本研究還顯示，預(yù)后不良患者中HSP60表達(dá)也高于預(yù)后良好者，提示HSP60可能為CRC患者預(yù)后評(píng)估提供參考。CRC患者中SEPT9基因甲基化可導(dǎo)致基因在復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯過程中出現(xiàn)一定的變化，對(duì)SEPT9蛋白復(fù)合物的構(gòu)成造成影響，進(jìn)而癌變[15]。有研究表明，SEPT9在子細(xì)胞胞質(zhì)的最終分離中有重要的作用，其基因異?？捎绊懠?xì)胞分裂[16]。以往研究發(fā)現(xiàn)，檢測外周血SEPT9基因甲基化對(duì)CRC的診斷準(zhǔn)確性高[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，CRC患者SEPT9陽性率高于對(duì)照組，且在Ⅲ～Ⅳ期與預(yù)后不良CRC患者中陽性率明顯升高，與以往研究結(jié)果相符[18-19]，提示隨著CRC病程進(jìn)展，腫瘤細(xì)胞壞死所釋放的甲基化SEPT9基因也被釋放入外周血中，因此SEPT9檢出率明顯升高。本研究中，CEA、HSP60、SEPT9聯(lián)合檢測可有效提高對(duì)CRC早期診斷的敏感度與特異度，提示聯(lián)合檢測可有效提高對(duì)CRC診斷效能。

綜上所述，相比CEA、HSP60、SEPT9單獨(dú)檢測，CEA、HSP60、SEPT9聯(lián)合檢測可提高CRC早期診斷效能，同時(shí)對(duì)患者預(yù)后評(píng)估也有一定的參考價(jià)值。