黃燕敏 黎曉敏 王襯平 陳加家 劉新成

梅毒是由梅毒螺旋體（treponema pallidum，TP）引發(fā)的性傳播性疾病，該病毒主要是通過(guò)人體中的黏膜或者破損的皮膚直接接觸患者感染性病原體進(jìn)行傳播，持續(xù)時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)幾年到幾十年，一旦感染會(huì)引起全身性的病變及損害[1]。近年來(lái)，我國(guó)梅毒的整體患病率呈現(xiàn)上升的態(tài)勢(shì)，在經(jīng)濟(jì)發(fā)展較好的地區(qū)尤為多見(jiàn)[2]。此外，梅毒還可通過(guò)血液的傳播，目前已經(jīng)成為患者手術(shù)前常規(guī)檢查的項(xiàng)目。常規(guī)的酶聯(lián)吸附試驗(yàn)用作初篩，操作時(shí)間比較長(zhǎng)，不適合臨床應(yīng)用[3]。血清學(xué)診斷是目前梅毒螺旋體診斷的主要方法，檢測(cè)血清中的TP抗體成為目前主要的手段，血清學(xué)診斷方法主要包括兩種，第一種是非TP抗體血清試驗(yàn)，檢測(cè)方法包括甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（tolulized red unheated serum test，TRUST）、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片（rapid plasma reagin，RPR）、性病研究實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)等，主要是對(duì)類(lèi)脂抗原抗體（反應(yīng)素）進(jìn)行試驗(yàn)；第二種是TP抗體血清試驗(yàn)，檢測(cè)方法包括梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（treponema pallidum particle assay，TPPA）、化學(xué)發(fā)光法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）、梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)等。CLIA主要是對(duì)血清梅毒特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)，不僅能夠大大縮短檢測(cè)時(shí)間，而且靈敏度和特異性顯著提高?；诖?，本試驗(yàn)選取萬(wàn)江醫(yī)院收治的1 000例術(shù)前患者的血清標(biāo)本采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，旨在評(píng)價(jià)其特異性，結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究符合倫理學(xué)要求。選取2020年1—12月在萬(wàn)江醫(yī)院進(jìn)行常規(guī)術(shù)前檢查患者1 000例，其中男性480例，女性520例，年齡1～85歲，平均年齡（45.67±7.42）歲。所有標(biāo)本采集必須全部為空腹?fàn)顟B(tài)下抽取患者靜脈血4 mL進(jìn)行離心，其中離心機(jī)轉(zhuǎn)速設(shè)置為3 500 r/min，半徑設(shè)置為25 cm，離心時(shí)間設(shè)置為5 min，實(shí)施離心反應(yīng)后，將上層清液取出，置于-20℃冰箱內(nèi)冷藏、待檢。

1.2 檢測(cè)方法

儀器與試劑采用全自動(dòng)免疫自動(dòng)分析儀（德國(guó)西門(mén)子ADVIA Centaur XP）、梅毒特異性抗體檢測(cè)試劑（德國(guó)西門(mén)子）進(jìn)行檢測(cè)，質(zhì)控品、定標(biāo)液均由德國(guó)西門(mén)子公司提供。具體判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：陽(yáng)性：化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法S/CO值≥1.00，陰性：S/CO值＜1.00[4]。所有陽(yáng)性標(biāo)本必須統(tǒng)一采用同一種試劑進(jìn)行復(fù)檢，若經(jīng)復(fù)檢后顯示結(jié)果仍為陽(yáng)性者，則判斷患者為初篩試驗(yàn)陽(yáng)性，若檢測(cè)結(jié)果為陰性，則不再使用TPPA方法進(jìn)行補(bǔ)充檢驗(yàn)，若檢測(cè)結(jié)果為S/CO≥1，說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果為疑似陽(yáng)性，則需通過(guò)TPAA實(shí)施進(jìn)一步驗(yàn)證。所有初篩試驗(yàn)陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行附加的TRUST，TRUST試驗(yàn)中需要的試劑均由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供，梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）試劑均由日本富士株式會(huì)社提供。根據(jù)實(shí)際說(shuō)明書(shū)相關(guān)保準(zhǔn)通過(guò)肉眼判讀結(jié)果，若反應(yīng)孔4中的孔中央有呈光滑紐扣狀的細(xì)胞沉積，說(shuō)明結(jié)果為陰性，若反應(yīng)孔4中的孔中央出現(xiàn)不規(guī)則形狀的細(xì)胞沉積，說(shuō)明結(jié)果為陰性。振蕩器、移液器等器材準(zhǔn)備齊全備用。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料以（n，%）描述，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）描述，P＜0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TRUST試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

醫(yī)院共1 000份血清標(biāo)本，共初步篩查出46份陽(yáng)性標(biāo)本，TRUST試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示陽(yáng)性的有20份，占43.48%，陰性26份。

2.2 TPPA試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

46份經(jīng)TPPA試驗(yàn)復(fù)檢后，38份為陽(yáng)性，占82.61%，8份為陰性，占17.39%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析特異性為99.82%（95%CI為99.71%～99.85%），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為89.45%（95%CI為87.71%～91.75%）。

2.3 CLIA梅毒特異性抗體檢測(cè)S/CO值與TRUST、TPPA檢測(cè)結(jié)果

S/CO值≥10.00時(shí)100%為陽(yáng)性，在S/CO值＜10.00時(shí)，TPPA試驗(yàn)陽(yáng)性越來(lái)越低，該值與TPPA陽(yáng)性比例呈正比。此外，S/CO值越低，TPPA陰性比例越高。TRUST試驗(yàn)中，最高稀釋度為1∶256，TPPA試驗(yàn)陽(yáng)性標(biāo)本中，TRUST試驗(yàn)陽(yáng)性18份，陰性20份，隨著S/CO值不斷增加，TRUST滴度≥1∶2逐漸增加；TPPA試驗(yàn)陰性標(biāo)本中，TRUST試驗(yàn)陽(yáng)性2份，陰性6份。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體的特異性為99.85%（95%CI為99.86%～99.90%）。見(jiàn)表1。

表1 兩組CLIA陽(yáng)性標(biāo)本S/O值TPPA試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

梅毒是經(jīng)典性病中比較為常見(jiàn)的一種，主要由于TP感染所引起，早期可出現(xiàn)硬下疳、低熱，也可能不出現(xiàn)任何癥狀，隨著病情的發(fā)展，出現(xiàn)的臨床癥狀比較多樣和復(fù)雜，病情嚴(yán)重的患者還可能累及全身各器官，危及患者生命[5]。梅毒的傳播途徑主要是性傳播，血液傳播也較為多見(jiàn)，因此，術(shù)前患者在進(jìn)行手術(shù)之前的常規(guī)檢查中包括對(duì)術(shù)前患者進(jìn)行梅毒特異性抗體血清標(biāo)本的檢測(cè)。

人體一旦被感染梅毒螺旋體之后，體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生兩種抗體，一種是患者血清中的反應(yīng)素，即抗脂質(zhì)抗體，屬于非特異性抗體，另一種是抗密梅毒螺旋體，屬于特異性抗體[6-7]。在傳統(tǒng)檢測(cè)中，非特異性梅毒螺旋體抗體方法是常用檢測(cè)方法，具有操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性高的特點(diǎn)，但是血中含有抗心磷脂抗體，在較多疾病中均可存在，如高血脂癥、急性病毒性感染、懷孕婦女等，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前，采用血清學(xué)檢測(cè)的方式檢測(cè)梅毒特異性抗體是目前臨床上比較常用的方法，試驗(yàn)方法具有高靈敏度與高特異性對(duì)檢測(cè)梅毒是至關(guān)重要的[8]。CLIA是近年來(lái)伴隨著關(guān)于梅毒螺旋體的抗原及基因工程研發(fā)成功而建立起來(lái)的梅毒特異性抗體的檢測(cè)方法，其特點(diǎn)之一就是可檢測(cè)細(xì)胞的殺菌功能，同時(shí)能夠代謝和調(diào)理血清，針對(duì)性較強(qiáng)，可有效通過(guò)化學(xué)發(fā)光底物將傳統(tǒng)顯色底物進(jìn)行取代，促進(jìn)發(fā)光信號(hào)的增強(qiáng)，使傳統(tǒng)方法中信號(hào)持續(xù)時(shí)間短的問(wèn)題得以糾正，促進(jìn)發(fā)光信號(hào)時(shí)間的延長(zhǎng)，促進(jìn)其靈敏度的提高[9-10]。CLIA是由美國(guó)雅培公司推出的，目前已經(jīng)在國(guó)內(nèi)部分實(shí)驗(yàn)室中大量應(yīng)用，而且每個(gè)測(cè)試僅需要29 min，靈敏度與特異度均較高，其中敏感度最高能夠得到100%，而且能夠?qū)贵w效價(jià)較低的弱陽(yáng)性血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，優(yōu)勢(shì)顯著。此外，梅毒試劑盒的研發(fā)工藝逐漸成熟，能夠應(yīng)用于多種梅毒螺旋體特異性蛋白抗原中，制備出固相抗原，對(duì)標(biāo)記抗原進(jìn)行設(shè)定，與樣品中梅毒螺旋體抗體合作形成雙抗體夾心抗體，對(duì)其進(jìn)行洗滌，再加入化學(xué)發(fā)光底物液，測(cè)定其發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)臨界值判斷梅毒螺旋體特異性抗體的存在情況。但是CLIA作為一種篩查試驗(yàn)，也會(huì)存在一定假陽(yáng)性，尤其是在梅毒低流行地區(qū)，假陽(yáng)性的發(fā)生率比較高，因而檢測(cè)結(jié)果容易受到影響。

篩查T(mén)P感染比較普遍的方法是TRUST，考慮到生物假陽(yáng)性的現(xiàn)象，需要進(jìn)行TPPA進(jìn)行確認(rèn)。相關(guān)研究[11-12]顯示，TPPA試驗(yàn)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，但是由于該試驗(yàn)操作步驟比較多，過(guò)程較為繁瑣，對(duì)檢測(cè)人員的要求較高，因而進(jìn)行初篩有一定的困難，而TRUST試驗(yàn)可取長(zhǎng)補(bǔ)短，在一定程度上將初篩進(jìn)行簡(jiǎn)化，且靈敏度與特異性也較強(qiáng)，因此，TRUST試驗(yàn)是初篩梅毒特異性抗體標(biāo)本的最佳選擇之一。本研究顯示，采用TRUST試驗(yàn)對(duì)術(shù)前患者進(jìn)行常規(guī)血清抗體檢查，能較為有效地初步篩選出陽(yáng)性患者。究其原因，TRUST試驗(yàn)主要以心磷脂作為抗原的非特異性梅毒試驗(yàn)，主要以心磷脂為靶抗原的抗體有梅毒血清反應(yīng)素、心磷脂抗體等[13]。因此，TRUST試驗(yàn)非常適合進(jìn)行梅毒血清的初步篩選，關(guān)鍵還是在于其抗原的非特異性，經(jīng)過(guò)該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性的患者并不一定是梅毒患者，但是TRUST試驗(yàn)可以較為準(zhǔn)確地篩選出初步判定的陽(yáng)性者。

有相關(guān)研究[14]指出，TPPA試驗(yàn)是進(jìn)行梅毒血清抗體特異性復(fù)檢的重要手段，雖然該方法操作為純手工，操作流程復(fù)雜，對(duì)檢測(cè)人員具有較高的技術(shù)要求，但其相比于TRUST試驗(yàn)具有更高的特異性及靈敏性，可以較大程度上提升試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，非常適合經(jīng)過(guò)初步篩選判定為陽(yáng)性的患者進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)篩查。本研究顯示，將初篩的陽(yáng)性患者再行TPPA試驗(yàn)，其中又檢測(cè)出部分陰性患者，這充分體現(xiàn)了TPPA試驗(yàn)的臨床應(yīng)用價(jià)值。究其原因，TPPA試驗(yàn)檢測(cè)的是梅毒螺旋體的IgM和IgG的混合抗體，主要是利用已經(jīng)純化的致病性強(qiáng)的抗密梅毒螺旋體，將其中的精制菌體成分包被于明膠顆粒上，因此，精確度比較高[15-16]。

在臨床中進(jìn)行梅毒血清學(xué)檢測(cè)診斷時(shí)，假陽(yáng)性一直以來(lái)是困擾醫(yī)生的一個(gè)重要問(wèn)題，人們對(duì)假陽(yáng)性的關(guān)注度越來(lái)越高，TPPA復(fù)檢甚至WB確證起到的至關(guān)重要的作用就是盡可能的避免或減少假陽(yáng)性的出現(xiàn)，減少對(duì)患者產(chǎn)生的不良影響[17-19]。分析本文中的數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示S/O值為6.00時(shí)也并不是意味著TPPA試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果一定是陽(yáng)性，同理，S/O值為3.00時(shí)也并不意味著TPPA試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果一定是陰性。有相關(guān)的報(bào)道指出，梅毒特異性抗體S/O值5.073的時(shí)候，抗體的特異性對(duì)相對(duì)達(dá)到100%，這就意味著，當(dāng)S/O值≥5.073時(shí)患者不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性[20-21]。但是在文章的研究中卻發(fā)現(xiàn)S/O值≥5.073時(shí)也出現(xiàn)假陽(yáng)性的患者，這可能與環(huán)境、地域差別等有一定關(guān)系，但是差別是比較微小的。

綜上所述，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體的特異性較高，TPPA試驗(yàn)可作為臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中梅毒螺旋體特異性抗體篩查試驗(yàn)的補(bǔ)充試驗(yàn)。