郭路生，李雪冰，張麗娜 (.吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，吉林 吉林 0；.吉林市中心血站，吉林 吉林 00；.吉林醫(yī)藥學(xué)院護(hù)理學(xué)院，吉林 吉林 0)

目前，機(jī)采血小板是臨床上補(bǔ)充血小板，預(yù)防出血和止血最主要的血液制劑。按現(xiàn)行《全血及成分血質(zhì)量要求》制備的機(jī)采血小板，保存期為5 d[1]。由于保存期短，血站和醫(yī)院均無(wú)法大量庫(kù)存，因此難以保證臨床用血需求。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)多家血液中心開(kāi)始探索制備可以長(zhǎng)期保存的冰凍血小板[2-3]。本研究探討長(zhǎng)期凍存對(duì)血小板聚集功能的影響。

1 資料和方法

1.1 研究材料

選擇吉林市中心血站2018年隨機(jī)采集制備的冰凍機(jī)采血小板20份，血型“O”型，Rh陽(yáng)性,凍存于-80 ℃血液保存箱內(nèi)3年。

1.2 儀器與試劑

血栓彈力圖儀(TEG5000，美國(guó)血液技術(shù)公司)；血球分析儀(SYSMEX XS1000i，日本希森美康株式會(huì)社)；凝血分析儀(UP3000，上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司)；血小板聚集功能檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：HMO4702，美國(guó)血液技術(shù)公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

在臨床樣本中，根據(jù)血球分析儀和凝血分析儀檢測(cè)結(jié)果，隨機(jī)選擇20個(gè)血小板計(jì)數(shù)在(150～180)×109/L之間，且凝血常規(guī)檢驗(yàn)結(jié)果均正常的枸櫞酸抗凝全血樣本。每個(gè)樣本兩等分分別納入A、B兩組。A組為對(duì)照組，B組為冰凍血小板輸注模型組。

1.4 冰凍血小板輸注模型的建立

20份冰凍血小板樣本，1200 r/min離心10 min，棄上清，制成壓積血小板，備用。B組樣本1200 r/min離心10 min，分離上清備用；壓積紅細(xì)胞鹽水洗滌3次后，1200 r/min離心10 min，棄上清。用分離的上清重懸壓積冰凍血小板，隨機(jī)配對(duì)加入B 樣本，調(diào)整血小板終濃度為(150～180)×109/L之間。

1.5 顯微鏡檢觀察血小板形態(tài)變化

取A組樣本，120 r/min離心10 min，制成富血小板血漿[4]。取上層血漿，1200 r/min離心10 min，棄上清，取沉淀物制成血涂片。冰凍機(jī)采血小板從-80 ℃血液保存箱內(nèi)取出后，立即放入37 ℃恒溫解凍水浴箱內(nèi)，循環(huán)水浴解凍15 min。無(wú)菌注射器抽取血小板懸液2 mL，1200 r/min離心10 min，棄上清，取沉淀物制成血涂片。血涂片瑞氏染色后，顯微鏡檢觀察比較新鮮血小板與冰凍血小板形態(tài)差異。

1.6 血栓彈力圖參數(shù)測(cè)定

嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書要求，將測(cè)試杯上機(jī)，每個(gè)杯中加入 0.2 mol/L CaCl220 μL。加樣器取 1 m L 待檢樣本，注入高嶺土促凝管中，擰緊蓋，顛倒混勻5～8次，加樣器取混勻樣本 340 μL 加入測(cè)試杯中，升起杯架，移動(dòng) Lever 桿到Test 位置，立即進(jìn)行測(cè)定[5]。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS15.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,組間比較采用t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 顯微鏡檢結(jié)果

健康成人血小板形態(tài)較規(guī)則，邊緣整齊，大小均一，直徑較小，散在分布，不聚集。冰凍血小板形態(tài)不規(guī)則，邊緣不整齊，直徑明顯大于新鮮血小板且大小不均；聚集較多，散在較少(圖1：a為新鮮血小板，b為冰凍血小板)。

圖 1 新鮮血小板(a)與冰凍血小板(b)鏡檢結(jié)果

2.2 血栓彈力圖檢測(cè)結(jié)果

與對(duì)照組比較，模型組R值、K值、Ang值差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，MA值顯著減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表 1 血液樣本血栓彈力圖檢驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

冰凍血小板較普通機(jī)采血小板具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：①冰凍狀態(tài)，保存方便；②加入防凍劑后，-80 ℃可以長(zhǎng)期保存至數(shù)年；③因?yàn)楸４鏁r(shí)間長(zhǎng)，所以可以大量保存，使血小板庫(kù)存充足，有效緩解臨床用血小板緊張情況；④低溫抑制可能污染的細(xì)菌繁殖，避免細(xì)菌污染相關(guān)輸血不良反應(yīng)發(fā)生。另外，有研究顯示，冰凍血小板在外科創(chuàng)傷止血中、冰凍單采血小板在臨床治療中與新鮮單采血小板具有同等的有效性和安全性，可廣泛用于臨床，特別是在外科、產(chǎn)科止血療效上具有一定的優(yōu)勢(shì)[6]。

本研究中，冰凍血小板輸注模型組和對(duì)照組各樣本的R值、K值和Ang值均在正常值范圍內(nèi)，表明樣本凝血因子、纖維蛋白原充足，不影響血小板的活化和血塊的收縮形成。冰凍血小板輸注模型組和對(duì)照組比較，R值、K值和Ang值均無(wú)顯著性差異，表明兩組樣本從凝血因子活化開(kāi)始到血塊開(kāi)始形成，凝血功能表現(xiàn)無(wú)差異。模型組MA值顯著性小于對(duì)照組，表明長(zhǎng)期深低溫凍存，血小板活化聚集功能減弱。這可能與低溫導(dǎo)致血小板凋亡增加有關(guān)[7]。有研究認(rèn)為，血小板冰凍保存最佳時(shí)限為6個(gè)月[8]。因此，目前凍存技術(shù)條件下，短期凍存為宜。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，臨床使用效果的反饋分析，冰凍血小板將逐漸推廣應(yīng)用，血小板緊張態(tài)勢(shì)將得到緩解。