孔嘉名

（本溪市疾病預(yù)防控制中心內(nèi)科門診，遼寧 本溪 117000）

人類免疫缺陷病毒，即艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體檢驗(yàn)是目前臨床上檢測(cè)與診斷艾滋病的主要手段，能及時(shí)檢測(cè)HIV抗體，對(duì)艾滋病具有較好的防范與控制作用[1]。一般檢測(cè)方法分為兩個(gè)步驟，一是確認(rèn)試驗(yàn)，即免疫蛋白印跡法，能做出不確定、陰性、陽(yáng)性三種結(jié)果，根據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》中的建議，對(duì)不確定的患者應(yīng)每月隨訪1次，最后根據(jù)帶型進(jìn)展情況，明確最終結(jié)果[2]；二是初篩法，即應(yīng)用高敏感性篩查試驗(yàn)對(duì)受檢者進(jìn)行檢測(cè)，以便發(fā)現(xiàn)所有HIV 陽(yáng)性者，臨床上常用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)，再應(yīng)用免疫印跡試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)[3-4]。基于此，本研究旨在探討初篩篩查陽(yáng)性標(biāo)本與確認(rèn)結(jié)果之間的關(guān)系，并進(jìn)行結(jié)果確認(rèn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年8月至2019年12月本中心HIV抗體初篩陽(yáng)性的246例患者作為研究對(duì)象，其中男180例，女66例；年齡25～71歲，平均（51.23±2.55）歲；有注射毒品史21例，配偶或固定性伴侶為陽(yáng)性史40例，商業(yè)異性性行為史14例，有男男性行為史4例，有獻(xiàn)血史6例，母親有陽(yáng)性史12例，有職業(yè)暴露史30 例，有手術(shù)史23 例，無高危行為史96 例。本研究經(jīng)本中心醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者臨床資料完整；患者自愿參與研究，均對(duì)本研究知情同意并自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：依從性差者；伴有其他傳染性疾病者；存在溝通障礙，或精神疾病者。

1.2 方法 對(duì)所有患者進(jìn)行HIV 抗體篩查陽(yáng)性復(fù)檢，將復(fù)檢陽(yáng)性的血清標(biāo)本應(yīng)用免疫蛋白印跡試驗(yàn)進(jìn)行確診。操作者嚴(yán)格按照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》規(guī)定執(zhí)行檢測(cè)方法與流程；所用HIV 抗體初篩ELISA試劑盒購(gòu)自珠海麗珠試劑有限公司，膠體硒法試劑購(gòu)自日本雅培公司，使用的確認(rèn)試劑即HIV（1+2）型抗體印跡試劑購(gòu)自新加坡MP 生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司。抽取待檢者3 ml靜脈血，進(jìn)行HIV 抗體檢測(cè)，初篩查時(shí)采用雙抗原夾心ELISA法或膠體硒法，初篩陽(yáng)性標(biāo)本應(yīng)用原試劑及其他不同原理的試劑進(jìn)行復(fù)檢，將兩種檢測(cè)方法下一陰一陽(yáng)或陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行免疫蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)。確認(rèn)后的結(jié)果根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：①HIV-1 抗體陽(yáng)性。檢測(cè)出2 條env 外膜糖蛋白帶及gag 核心蛋白或pol 逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白帶；其中env 帶即gp160、gp4l、gp120，gag 帶即p14、p24、p55，pol 帶即p31、p51、p66。②陰性。未檢出病毒的特異性條帶，或單獨(dú)檢測(cè)出p17 抗體無其他的條帶。③不確定。檢出任何病毒特異條帶，但是缺乏將其判定為陽(yáng)性的條件。HIV-2抗體陽(yáng)性，在HIV-1為陽(yáng)性或不確定時(shí)，加以HIV-2清晰條帶，則提示為陽(yáng)性感染。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)并分析初篩陽(yáng)性結(jié)果與免疫蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果。血清HIV 抗體篩查復(fù)檢陽(yáng)性樣本吸光度值/臨界值（sample optical density/cut off，S/CO）與免疫蛋白印跡法確認(rèn)結(jié)果的關(guān)系。分析免疫蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)帶型分布情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以率或[n（%）]表示。

2 結(jié)果

2.1 初篩陽(yáng)性結(jié)果與免疫蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果246例初篩陽(yáng)性標(biāo)本中，經(jīng)ELISA/膠體硒檢測(cè)，ELISA 陽(yáng)性/膠體硒陽(yáng)性228 例，ELISA 陰性/膠體硒陽(yáng)性8 例，ELISA 陽(yáng)性/膠體硒陰性者10 例；經(jīng)確認(rèn)有212例HIV-1抗體初篩陽(yáng)性標(biāo)本，陰性21例，不確定13 例。經(jīng)測(cè)定，ELISA 的符合率為89.08%[212/（228+10）]，膠體硒的符合率為89.83%[212/（228+8）]，初篩查與確證試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為86.18%（212/246），兩種方法同時(shí)呈陽(yáng)性反應(yīng)的符合率為92.98%（212/228），見表1。

表1 初篩陽(yáng)性結(jié)果與免疫蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果（n）Table 1 Positive results of initial screening and confirmed results of Western blot(n)

2.2 246例HIV 抗體復(fù)檢陽(yáng)性S/CO 值與免疫蛋白印跡法確認(rèn)結(jié)果的關(guān)系 246例復(fù)檢陽(yáng)性標(biāo)本中，復(fù)檢結(jié)果1≤S/CO＜6、6≤S/CO＜10、S/CO≥10與免疫蛋白印跡確認(rèn)陽(yáng)性符合率分別為63.41%、83.54%、95.24%，隨著S/CO值的升高，與確證試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率也不斷升高，見表2。

表2 246例HIV抗體復(fù)檢陽(yáng)性S/CO值與免疫蛋白印跡法確認(rèn)結(jié)果的關(guān)系Table 2 The relationship between the positive S/CO value of 246 HIV antibody re-examination and the confirmed results by Western blotting

2.3 免疫蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)帶型分布 免疫蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)HIV-1 型抗體陽(yáng)性212 例中，gp160、gp120、gp41、p66、p51、p24條帶的出現(xiàn)率均＞92%，其中g(shù)p160、gp120的出現(xiàn)率為100%，p55的出現(xiàn)率最低，為54.24%，見表3。

表3 免疫蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)帶型分布[n（%）]Table 3 Western blot assay to confirm the distribution of test band patterns[n(%)]

3 討論

近年來，相關(guān)部門對(duì)艾滋病廣泛重視，并強(qiáng)化了宣傳力度，使艾滋病檢測(cè)也呈不斷上升趨勢(shì)，根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知，HIV 確診陽(yáng)性例數(shù)也在大幅度地增加[5-6]。我國(guó)當(dāng)前實(shí)施HIV檢查先進(jìn)行初篩查，再進(jìn)行復(fù)檢、確認(rèn)，以便獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。免疫蛋白印跡試驗(yàn)是免疫遺傳學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)中常用實(shí)驗(yàn)方法，其原理是借助特異性抗體，對(duì)經(jīng)凝膠電泳處理的生物組織或細(xì)胞實(shí)施生物組織樣品著色，根據(jù)著色深度、著色位置，獲知特定蛋白質(zhì)在細(xì)胞及組織中表達(dá)的情況。這一技術(shù)屬于特定抗體檢測(cè)的蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，目前已應(yīng)用于基因蛋白水平表達(dá)、疾病早期診斷、抗體活性檢測(cè)中。在HIV疾病診斷中，免疫蛋白印跡試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果能準(zhǔn)確地評(píng)估患者病情。但近年來，臨床也在嘗試探索HIV 疾病的初篩方法，初篩后將免疫蛋白印跡試驗(yàn)結(jié)果作為確診標(biāo)準(zhǔn)。

本研究結(jié)果顯示，初篩陽(yáng)性的246例標(biāo)本，經(jīng)免疫蛋白印跡試驗(yàn)，確診為HIV-1 陽(yáng)性212 例，ELISA的符合率為89.08%，膠體硒的符合率為89.83%，兩種方法同時(shí)呈陽(yáng)性反應(yīng)的符合率為92.98%。提示ELISA聯(lián)合膠體硒可提高診斷HIV的準(zhǔn)確性。HIV疾病初篩中，可應(yīng)用ELISA聯(lián)合膠體硒方法篩查血清HIV 抗體。本研究結(jié)果顯示，ELISA（+）患者共238 例，真陽(yáng)性212 例，假陽(yáng)性26 例。膠體硒（+）患者236例，真陽(yáng)性212例，假陽(yáng)性24例，ELISA（+）/膠體硒（+）患者228例，假陽(yáng)性16例。提示ELISA、膠體硒單獨(dú)應(yīng)用及聯(lián)合應(yīng)用均存在假陽(yáng)性結(jié)果，因此，對(duì)初篩呈陽(yáng)性的標(biāo)本，需根據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》中的要求，再給予免疫蛋白印跡試驗(yàn)，并以確證試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)[7-8]。

本研究結(jié)果顯示，246例復(fù)檢陽(yáng)性患者中，復(fù)檢結(jié)果1≤S/CO＜6、6≤S/CO＜10、S/CO≥10 與免疫蛋白印跡確認(rèn)陽(yáng)性符合率分別為63.41%、83.54%、95.24%，提示隨著S/CO值的升高，復(fù)檢結(jié)果與免疫蛋白印跡試驗(yàn)陽(yáng)性符合率升高，當(dāng)S/CO＞10，符合率可高達(dá)95.24%，但結(jié)果仍存在假陽(yáng)性，因此，不能認(rèn)為S/CO 值高便可判定為HIV 感染，還需進(jìn)一步確認(rèn)結(jié)果。為避免HIV 抗體陽(yáng)性與判定標(biāo)準(zhǔn)之間的差異，規(guī)定符合我國(guó)使用免疫蛋白印跡試驗(yàn)確證HIV感染的判定標(biāo)準(zhǔn)與試劑盒提供陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)均為陽(yáng)性，則可判定為HIV-1 抗體陽(yáng)性[9-10]。因此，復(fù)檢難度增加，故更需要保證樣本質(zhì)量，避免被其他疾病或病因影響，而且對(duì)檢測(cè)不確定患者，需進(jìn)行4～8周，甚至更長(zhǎng)時(shí)間的隨訪與監(jiān)測(cè)[11-12]。

綜上所述，血清HIV 抗體篩查存在假陽(yáng)性結(jié)果，需進(jìn)一步行確證試驗(yàn)，同時(shí)應(yīng)保證血液質(zhì)量，避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；隨著S/CO值的升高，與確證試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率升高，可為艾滋病的預(yù)防控制工作提供及時(shí)、準(zhǔn)確的科學(xué)參考，但免疫蛋白印跡試驗(yàn)也存在不確定結(jié)果。