李宏玉，尹 俠，王艷霞，李宇婷，朱路文，唐 強(qiáng)

1黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001；3黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第四醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150070

缺血性心臟病具有高發(fā)病率、高致死率的特點(diǎn)。發(fā)病人群主要以中老年人為主，但近年來(lái)患病人群呈逐漸年輕化趨勢(shì)。臨床治療大多以藥物治療或介入手術(shù)治療以開(kāi)通狹窄或被堵塞的心血管，保證血液供應(yīng)的通暢。但對(duì)缺血心肌組織進(jìn)行復(fù)灌治療后，會(huì)出現(xiàn)心肌損傷程度進(jìn)一步加重，這種現(xiàn)象被稱為心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI）［1-2］。自噬是心肌缺血和再灌注的顯著特征，參與了MIRI的病理過(guò)程，研究發(fā)現(xiàn)再灌注過(guò)程中過(guò)度自噬會(huì)造成心肌細(xì)胞自噬性凋亡，從而加重心肌組織損傷［3-4］。此外，隨著心肌衰老，心肌細(xì)胞處于缺氧狀態(tài)，會(huì)產(chǎn)生大量氧自由基，心肌會(huì)受到不同程度的損傷，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［5-6］。自噬對(duì)MIRI有“雙刃劍”作用，一方面自噬可以降解應(yīng)激狀態(tài)下氧化自由基，同時(shí)防止異常蛋白質(zhì)的聚集；另一方面，自噬的過(guò)度活躍會(huì)造成自噬應(yīng)激，損傷細(xì)胞器，對(duì)細(xì)胞有損害。因此，如何調(diào)控自噬程度是發(fā)揮“雙刃劍”作用的核心。

缺血預(yù)適應(yīng)（ischemic preconditioning，IPC）是迄今為止最有效的內(nèi)源性心肌缺血保護(hù)方法［7］。運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)（exercise preconditioning，EP）是缺血預(yù)適應(yīng)的一種，通過(guò)短時(shí)間內(nèi)反復(fù)間歇性大強(qiáng)度的有氧運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)應(yīng)激機(jī)制，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)，提高心肌對(duì)缺氧、缺血損傷的耐受能力，從而對(duì)機(jī)體心肌起保護(hù)作用，在臨床疾病預(yù)防中應(yīng)用可行性較強(qiáng)。研究顯示，通過(guò)運(yùn)動(dòng)預(yù)處理誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡，進(jìn)而啟動(dòng)下游事件發(fā)揮老齡心肌IPC保護(hù)作用［8-9］。但其具體作用機(jī)制尚不完全清楚。本研究將在離體心臟灌流模型上，通過(guò)抑制自噬，觀察運(yùn)動(dòng)預(yù)處理對(duì)老齡大鼠IPC心肌細(xì)胞自噬、凋亡的影響，探討其可能的作用機(jī)制，這也許可以為老齡心肌MIRI的防治提供一種新思路、新靶點(diǎn)和新的干預(yù)方法。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley老齡大鼠80只，鼠齡15～18個(gè)月，體質(zhì)量（450±20）g，購(gòu)買于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心［動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（黑）2019002］。飼養(yǎng)環(huán)境：通風(fēng)良好，自由飲水，人工光照12 h/12 h明暗交替、溫度（21±2）℃，濕度（60±5）%的標(biāo)準(zhǔn)屏障環(huán)境。

1.2 主要儀器與試劑

ZH-PT型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)（徐州利華電子公司）；Langendorff離體心臟灌流實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（江蘇賽昂斯生物技術(shù)有限公司）；-80℃超低溫冰箱（日本Panasonic公司）；DAB顯色液（中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；RIPA裂解液（碧云天生物技術(shù)有限公司）；Tween 20（北京博奧拓達(dá)科技有限公司）；內(nèi)參GAPDH（美國(guó)Affinity公司）；山羊抗兔IgG-HRP（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；肝素鈉注射液（天津生物化學(xué)制藥有限公司，規(guī)格1萬(wàn)U/mL）；自噬抑制劑組3-甲基腺嘌呤（美國(guó)Abmole公司）；KH液配置試劑（氯化鈉、氯化鉀、磷酸二氫鉀、碳酸氫鈉、葡萄糖、氯化鈣、硫酸鎂）均購(gòu)于天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物篩選及分組

采用電動(dòng)動(dòng)物跑臺(tái)進(jìn)行訓(xùn)練，1次/d，共訓(xùn)練3 d。跑臺(tái)參數(shù)如下：①時(shí)間30 min/d；②速度15 m/min；③坡度0°；④電擊強(qiáng)度1.0 mA。淘汰標(biāo)準(zhǔn)：1次訓(xùn)練中電擊次數(shù)＞5和/或1次電擊時(shí)間＞1 s的大鼠。淘汰不配合或體質(zhì)虛弱不符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的大鼠8只，納入60只入組大鼠進(jìn)行體質(zhì)量測(cè)定，其余12只作為補(bǔ)充組備用。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組（Con組）、缺血再灌注模型組（IR組）、運(yùn)動(dòng)預(yù)處理＋缺血預(yù)適應(yīng)組（EP＋I(xiàn)PC組）、運(yùn)動(dòng)預(yù)處理＋缺血預(yù)適應(yīng)＋生理鹽水組（EP＋I(xiàn)PC＋saline組）、運(yùn)動(dòng)預(yù)處理＋缺血預(yù)適應(yīng)＋自噬抑制劑組（EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組），每組12只。

2.2 干預(yù)方法

Con組、IR組不做特殊運(yùn)動(dòng)干預(yù)；EP＋I(xiàn)PC組、EP＋I(xiàn)PC＋saline組和EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組接受運(yùn)動(dòng)預(yù)處理干預(yù)，具體如下：采用電動(dòng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)進(jìn)行梯度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，1次/d，5 d/周，共訓(xùn)練6周。跑臺(tái)參數(shù)如下：①起始時(shí)間15 min/d，每3 d增加5 min，直至?xí)r間增至60 min/d后不再變化；②速度20 m/min；③坡度0°；④電擊強(qiáng)度1.0 mA。

2.3 模型制備

術(shù)前麻醉選取1%戊巴比妥鈉溶液經(jīng)大鼠腹腔注射（40～50 mg/kg），為防止血管凝血，按1000 U/kg劑量腹腔注射10%肝素鈉生理鹽水。固定、開(kāi)胸、迅速取出心臟，用1號(hào)線將離體心臟固定在Langendorff離體灌流裝置上，使心臟接受95%O2和5%CO2KH液（37℃）恒溫恒壓灌流。在模型制備過(guò)程中EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組和IR組分別有4只和2只大鼠在再灌注后心臟復(fù)跳失敗，選取補(bǔ)充組大鼠進(jìn)行了補(bǔ)充。補(bǔ)充大鼠的干預(yù)方法分別同EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組和IR組。

2.3.1 Con組 當(dāng)心臟離體之后，快速進(jìn)行主動(dòng)脈插管進(jìn)行離體灌流，持續(xù)平衡灌注180 min，不參與缺血處置［9-10］。

2.3.2 IR組 預(yù)灌注平衡20 min，然后保持心臟溫度恒定在37℃，通過(guò)控制灌流設(shè)備的三通閥，使全心缺血40 min后，再?gòu)?fù)灌120 min。

2.3.3 EP＋I(xiàn)PC組 EP＋I(xiàn)PC組大鼠心臟離體后平衡灌注20 min后，給予3次缺血預(yù)處理（短暫缺血5 min，再灌注10 min），之后缺血40 min，再?gòu)?fù)灌120 min。

2.3.4 EP＋I(xiàn)PC＋saline組 復(fù)制EP＋I(xiàn)PC組操作，在缺血預(yù)適應(yīng)處理的過(guò)程中給予生理鹽水，劑量為3.0 mg/200 g。

2.3.5 EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組 復(fù)制EP＋I(xiàn)PC操作，在缺血預(yù)適應(yīng)處理的過(guò)程中給予3-MA，劑量為3.0 mg/200 g［11］。

2.4 觀察指標(biāo)

2.4.1 透射電鏡觀察心肌細(xì)胞自噬體 灌流結(jié)束后迅速取下離體心臟，在心尖處切除1 cm×1 cm×1 cm大小心肌組織進(jìn)行切塊、研磨、離心，取上清液加入2.5%戊二醛固定液2～4 h后用PBS溶液反復(fù)清洗，加入1%鋨酸固定1～2 h后用PBS溶液反復(fù)清洗，用酒精進(jìn)行梯度脫水后，進(jìn)行20 min純丙酮處理，后加入包埋劑丙酮混合液（3∶1）處理3 h，最后加入純包埋劑丙酮混合液過(guò)夜。組織切片（50～70 nm），用醋酸雙氧鈾50%乙醇飽和溶液對(duì)切片進(jìn)行反復(fù)沖洗。用檸檬酸鉛對(duì)切片染色15 min，利用透射電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)情況，拍攝照片進(jìn)行記錄與分析結(jié)果。

2.4.2 TUNEL染色法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況 將離體心臟灌流結(jié)束后，取心肌組織固定于4%多聚甲醛中2 h后用15%蔗糖脫水，次日依次進(jìn)行水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片（5μm）、貼片。按照TUNEL試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，在熒光顯微鏡下隨機(jī)選取標(biāo)本中5個(gè)非重疊400倍鏡視野，Image-Pro Plus 6.0軟件計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞。TUNEL染色陽(yáng)性的凋亡細(xì)胞顯棕色。

心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)＝凋亡心肌細(xì)胞數(shù)/心肌細(xì)胞總數(shù)×100%

2.4.3 Western blot檢測(cè)Beclin-1、LC3-Ⅱ、Bax、Caspase-9、Bcl-2、Bcl-XL蛋白表達(dá)水平 在灌注結(jié)束后，取下離體心臟放入液氮內(nèi)速凍后置于-80℃冰箱保存，各組取一定量的心肌組織裂解后，提取上清蛋白液進(jìn)行蛋白定量。制備上樣液、根據(jù)各蛋白的分子量配置相應(yīng)濃度的分離膠，上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育一抗過(guò)夜、次日孵育二抗、顯色、凝膠系統(tǒng)拍照成像、計(jì)算各蛋白與內(nèi)參的灰度值。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較方差齊者用LSD-t檢驗(yàn)，不齊者則用Tamhane's T2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 5組大鼠心肌細(xì)胞自噬體透射電鏡觀察結(jié)果

Con組觀察到少量自噬溶酶體；IR組觀察到較多自噬溶酶體及自噬小泡；EP＋I(xiàn)PC組觀察到少量自噬溶酶體；EP＋I(xiàn)PC＋saline組觀察到少量自噬小泡；EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組未觀察到典型的自噬小泡及自噬溶酶體。見(jiàn)圖1。

3.2 TUNEL染色法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況

Con組見(jiàn)極少數(shù)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。與Con組比較，IR組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞比值明顯升高（P＜0.05）；與IR組比較，EP＋I(xiàn)PC、EP＋I(xiàn)PC＋saline組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞比值明顯降低（P＜0.05）；與EP＋I(xiàn)PC、EP＋I(xiàn)PC＋saline組比較，EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞比值明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)表1、圖2。

圖1 5組心肌細(xì)胞自噬體透射電鏡觀察結(jié)果（×10 000）Figure 1 Transmission electron microscopy results of autophagosomes of cardiomyocytes in five groups(×10 000)

表1 5組大鼠TUNEL心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（±s） %Table 1 Ratios of TUNEL cardiomyocyte apoptosis index in five groups（±s） %

表1 5組大鼠TUNEL心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（±s） %Table 1 Ratios of TUNEL cardiomyocyte apoptosis index in five groups（±s） %

注：與Con組比較，1）P＜0.05；與IR組比較，2）P＜0.05；與EP＋I(xiàn)PC組比較，3）P＜0.05；與EP＋I(xiàn)PC＋saline組比較，4）P＜0.05。Note:Compared with the Con group,1)P＜0.05;compared with the IR group,2)P＜0.05;compared with the EP+IPC group,3)P＜0.05;compared with the EP+IPC+saline group,4)P＜0.05.

組別Con組IR組EP+IPC組EP+IPC+saline組EP+IPC+3-MA組n 12 12 12 12 12 TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞比值6.44±0.46 39.23±1.321）25.68±1.082）26.53±2.032）36.78±1.173）4）

3.3 5組大鼠心肌蛋白表達(dá)結(jié)果

與Con組比較，IR組Beclin-1、LC3-Ⅱ、Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)均明顯升高，Bcl-2、Bcl-XL蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。與IR組比較，EP＋I(xiàn)PC、EP＋I(xiàn)PC＋saline組Beclin-1、LC3-Ⅱ、Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)均明顯降低，Bcl-2、Bcl-XL蛋白表達(dá)均明顯升高（P＜0.05）；EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與EP＋I(xiàn)PC、EP＋I(xiàn)PC＋saline組比較，EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組Beclin-1、LC3-Ⅱ、Bcl-2、Bcl-XL蛋白表達(dá)均明顯降低，Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)均明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)表2、圖3。

圖2 5組大鼠心肌TUNEL凋亡染色圖（×400）Figure 2 TUNEL staining images of myocardial TUNEL apoptosis in five groups(×400)

表2 5組大鼠心肌蛋白表達(dá)比較（±s）Table 2 Comparison of expression of proteins in the myocardium in five groups（±s）

表2 5組大鼠心肌蛋白表達(dá)比較（±s）Table 2 Comparison of expression of proteins in the myocardium in five groups（±s）

注：與Con組比較，1）P＜0.05；與IR組比較，2）P＜0.05；與EP＋I(xiàn)PC組比較，3）P＜0.05；與EP＋I(xiàn)PC＋saline組比較，4）P＜0.05。Note:Compared with the Con group,1)P＜0.05;compared with the IR group,2)P＜0.05;compared with the EP+IPCgroup,3)P＜0.05;compared with the EP+IPC+saline group,4)P＜0.05.

組別Con組IR組EP+IPC組EP+IPC+saline組EP+IPC+3-MA組n 12 12 12 12 12 Beclin-1 0.27±0.49 0.70±0.481）0.51±0.152）0.47±0.382）0.26±0.092）3）4）LC3-Ⅱ0.54±0.08 1.34±0.061）0.89±0.112）1.01±0.162）0.58±0.382）3）4）Bax 0.25±0.03 0.52±0.051）0.35±0.032）0.36±0.062）0.52±0.043）4）組別Con組IR組EP+IPC組EP+IPC+saline組EP+IPC+3-MA組n 12 12 12 12 12 Caspase-9 0.14±0.02 0.51±0.011）0.33±0.042）0.37±0.012）0.53±0.023）4）Bcl-2 0.41±0.01 0.27±0.011）0.42±0.012）0.41±0.022）0.26±0.013）4）Bcl-XL 0.92±0.08 0.46±0.011）0.88±0.092）0.85±0.072）0.44±0.033）4）

圖3 5組心肌蛋白表達(dá)圖Figure 3 Protein expression of myocardial in five groups

4 討 論

4.1 運(yùn)動(dòng)預(yù)處理可調(diào)控MIRI老齡大鼠心肌細(xì)胞自噬的適度表達(dá)

本研究通過(guò)制備離體MIRI模型，通過(guò)透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，IR組心肌細(xì)胞存在較多自噬溶酶體及自噬小泡，這提示缺血再灌注的過(guò)程會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞缺血、缺氧，加重心肌細(xì)胞損傷。缺血再灌注前給予一定量的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，同時(shí)給予缺血預(yù)適應(yīng)，心肌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)少量自噬溶酶體及自噬小泡。此外，引入自噬抑制劑3-MA作為對(duì)照，電鏡檢查結(jié)果顯示，與EP＋I(xiàn)PC組比較，EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組未觀察到典型的自噬小泡及自噬溶酶體，這提示3-MA抑制了運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練誘導(dǎo)的IPC的心肌保護(hù)效應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，缺血再灌注啟動(dòng)了心肌細(xì)胞的自噬。缺血前給予一定量的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，心肌細(xì)胞中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)降低，這提示運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練抑制了心肌細(xì)胞自噬的啟動(dòng)以及發(fā)生、發(fā)展，而給予3-MA干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后IPC明顯減輕老齡心肌細(xì)胞自噬程度。因此本研究推測(cè)運(yùn)動(dòng)預(yù)處理干預(yù)對(duì)MIRI產(chǎn)生保護(hù)效應(yīng)可能與自噬和凋亡相關(guān)。

自噬是細(xì)胞中普遍存在的生理過(guò)程。在誘導(dǎo)自噬的途徑中，Beclin-1是自噬起始的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，是判斷自噬發(fā)生發(fā)展的金指標(biāo)［12-13］，一旦Beclin-1表達(dá)上升則促進(jìn)自噬，而過(guò)度自噬則會(huì)誘發(fā)細(xì)胞凋亡。LC3也是反映自噬激活的重要標(biāo)志之一，LC3-Ⅱ在自噬激活后形成，位于自噬體膜的內(nèi)外表面，是特異表達(dá)于自噬小體膜的分子標(biāo)志。正常情況下，心肌細(xì)胞自噬一般維持在較低的水平，當(dāng)發(fā)生缺血、低氧，細(xì)胞老化等，自噬水平則會(huì)顯著上調(diào)［14-16］。運(yùn)動(dòng)作為一種生理壓力、多次反復(fù)的外界刺激，可引起心肌細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)從而誘導(dǎo)自噬發(fā)生。適宜強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)鍛煉可通過(guò)增強(qiáng)自噬活性促進(jìn)心肌細(xì)胞降解代謝廢物，以維持其自身穩(wěn)定狀態(tài)［17］。這與研究顯示運(yùn)動(dòng)預(yù)處理可以調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬，通過(guò)自噬途徑促進(jìn)細(xì)胞存活及改善組織的病理形態(tài)，發(fā)揮保護(hù)效應(yīng)的結(jié)果一致［18-19］。

4.2 運(yùn)動(dòng)預(yù)處理可減輕MIRI老齡大鼠的細(xì)胞凋亡情況

本研究結(jié)果顯示，心肌缺血再灌注后，細(xì)胞凋亡程序啟動(dòng)，促凋亡的Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)升高，抑制凋亡的Bcl-2、Bcl-XL蛋白表達(dá)降低。而給予一定強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后，心肌組織中Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)降低，Bcl-2、Bcl-XL表達(dá)升高，這提示在心肌缺血再灌注前進(jìn)行適度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能夠增加老齡大鼠心肌的耐受性，減輕缺血心肌細(xì)胞凋亡。與EP＋I(xiàn)PC組比較，EP＋I(xiàn)PC＋3-MA組心肌細(xì)胞中抑凋亡因子Bcl-2、Bcl-XL表達(dá)明顯降低，促凋亡因子Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)明顯升高。這提示EP產(chǎn)生心肌保護(hù)效應(yīng)的重要機(jī)制之一可能與其調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，在缺血及缺血再灌注過(guò)程中心肌細(xì)胞可能出現(xiàn)凋亡和壞死［20-21］。在凋亡過(guò)程中，Bcl-2家族起重要作用，Bcl-2為抗凋亡基因，Bax為促凋亡基因，兩者平衡影響凋亡的發(fā)生。再灌注過(guò)程會(huì)抑制Bcl-2蛋白表達(dá)，同時(shí)升高Bax蛋白表達(dá)。Caspases家族成員中的Caspase-9被認(rèn)為是啟動(dòng)死亡蛋白酶，可以直接使細(xì)胞發(fā)生凋亡。EP能夠通過(guò)上調(diào)與細(xì)胞保護(hù)相關(guān)的內(nèi)源性物質(zhì)，減輕細(xì)胞凋亡情況從而減輕心肌缺血再灌注損傷［22-23］。這與胡陽(yáng)等［24-25］研究結(jié)果基本一致。

5 小 結(jié)

運(yùn)動(dòng)預(yù)處理可誘導(dǎo)老齡大鼠心肌IPC保護(hù)作用，能夠減輕心肌缺血/再灌注損傷時(shí)心肌細(xì)胞凋亡，改善心肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。其機(jī)制可能與運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)老齡大鼠心肌細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表達(dá)，誘導(dǎo)自噬適度發(fā)生有關(guān)，同時(shí)還與促進(jìn)Bcl-2、Bcl-XL蛋白表達(dá)，抑制Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)有關(guān)。但本研究存在一些不足，如對(duì)參與調(diào)控自噬機(jī)制的相關(guān)信號(hào)通路及各通路間的相互作用尚不明確，還有待于下一步繼續(xù)研究。