段立群 李文鳳

摘要：目的 建立黔南州中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑天人平喘膠囊中人參皂苷Rg1的含量測定方法，完善天人平喘膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用HPLC法測定天人平喘膠囊中人參皂苷Rg1的含量，以乙腈-水為流動相進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長為203 nm，色譜柱為RSZG-C18（4.6×250 mm，5 μm） ，流速為1.0 mL/ min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果 人參皂苷Rg1的含量在0.5814～2.907 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗RSD分別為1.58 %、1.56 %、1.88 %，平均加樣回收率為99.91 %，RSD = 1.94 %。結(jié)論 該含量測定方法準(zhǔn)確可行，可作為天人平喘膠囊的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：天人平喘膠囊;HPLC法;人參皂苷Rg1;含量測定

天人平喘膠囊是由人參、天冬、黃芪、麥冬、蛤蚧等十多味中藥材組方[1～3]，現(xiàn)采用HPLC法對其人參皂苷Rg1的含量進(jìn)行定量研究，以完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為天人平喘膠囊的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀，AUW-120 D島津分析天平，F(xiàn)A1004電子天平，電熱恒溫水浴鍋。

4批天人平喘膠囊（由黔南州中醫(yī)醫(yī)院制劑科研制） ，人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，Rg1純度為95 %，批號：110703-201529） ， 甲醇、乙腈為色譜純，氨水、正丁醇為分析純，水為娃哈哈純凈水。

2方法及結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱定人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品7.6 mg于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得濃度為0.2907 mg/ mL對照品儲備液;精密吸取5 mL對照品儲備液至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得濃度為0.14535 mg/ mL對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的配置[4]

取天人平喘膠囊內(nèi)容物適量，攪拌均勻，約取2.0 g，精密稱定，置于索式提取器中，用甲醇回流提取至近無色，將提取液揮干，殘渣加20 mL水分次溶解，溶液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用30 mL水飽和正丁醇洗滌4次，合并正丁醇液;用氨水洗滌正丁醇液，每次30 mL，棄去氨液;用正丁醇飽和的水洗滌收集的正丁醇合并液，2次，每次30 mL，棄去水層，收集正丁醇液;揮干正丁醇，殘渣加甲醇溶解至10 mL容量瓶中，定容，即得天人平喘膠囊的供試品溶液。

2.1.3 陰性對照溶液的制備

按處方稱取不含人參的其他味藥材，按照制備工藝制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.2 色譜條件

采用RSZG-C18（4.6×250 mm，5 μm） 色譜柱，以乙腈為流動相A，水為流動相B，按表1中的程序進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長203 nm，柱溫30℃，流速：1.0 mL/ min。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性及專屬性試驗

按照“2.2”項下的色譜條件，精密吸取上述對照品溶液、天人平喘膠囊供試品溶液以及陰性對照溶液20 μL進(jìn)樣，供試品中人參皂苷Rg1與相鄰組分分離度較好（R>1.5） ，理論塔板數(shù)均大于3000，供試品溶液與對照品溶液中人參皂苷Rg1在相同保留時間處有相應(yīng)色譜峰，陰性對照溶液與供試品溶液和對照品溶液在相同保留時間處，無干擾峰出現(xiàn)，可以說明處方中其他成分對該項測定沒有產(chǎn)生干擾，見圖1～3。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.1.1”項下的對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得一系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液;分別精密吸取20 μL，按“2.2”項下的色譜條件依次進(jìn)樣分析，以人參皂苷Rg1進(jìn)樣量（μg） 為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，Y = 249391 X-896.1，R = 0.9999。結(jié)果表明，人參皂苷Rg1在0.5814～2.907 μg范圍內(nèi)，與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

精密吸取“2.1.1”項下的對照品溶液20 μL，按照“2.2”項下的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積積分值，精密度RSD為1.58 %，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗

取天人平喘膠囊供試品溶液，精密吸取20 μL，按照“2.2”項下的色譜條件操作，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、10 h測定峰面積積分值，RSD為1.56 %，表明天人平喘膠囊供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批天人平喘膠囊（批號：20160519） ，按照“2.1.2”項下方法平行制備6分供試品溶液，精密吸取20 μL;再按照“2.2”項下的色譜條件進(jìn)樣測定，測得天人平喘膠囊中人參皂苷Rg1的平均含量為0.3538 mg/ g，RSD為1.88 %，表明該測定方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取6份已知含量的同一批天人平喘膠囊（批號：20160519） 的內(nèi)容物，分別加入1 mL按照“2.1.1”項下方法配制的人參皂苷Rg1濃度為0.3363 mg/ mL的對照品溶液;以“2.1.2”項下的方法制備加樣回收供試品溶液，精密吸取20 μL，再按照“2.2”項下的色譜條件分別進(jìn)樣測定。天人平喘膠囊中人參皂苷Rg1的平均加樣回收率為99.91 %，加樣回收率的RSD為1.94 %，表明該測定方法加樣回收率良好。

2.9 ?天人平喘膠囊中人參皂苷Rg1的含量測定

抽取3批天人平喘膠囊，按照“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，每批膠囊平行制備2份供試品溶液，精密吸取20 μL;再按照“2.2”項下的色譜條件，進(jìn)樣測定人參皂苷Rg1的含量。 3批天人平喘膠囊中人參皂苷Rg1的平均含量分別為0.3484 mg/ g、0.3622 mg/ g、0.3400 mg/ g。

3討論

本研究選用人參皂苷Rg1作為天人平喘膠囊的含量測定成分，該含量測定方法可重復(fù)、在線性范圍內(nèi)具靈敏度和選擇性較高，分離度良好，回收率穩(wěn)定，為天人平喘膠囊有效成分的含量提供了快速可靠的測定方法，進(jìn)一步為天人平喘膠囊質(zhì)量控制提供了實驗依據(jù)。通過測定3批天人平喘膠囊中Rg1的含量，得出天人平喘膠囊中人參皂苷Rg1的含量不應(yīng)低于0.3400 mg/ g，可將其作為天人平喘膠囊中人參皂苷Rg1的含量標(biāo)準(zhǔn)[5]。

參考文獻(xiàn)

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