劉益飛，王 燕，張 青，劉 穎*

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，南通 226001）

胰腺癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，占消化道腫瘤的8%～10%[1]，其侵襲性強，惡性程度高，5 年生存率低[2]。目前治療仍以手術(shù)根治性切除為主，但胰腺癌起病隱匿，大部分患者確診時已錯過最佳治療時期。鑒于胰腺癌發(fā)病率較高，早期診斷困難，預(yù)后差，術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率高，因此，探索胰腺癌相關(guān)分子標(biāo)志物，尋找特異且敏感的治療靶點是目前研究的熱點。

突觸黏附樣分子（synaptic adhesion-like molecule，SALM）也稱為富含亮氨酸重復(fù)序列和纖維連接蛋白Ⅲ型結(jié)構(gòu)域（leucine-rich repeat and fibronectin type Ⅲdomain-containing，LRFN）蛋白家族[3]，在神經(jīng)突的生長及突觸的形成中起重要作用[4-5]。研究[6-7]顯示，SALM 家族分子尤其是SALM3 在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)。但目前SALM3 在胰腺癌中的表達(dá)情況報道較少。本研究觀察了胰腺癌組織中SALM3 的表達(dá)變化，分析其與臨床病理參數(shù)及患者預(yù)后的關(guān)系，探討SALM3 在胰腺癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后判斷中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2011 年1 月1 日—2014 年12 月31 日南通大學(xué)附屬醫(yī)院外科手術(shù)切除并病理確診為胰腺癌患者104 例的癌組織，每例取相應(yīng)癌旁組織（非癌組織）。患者無其他惡性腫瘤史，術(shù)前未行放療或化療等?；颊吲R床病理資料（包括年齡、性別及瘤體大小等）均來自病案記錄。其中男55 例，女49 例，年齡43～78 歲，中位年齡55 歲。所有患者均電話隨訪，隨訪時間為手術(shù)日期至最終隨訪日期（2019 年12 月31 日）或死亡日期。本研究通過南通大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者簽署知情同意書。

1.2 組織芯片的制作及免疫組織化學(xué)染色分析收集病例對應(yīng)的石蠟組織，用記號筆選取目標(biāo)位置，用組織芯片儀取直徑為2.0 mm 的目標(biāo)組織制作成組織芯片蠟塊。將芯片蠟塊常規(guī)切片、脫蠟、水化及抗原修復(fù)后，孵育兔抗人SALM3 多克隆抗體（1:200稀釋，美國R&D 公司，MAB5445）。隨后，孵育二抗（福州邁新公司），3-二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）染色，封片。用磷酸緩沖鹽溶液替代一抗作為陰性對照。免疫組織化學(xué)染色切片由兩名高年資病理醫(yī)師閱片。陽性結(jié)果顯示為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。染色強度劃分：0 分（陰性），1 分（弱陽），2 分（中陽），3 分（強陽）。陽性細(xì)胞比例用0～100%記錄，免疫組織化學(xué)染色評分以染色強度與陽性細(xì)胞比例的乘積（0～300）為最終評分[6]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件分析，胰腺癌組織與癌旁組織中SALM3 的表達(dá)差異用χ2檢驗；SALM3 表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析用χ2檢驗；Kaplan-Meier 方法生成胰腺癌患者5 年生存率的生存曲線；采用Logrank 檢驗及Cox 回歸模型進(jìn)行預(yù)后分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SALM3 在胰腺癌組織中的表達(dá) 用組織芯片行免疫組織化學(xué)染色分析SALM3 在胰腺癌組織及非癌組織中的表達(dá)情況，陽性染色位于癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)（圖1）。以100 分作為評判SALM3 表達(dá)的臨界值，0～100 分為低或無表達(dá)，101～300 分為高表達(dá)。胰腺癌組織中SALM3 高表達(dá)率為50.96%（53/104），非癌組織中SALM3 的高表達(dá)率為29.81%（31/104），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

圖1 SALM3 在胰腺癌中的表達(dá)（Envision，200×）

2.2 SALM3 表達(dá)與胰腺癌患者臨床病理各參數(shù)的關(guān)系 SALM3 表達(dá)與腫瘤的TNM 分期、腫瘤的分化程度、瘤體大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（均P＜0.05），而與患者年齡、性別及腫瘤部位無關(guān)（P＞0.05）（表1）。

表1 SALM3 表達(dá)與胰腺癌臨床病理各參數(shù)的關(guān)系（n，%）

2.3 SALM3 表達(dá)與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系 Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，結(jié)果顯示SALM3 高表達(dá)胰腺癌患者的總體生存率降低（P＜0.01）（圖2）。單、多因素預(yù)后分析顯示，SALM3 表達(dá)、TNM 分期、瘤體大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度與胰腺癌患者的預(yù)后有關(guān)（均P＜0.05），而腫瘤部位、患者年齡、性別與預(yù)后無關(guān)（均P＞0.05）；SALM3 表達(dá)和TNM 分期為胰腺癌患者獨立預(yù)后指標(biāo)（均P＜0.05）（表2）。

表2 SALM3 與預(yù)后的單、多因素分析

圖2 胰腺癌SALM3 高表達(dá)和低表達(dá)患者的生存曲線

3 討 論

SALM 家族現(xiàn)已知成員SALM1～5，它們有著相似的結(jié)構(gòu)域，但功能卻有所不同。SALM3 也稱為LRFN4[3，8]。有報道[4]認(rèn)為SALM 家族成員主要在神經(jīng)組織中表達(dá)和發(fā)揮功能，也有研究[9]顯示SALM2/LRFN1 參與胰腺癌細(xì)胞存活；SALM3 在某些癌細(xì)胞系如JURKAT 1、Panc 1 和MKN7 中表達(dá)[10]；SALM3/LRFN4 在胃癌和結(jié)直腸癌組織中也表達(dá)[6-7]。本研究中，SALM3 在胰腺癌癌組織中表達(dá)，主要定位在胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，SALM3 在胰腺癌組織中的表達(dá)率高于非癌組織，SALM3 在胰腺癌中的高表達(dá)與一些臨床病理特征呈正相關(guān)，如瘤體的大小、腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM 分期。結(jié)果表明SALM3在胰腺癌中起促癌作用。

Kaplan-Meier 分析顯示，SALM3 表達(dá)上調(diào)與患者總生存率降低相關(guān)，提示SALM3 的高表達(dá)可能促進(jìn)了胰腺癌的發(fā)生和進(jìn)展，且可用于評估患者預(yù)后。多因素分析顯示SALM3 表達(dá)和TNM 分期是預(yù)測胰腺癌患者預(yù)后不良的獨立指標(biāo)。腫瘤由腫瘤細(xì)胞及間質(zhì)成分組成，間質(zhì)成分包括成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血管和特異的間充質(zhì)細(xì)胞等，間質(zhì)成分參與并促進(jìn)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移[7]。腫瘤間質(zhì)中的免疫細(xì)胞，尤其是巨噬細(xì)胞，能通過誘導(dǎo)腫瘤血管生成，刺激腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。SALM3/LRFN4 在單核細(xì)胞系中表達(dá)，在向巨噬細(xì)胞分化的單核細(xì)胞中SALM3 表達(dá)上調(diào)，并在誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞向炎癥部位遷移中起著重要的作用[10-11]。最近研究[7]發(fā)現(xiàn)，SALM3 不僅在胃癌組織中表達(dá)增高，而且在癌間質(zhì)成纖維細(xì)胞中表達(dá)也增高。因此，推測SALM3 也參與了胰腺癌的播散與復(fù)發(fā)。

綜上所述，胰腺癌中SALM3 表達(dá)水平具有重要的臨床意義，SALM3 的表達(dá)與患者的生存呈負(fù)相關(guān)。SALM3 也是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨立危險因素。然而，需要通過更大的樣本及更多的實驗來研究SALM3 在胰腺癌中的表達(dá)情況及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的機制，使之成為預(yù)測胰腺癌臨床預(yù)后的潛在標(biāo)志物，并有望成為胰腺癌生物治療的潛在靶點。