馬振旺，姜德友，胡丙成，袁星星，蔡紹杰，郭 婧

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150006）

缺血性心臟?。╥schemic heart disease，IHD）尤其是急性心肌梗死，在我國的發(fā)病率和致死率正逐年上升，已成為當(dāng)前主要死亡原因之一［1］。及時(shí)有效的經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入手術(shù)或溶栓可以有效恢復(fù)心肌血流并且挽救缺血的心肌組織，然而越來越多的研究證實(shí)再灌注會(huì)伴隨心肌結(jié)構(gòu)和功能損傷［2］。因此，降低心肌缺血再灌注損傷和保護(hù)心肌組織結(jié)構(gòu)對(duì)于改善IHD 預(yù)后具有重要意義。

糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）作為臨床常見的代謝紊亂性疾病之一，已被證實(shí)是IHD 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［3］。研究表明，DM 患者IHD 患病率和急性心肌梗死后再灌注損傷與非糖尿病人群相比顯著增加［4］。此外，DM 還可以消除各種藥物或缺血預(yù)處理對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用［5］。橙皮苷（hesperidin）屬二氫黃酮類的衍生物，具有抗氧化、改善糖脂代謝和保護(hù)心血管系統(tǒng)的功效［6］。因此，在本研究中，通過分析hesperidin 對(duì)心肌組織、氧化應(yīng)激指標(biāo)及SIRT1/Nrf2/HO-1 信號(hào)通路的影響，以期進(jìn)一步明確其對(duì)DM 心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague-Dawley 大鼠（體質(zhì)量220～280 g，雄性，清潔級(jí)）購于北京Charles River 公司（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（京）2016-0011）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)條件：室溫25～28 ℃，濕度：60%，12 h∶12 h 循環(huán)光照，自由飲水及攝食。實(shí)驗(yàn)流程參照《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》執(zhí)行［7］。

1.2 試劑

Hesperidin 購于美國Sigma-Aldrich 公司（貨號(hào)：H5254，純度＞80%）；鏈脲佐菌素購于北京索萊寶科技有限公司（貨號(hào)：S8050，純度＞95%）；EX-527購于北京百奧萊博科技有限公司（貨號(hào)M00182，純度＞99%）；高脂肪飼料購于南京協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限公司（60%脂肪、20%碳水化合物和20%蛋白質(zhì)組成）；HE 染色試劑盒購于博士德生物工程有限公司（貨號(hào)AR1180）；大鼠乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）和大鼠肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase MB isoenzyme，CK-MB）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）檢測試劑盒購于武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司（貨號(hào)分別為E-BCK046-M，E-EL-R1327c 和E-BC-K025-S）；大鼠超氧化物歧化酶（super oxide dismutase，SOD）、大鼠還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）ELISA檢測試劑盒購于江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司（MM-0386R2 和MM-0602R2）；4- 羥 基 壬 烯 酸（4-hydroxynonenal，4-HNE）購于上海雅吉生物科技有限公司（貨號(hào)IHC0100542）；沉默信號(hào)調(diào)控因子1（sirtuin1，SIRT1）核因子E2 相關(guān)因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）和血紅素氧合酶1（heme oxygenase 1，HO-1）和β-actin 單克隆抗體購于英國Abcam 公司（貨 號(hào) 分 別 為ab238538、ab110304、ab137550、ab5294 和ab822）；HRP 標(biāo)記山羊抗兔IgG 二抗購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司（貨號(hào)A0208）。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組與造模 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，按照體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、模型組、缺血再灌注組、橙皮苷組、SIRT1 抑制劑組和橙皮苷+SIRT1抑制劑組，每組各10 只。除空白組外，余下5 組大鼠參照文獻(xiàn)［8］中方法采用高脂肪飼料聯(lián)合1%鏈脲佐菌素35 mg/kg 腹腔注射構(gòu)建2 型DM 大鼠模型，以尾靜脈采血，空腹血糖＞16.7 mmol/L 判定造模成功，空白組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)。造模后，橙皮苷組和橙皮苷+SIRT1 抑制劑組給予200 mg/kg 橙皮苷灌胃治療，每日1 次，余下各組大鼠給予等體積的生理鹽水灌胃，連續(xù)4 周。末次灌胃后，SIRT1 抑制劑組和橙皮苷+SIRT1 抑制劑組給予EX-527 10 mg/kg 腹腔注射。

4 周后，除空白組和模型組外余下4 組大鼠采用左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎30 min 和再灌注2 h 構(gòu)建心肌缺血/再灌注損傷模型［9］。再灌注以心肌顏色變紅，ST-T 段恢復(fù)到缺血前水平，提示再灌注成功。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠以3%異氟醚吸入麻醉，腹主動(dòng)脈采血和收集心臟組織用于指標(biāo)檢測。

1.4 指標(biāo)檢測

1.4.1 心肌病理形態(tài)學(xué)觀察 取適量缺血區(qū)心肌組織，經(jīng)石蠟包埋后10 μm 切片。切片經(jīng)4%多聚甲醛溶液固定24 h 后，進(jìn)行HE 染色。HE 染色步驟參照試劑盒說明書執(zhí)行，在光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織病理形態(tài)的改變。

1.4.2 LDH 和CK-MB 檢測 腹主動(dòng)脈血，于4 ℃環(huán)境下3 000 r/min 離心15 min，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清中LDH 和CK-MB 的含量，檢測方法參照試劑盒說明書。

1.4.3 氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測 取心肌組織，冰浴勻漿，于4 ℃環(huán)境下3 000 r/min 離心15 min，取上清。采用比色法分別檢測心肌組織中SOD 的活性、MDA 和GSH 的含量，檢測方法參照試劑盒說明書。1.4.4 免疫組化法檢測4-HNE 的表達(dá) 取心肌組織石蠟切片脫蠟至水，抗原修復(fù)，加入稀釋后的4-HNE 一抗，4 ℃孵育過夜，加入二抗，室溫下繼續(xù)孵育40 min。DAB 染色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水處理后中性樹膠封片。光學(xué)顯微鏡下觀察，以Image-Pro Plus 分析陽性表達(dá)的積分光密度。

1.4.5 Western blot 檢測 取適量心肌組織，冰上裂解，BCA 法測定蛋白濃度。電泳、轉(zhuǎn)膜、脫脂牛奶封閉。加入稀釋后的SIRT1、Nrf2、HO-1 和β-actin 兔單抗，4 ℃孵育過夜，加入二抗，室溫下繼續(xù)孵育40 min。ECL 顯影，凝膠成像系統(tǒng)分析，計(jì)算目的蛋白條帶的相對(duì)表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 橙皮苷對(duì)缺血心肌組織病理形態(tài)的影響

實(shí)驗(yàn)過程中缺血再灌注組大鼠死亡2 只，抑制劑組大鼠死亡3 只，橙皮苷組和橙皮苷聯(lián)合抑制劑組大鼠各死亡1 只，余下2 組大鼠未見死亡情況?？瞻捉M大鼠心肌纖維排列整齊，未見炎癥細(xì)胞。與空白組相比，模型組大鼠心肌纖維排列整齊，僅可見極少量的炎癥細(xì)胞浸潤。與空白組相比，缺血再灌注組大鼠心肌纖維排列紊亂，細(xì)胞腫脹及壞死，可見大量炎癥細(xì)胞浸潤。與缺血再灌注組大鼠相比，橙皮苷組大鼠心肌纖維排列紊亂，細(xì)胞壞死和炎癥細(xì)胞浸潤明顯改善，而抑制劑組心肌細(xì)胞壞死和炎癥細(xì)胞浸潤情況明顯加重。與缺血再灌注組大鼠相比，橙皮苷聯(lián)合抑制劑組大鼠心肌纖維排列紊亂，細(xì)胞壞死和炎癥細(xì)胞浸潤好轉(zhuǎn)，且介于橙皮苷組和抑制劑組之間。見圖1。

圖1 HE 染色觀察缺血心肌組織病理形態(tài)Fig 1 Pathological morphology of ischemic myocardium（HE staining）

2.2 橙皮苷對(duì)糖尿病心肌缺血再灌注大鼠血清LDH 和CK-MB 的 影 響

與空白組相比，模型組大鼠血清LDH 活性和CK-MB 水平略增加，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組相比，缺血再灌注組大鼠血清LDH 活性和CK-MB 的水平明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與缺血再灌注組相比，橙皮苷組血清LDH 活性和CK-MB 的水平顯著降低，而抑制劑組血清LDH 活性和CK-MB 的水平顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與抑制劑組相比，橙皮苷+抑制劑組血清LDH 活性和CK-MB的水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 各組大鼠血清LDH 活性和CK-MB 水平的比較（±s）Tab 1 Comparison of serum LDH activity and CK-MB level of rats in each group（±s）

表1 各組大鼠血清LDH 活性和CK-MB 水平的比較（±s）Tab 1 Comparison of serum LDH activity and CK-MB level of rats in each group（±s）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與缺血再灌注組比較，□□P＜0.01；與抑制劑組比較，●●P＜0.01。

CK-MB（ng/mL）60.21±5.61 61.74±6.92 184.39±16.36△△91.82±12.14□□225.38±17.21□□178.95±9.68●●337.116＜0.001組別空白組模型組缺血再灌注組橙皮苷組抑制劑組橙皮苷+抑制劑組n LDH（U/L）10 10 89 7 8 FP 923.12±23.15 934.44±31.25 2 414.51±163.25△△1 291.67±104.67□□2 937.77±214.64□□2 312.34±193.54●●274.320＜0.001

2.3 橙皮苷對(duì)缺血心肌組織中SOD、MDA 和GSH的影響

與空白組相比，模型組大鼠心肌組織SOD 活性和GSH 水平略降低，MDA 水平略增加，組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組相比，缺血再灌注組大鼠心肌組織SOD 活性和GSH 水平顯著降低，MDA 水平顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與缺血再灌注組相比，橙皮苷組SOD 活性和GSH 水平顯著增加，MDA 水平顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而抑制劑組SOD 活性和GSH 水平顯著降低，MDA 水平顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與抑制劑組相比，橙皮苷+抑制劑組SOD 活性和GSH 水平顯著增加，MDA 水平顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表2。

表2 各組大鼠心肌組織SOD、MDA 和GSH 的比較（±s）Tab 2 Comparison of SOD，MDA and GSH in myocardial tissue of rats in each group（±s）

表2 各組大鼠心肌組織SOD、MDA 和GSH 的比較（±s）Tab 2 Comparison of SOD，MDA and GSH in myocardial tissue of rats in each group（±s）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與缺血再灌注組比較，□□P＜0.01；與抑制劑組比較，●●P＜0.01。

GSH（μmol/L）11.02±1.41 10.38±1.28 4.17±0.29△△7.93±1.17□□3.22±0.21□□4.09±0.71●●114.140＜0.001組別空白組模型組缺血再灌注組橙皮苷組抑制劑組橙皮苷+抑制劑組n 10 10 89 7 8 FP SOD（U/mg）21.34±3.11 20.08±2.75 10.76±1.32△△16.27±2.69□□7.82±1.22□□10.22±1.52●●51.875＜0.001 MDA（μmol/L）1.51±0.24 1.55±0.19 2.23±0.28△△1.73±0.18□□2.51±0.31□□2.27±0.24●●33.045＜0.001

2.4 橙皮苷對(duì)缺血心肌組織中4-HNE 表達(dá)的影響

與空白組相比，模型組大鼠心肌組織4-HNE 蛋白的表達(dá)略增加，組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組相比，缺血再灌注組大鼠心肌組織4-HNE 蛋白的表達(dá)顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與缺血再灌注組相比，橙皮苷組4-HNE 蛋白的表達(dá)顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而抑制劑組4-HNE 的表達(dá)顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與抑制劑組相比，橙皮苷+抑制劑組4-HNE 的表達(dá)顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見圖2、表3。

表3 各組大鼠心肌組織4-HNE 表達(dá)水平的比較（±s）Tab 3 Comparison of 4-HNE expression levels in myocardium of rats in each group（±s）

表3 各組大鼠心肌組織4-HNE 表達(dá)水平的比較（±s）Tab 3 Comparison of 4-HNE expression levels in myocardium of rats in each group（±s）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與缺血再灌注組比較，□□P＜0.01；與抑制劑組比較，●●P＜0.01。

組別空白組模型組缺血再灌注組橙皮苷組抑制劑組橙皮苷+抑制劑組4-HNE 的表達(dá)量（IOD）0.093±0.012 0.102±0.015 0.281±0.029△△0.161±0.024□□0.329±0.031□□0.278±0.026●●180.284＜0.001 n 10 10 89 7 8 FP

圖2 橙皮苷對(duì)心肌組織4-HNE 表達(dá)的影響（×200 倍）Fig 2 Effect of hesperidin on the expression of 4-HNE in myocardial tissue（×200）

2.5 橙皮苷對(duì)缺血心肌組織中SIRT1/Nrf2/HO-1信號(hào)通路的影響

與空白組大鼠心肌組織中SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白相比，模型組大鼠心肌組織SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白的表達(dá)均無明顯變化，組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組相比，缺血再灌注組大鼠心肌組織SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與缺血再灌注組相比，橙皮苷組SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白的表達(dá)均顯著上調(diào)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而抑制劑組SIRT1、Nrf2 和HO-1蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與抑制劑組相比，橙皮苷+抑制劑組SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白的表達(dá)均顯著上調(diào)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表4、圖3。

表4 各組大鼠心肌組織SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白表達(dá)的比較（±s）Tab 4 Comparison of SIRT1，Nrf2 and HO-1 protein expression in myocardial tissue of rats in each group（±s）

表4 各組大鼠心肌組織SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白表達(dá)的比較（±s）Tab 4 Comparison of SIRT1，Nrf2 and HO-1 protein expression in myocardial tissue of rats in each group（±s）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與缺血再灌注組比較，□□P＜0.01；與抑制劑組比較，●●P＜0.01。

組別n SIRT1/β-actin Nrf2/β-actin HO-1/β-actin 1.25±0.22 1.27±0.19 0.61±0.12△△1.04±0.17□□0.29±0.03□□0.60±0.09●●66.843＜0.001空白組模型組缺血再灌注組橙皮苷組抑制劑組橙皮苷+抑制劑組10 10 89 7 8 FP 1.21±0.15 1.22±0.16 0.52±0.06△△0.92±0.13□□0.26±0.02□□0.56±0.13●●96.502＜0.001 1.28±0.21 1.30±0.23 0.55±0.09△△1.02±0.16□□0.31±0.05□□0.57±0.11●●42.957＜0.001

圖3 各組大鼠心肌組織SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白表達(dá)的比較Fig 3 Comparison of SIRT1，Nrf2 and HO-1 protein expression in myocardial tissue of rats in each group

3 討論

心肌缺血/再灌注過程中會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧（reactive oxygen species，ROS），同時(shí)合并DM 可以通過代謝紊亂、炎癥、氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡等多種途徑加重心血管系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能性損傷，其中氧化應(yīng)激在DM 心肌缺血/再灌注損傷中發(fā)揮核心作用［10］。通常情況下，心肌細(xì)胞中的ROS 處于較低水平，大量釋放的過氧化物通過破壞膜蛋白酶、膜受體及各離子通道等途徑降低細(xì)胞膜的活性，從而誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷［11］。SOD 和GSH 為體內(nèi)重要的抗氧化酶，具有清除自由基的作用。SOD 通過催化產(chǎn)生超氧自由基從而消除代謝過程中的有害物質(zhì)，而GSH 作為GSH-Px 的底物可以通過非酶促反應(yīng)與氧自由基結(jié)合，達(dá)到抗氧化、衰老和清除自由基的作用［12］。MDA 和4-HNE 是生物膜上自由基攻擊發(fā)生脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物，是衡量自由基和脂質(zhì)過氧化的重要指標(biāo)［13］。

Sirt1 是sirtuins 家族的一員，通過參與相關(guān)蛋白的乙酰化反應(yīng)在線粒體功能、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激等多種過程中發(fā)揮重要的作用［14］。SIRT1 是心血管疾病的重要治療靶點(diǎn)且在正常心肌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)水平，具有保護(hù)心肌和抗動(dòng)脈硬化的作用。研究證實(shí)，Sirt1 基因敲除大鼠心肌梗死面積較正常大鼠顯著增加，而上調(diào)Sirt1 基因的表達(dá)能夠減少心肌梗死面積和再灌注后心肌損傷［15，16］。Nrf2 作為內(nèi)源性抗氧化因子，通過調(diào)控心肌細(xì)胞的凋亡、自噬、抗氧化、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和線粒體功能等多種途徑發(fā)揮保護(hù)心肌細(xì)胞損傷的作用［17］。正常狀態(tài)下，Nrf2 與Keap1 結(jié)合定位于細(xì)胞質(zhì)中，處于失活狀態(tài)。急性心肌缺血過程中產(chǎn)生的大量ROS 促進(jìn)Nrf2 從Nrf2-Keap1 復(fù)合物中分離并進(jìn)入細(xì)胞核中，通過與靶基因啟動(dòng)子上抗氧化應(yīng)答元件結(jié)合促進(jìn)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄及誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗氧化酶來對(duì)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)［18，19］。此外，有研究證實(shí)，Nrf2 還能夠通過促進(jìn)鐵死亡參與DM 大鼠心肌缺血再 灌注損傷［20］。HO-1 是Nrf2 下游 的靶基因，是機(jī)體重要的抗氧化應(yīng)激酶。氧化應(yīng)激狀態(tài)下，游離的Nrf2 進(jìn)入細(xì)胞核，通過與巨噬細(xì)胞武裝因子（specific macrophage arming factor，sMaf）形成二聚體的形式結(jié)合HO-1，進(jìn)而促進(jìn)HO-1 的轉(zhuǎn)錄水平［21］。研究證實(shí)，上調(diào)HO-1 的表達(dá)能夠改善心肌缺血再灌注損傷，而敲除HO-1 能夠通過增加心肌氧化應(yīng)激水平從而加重DM 心肌缺血再灌注損傷［22］。

橙皮苷中由一分子蕓香糖和橙皮素組成的天然黃酮類化合物，主要存在于柑橘屬水果的果皮中。有研究證實(shí)，橙皮苷可以通過AMPK 進(jìn)而調(diào)控脂質(zhì)代謝及胰島素信號(hào)通路，從而發(fā)揮降糖、降脂和改善胰島素抵抗的作用［23］。此外，還有研究顯示橙皮苷能夠通過激活MAPK 信號(hào)通路，從而誘導(dǎo)人胃癌AGS 細(xì)胞線粒體依賴性凋亡［24］。本研究通過高脂飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素腹腔注射復(fù)制2 型糖尿病大鼠模型，在此基礎(chǔ)上通過左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎30 min 和再灌注2 h 構(gòu)建心肌缺血/再灌注損傷模型。研究結(jié)果顯示，缺血再灌注組大鼠血清LDH 和CK-MB 水平顯著增加，提示造模成功。而橙皮苷能夠顯著降低血清LDH 和CK-MB 的水平，表明橙皮苷預(yù)處理能夠顯著降低心肌損傷的程度和改善心肌細(xì)胞的代謝水平。同時(shí)，橙皮苷還能夠顯著增加抗氧化物SOD 的活性和GSH 的水平，降低MDA和4-HNE 的表達(dá)，發(fā)揮抗氧化的作用。此外，本研究結(jié)果顯示缺血再灌注組大鼠心肌組織SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)，下調(diào)SIRT1的表達(dá)進(jìn)而抑制SIRT1/Nrf2/HO-1 信號(hào)通路的活化顯著加重了氧化應(yīng)激水平和心肌損傷，進(jìn)一步證實(shí)SIRT1/Nrf2/HO-1 信號(hào)通路在DM 心肌缺血再灌注中的重要作用。而橙皮苷能夠顯著上調(diào)SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白的表達(dá)，而在SIRT1 抑制劑的作用下，橙皮苷對(duì)SIRT1、Nrf2 和HO-1 蛋白的調(diào)控和抗氧化應(yīng)激的作用被顯著抑制，由此證實(shí)SIRT1/Nrf2/HO-1 信號(hào)通路可能是橙皮苷治療DM 心肌缺血再灌注的重要途徑。

綜上所示，本研究結(jié)果表明橙皮苷能夠抑制心肌損傷過程中的氧化應(yīng)激水平，從而改善糖尿病心肌缺血再灌注損傷。橙皮苷的這一作用可能與其激活SIRT1/Nrf2/HO-1 信號(hào)通路密切相關(guān)。

作者貢獻(xiàn)度說明：

實(shí)驗(yàn)由馬振旺設(shè)計(jì)，姜德友指導(dǎo)，蔡紹杰和郭婧完成實(shí)驗(yàn)造模、藥物干預(yù)；袁星星負(fù)責(zé)指標(biāo)檢測；胡丙成對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行審核及統(tǒng)計(jì)分析。論文由馬振旺撰寫，姜德友審稿。

所有作者聲明不存在利益沖突關(guān)系。