李園園 毛鶴 曹毅 林金 陶茂燦

銀屑病是一種多因子免疫介導的炎癥性疾病，具有慢性復發(fā)-緩解往復的過程，全球發(fā)病率約2%～3%[1]。銀屑病病情頑固，易反復發(fā)作，在經(jīng)治療消退的原皮損基礎上會出現(xiàn)新的病變，若缺乏有效的治療，皮疹反復可引起患者抑郁，甚至自殺[2]。尋常型銀屑病是銀屑病最常見的類型，見于90%以上的臨床銀屑病患者，皮損反復發(fā)作是其顯著的臨床特征和治療難點，一旦停止治療，皮損可快速復發(fā)，其中復發(fā)部位90%出現(xiàn)在原皮損部位[3]。傳統(tǒng)免疫抑制劑治療藥物包括環(huán)孢素 A、甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）、維甲酸、阿普斯特等，均存在一定不良反應[4]；而新型治療生物制劑價格昂貴，臨床應用存在一定的局限性，存在一定的耐藥性[5]，且在傳統(tǒng)免疫抑制劑和生物制劑治療后，大部分患者皮疹仍反復發(fā)生。

盡管銀屑病復發(fā)機制仍尚不明確，但大量研究結果表明組織駐留記憶T細胞（tissue-resident memory T cells，TRM）在銀屑病的發(fā)病、病程進展，尤其是皮損復發(fā)中發(fā)揮重要作用：皮膚TRM是記憶性T細胞中的重要亞群，且在外周組織中能夠長期存活和低遷移[6]；皮膚 TRM分為 CD8+和 CD4+兩個亞群，CD8+TRM大部分分布于表皮，CD4+TRM主要分布于真皮[7]；研究發(fā)現(xiàn)，銀屑病皮損處含有大量的CD8+TRM，且CD8+TRM是IL-17A的主要來源[8]。本文就TRM在銀屑病復發(fā)中的作用和調(diào)節(jié)機制的研究進展作一綜述。

1 尋常型銀屑病復發(fā)與CD8+TRM的關系

TRM是記憶性T細胞中的重要亞群。當外源抗原進入皮膚時，抗原被樹突狀細胞識別后呈遞給原始T細胞，后者被激活后，部分增殖并分化為效應性T細胞而遷移至炎癥部位或B細胞區(qū)域，部分分化成記憶性T細胞的前體而發(fā)揮免疫記憶的功能。根據(jù)效應功能、遷移能力和表面受體差異，目前記憶性T細胞可進一步分類為中樞記憶性T細胞（central memory T cells，TCM）、效應記憶性T 細胞（effector memory T cells，TEM）以及TRM等亞群[9]。TRM不表達CD62L或CCR7，卻持續(xù)表達 CD69、CD103、CD49a和CD44等受體，表現(xiàn)為具有在外周組織中長期存活及低遷徙的獨有特性，且具備與TCM或TEM細胞不同的獨特轉(zhuǎn)錄譜[6]。TRM一旦駐留在外周組織就不會因感染等刺激而再回到循環(huán)中[10]。

Boyman等[11]首次提出TRM在銀屑病發(fā)病中的作用，其研究團隊發(fā)現(xiàn)將銀屑病患者的非皮損區(qū)外觀正常的皮膚移植到免疫缺陷小鼠上時，會出現(xiàn)完全的銀屑病病變。目前大量研究結果表明，TRM生物學特性對于銀屑病復發(fā)至關重要，而目前銀屑病治療方法包括窄譜UVB、維甲酸、MTX、TNF-α及IL-12/23生物制劑，均無法消除TRM，因此這為患者在原皮損處恢復銀屑病炎癥反饋回路提供了一種潛在的機制[12]。在銀屑病中，表皮層的CD8+TRM表達皮膚淋巴抗原（cutaneous lymphocyte antigen，CLA）、細胞趨化因子受體 6（Chemokine receptor6，CCR6）、CD103 和 IL-23R抗原，并在體外刺激過程中產(chǎn)生IL-17A[2]。CD69、CD103是人類和小鼠皮膚CD8+TRM最重要的特征表面標志物，對TRM在皮膚駐留和長期生存發(fā)揮重要作用，且是大部分表皮TRM共同表達的兩種分子[13]。CD69抑制鞘氨醇-磷酸受體1型在細胞表面的表達和功能，從而阻斷TRM進入外周血和淋巴結。CD103是一種αβ7整合素α鏈，與角質(zhì)細胞表達的E-粘連蛋白結合。CD69和CD103的表達決定了皮膚CD8+TRM在皮膚組織中長期生存和低遷徙特性。研究證實，在銀屑病患者皮損和非皮損區(qū)中，均含有大量CD8+TRM，可持續(xù)產(chǎn)生IL-17，促進銀屑病復發(fā)。Kurihara等[14]取銀屑病患者皮損組織進行活檢，發(fā)現(xiàn)表皮中表達CD103的CD8+TRM的數(shù)量與表皮厚度相關，提示CD8+TRM在銀屑病皮損形成中起到重要作用。Vo等[15]采用免疫熒光方法檢測了銀屑病患者非皮損區(qū)、皮損區(qū)和健康人群皮膚的TRM表型特征，發(fā)現(xiàn)與健康人群皮膚相比，表達CD103的CD8+TRM在銀屑病患者非皮損和皮損區(qū)均大量表達。此外，在病程較長的銀屑病患者中，皮損處的IL-17A往往高表達。TRM長期存活，且具有抗凋亡能力。TRM在皮損全部緩解后，仍可分泌IL-17A，且相關治療僅能抑制其活性[16]。

因此，目前認為尋常型銀屑病復發(fā)主要與表達CD103、CD69的CD8+TRM密切相關。TRM的發(fā)現(xiàn)給臨床上治療銀屑病、減少皮損復發(fā)提供了潛在機制。對于TRM相關活性調(diào)控機制的研究及長期存活特性的阻斷均有望成為銀屑病復發(fā)防治的新干預靶點。

2 轉(zhuǎn)化生長因子（transformation growth factor-β，TGF-β）信號調(diào)控皮膚CD8+TRM分化形成及長期生存

TGF-β是一組可調(diào)節(jié)細胞生長和分化的細胞因子，包含 TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3 3 個亞型，其中TGF-β1表達最廣泛、含量最多。TGF-β超家族成員通過由Ⅱ型和Ⅰ型受體組成的受體復合物發(fā)出信號。TGF-β信號從其膜受體至胞核的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導由多種Smad分子介導或調(diào)節(jié)。Smad蛋白家族的9個成員可分為 3 類：（1）受體調(diào)節(jié)型 Smad，由 Smads、Smad1、Smad2、Smad3、Smad5、Smad8 及 Smad9 組成，這一類受體可被直接磷酸化發(fā)揮作用；（2）共同調(diào)節(jié)型Smads，即Smad4，主要通過與受體調(diào)節(jié)型Smads結合參與信號轉(zhuǎn)導；（3）抑制性 Smad，由 Smad6和 Smad7構成，這一類Smad與第一類結構相似，主要的功能是抑制受體調(diào)節(jié)型Smad的磷酸化。研究者采用轉(zhuǎn)基因小鼠模型進行實驗，結果發(fā)現(xiàn)，使用Smad3抑制劑局部治療可阻斷TGF-β信號轉(zhuǎn)導，并可大量降低TGF-β1、IL-6、IL-23以及IL-17A水平，引起T淋巴細胞和巨噬細胞的浸潤減少[17]。而Hu等[18]研究發(fā)現(xiàn)TGF-β可通過一種不需要下游信號中間體Sma和mad相關蛋白（Smad4）的信號通路來促進肺組織記憶T細胞的發(fā)育。

早在20年前，Kilshaw等[19]的體外研究結果已證實TGF-β信號可明顯促進活化的T細胞CD103的表達。Mani等[20]的研究結果表明初始穩(wěn)態(tài)CD8+T細胞分化成TRM需要TGF-β。在皮膚組織中，TGF-β在TRM分化形成和生存中發(fā)揮著重要作用。Nath等[21]基因組學研究結果發(fā)現(xiàn)TRM信號的很大一部分可以歸因于TGF-β信號，TGF-β在建立TRM的駐留特異性轉(zhuǎn)錄譜方面具有廣泛的分布，這在不同組織的TRM中均可檢測到，因而其研究團隊進一步提出，構成型TGF-β信號通路可能與它們在組織部位的長期存在有關。Hirai等[22-23]研究結果表明在淋巴結的抗原誘導擴增后，CD8+效應T細胞分化形成CD8+TRM，且其在表皮長期生存需要TGF-β的持續(xù)參與。

研究表明皮膚中的TGF-β激活是CD8+TRM產(chǎn)生和持續(xù)生存所必需的條件，可影響細胞的長期生存[20，23-24]。TGF-β 以非共價的形式與潛伏相關肽（latencyassociated peptide，LAP）結合，不具有生物活性。整合素 αvβ6和 αvβ8與 LAP 中的 RGD（Arg-Gly-Asp）結合，介導LAP與TGF-β的分離，使TGF-β獲得生物活性。角質(zhì)細胞表達的整合素αvβ6和αvβ8激活TGF-β亦是表皮CD8+TRM發(fā)育和生存所必需的條件[25]。

3 皮膚TGF-β信號與CD8+TRM內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子

CD8+T細胞在感染過程中的命運取決于多種轉(zhuǎn)錄因子的綜合活性。然而，控制TRM分化和穩(wěn)態(tài)的分子信號目前尚未完全了解。目前TRM在皮膚感染和腫瘤形成的調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子主要包括 Eomes、T-bet、Hobit、Blimp-1 和 Runt相關轉(zhuǎn)錄因子 3（Runt-related transcription factor 3，Runx3）。T-box 轉(zhuǎn)錄因子，包括T-bet和Eomes是CD8+T細胞的重要調(diào)節(jié)因子，在T淋巴細胞分化和記憶表型中發(fā)揮協(xié)同和冗余的作用。T-bet在效應T細胞和TEM上高表達，當效應T細胞進展為TEM時，Eomes高表達，并在維持長期記憶中至關重要。然而，TRM分化需要在T-bet表達受限的情況下關閉Eomes。T-bet通過與TGF-β信號下游的Smad3競爭結合整合素-αE啟動子來抑制CD103的表達[25]。Mohammed等[25]發(fā)現(xiàn)在小腸、肝和肺組織中，TGF-β信號在CD103、CD69表達、CD8+TRM存活、T-bet和Eomes下調(diào)中起重要作用。

Mackay等[26]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子Blimp-1可以協(xié)同的方式與Hobit聯(lián)合促進CD8+TRM的形成。Blimp-1在TRM內(nèi)表達上調(diào)，與相關的轉(zhuǎn)錄因子Hobit可一起介導TRM的發(fā)育。在CD8+T細胞譜系中，Hobit是以TRM特異性的方式表達，且TRM Hobit的表達依賴于低表達的T-bet和IL-15。Milner等[27]通過計算和整合小鼠體內(nèi)RNA干擾篩選，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子Runx3是TRM分化和穩(wěn)態(tài)的關鍵調(diào)控因子。TGF-β信號誘導Runx3的表達，而Runx3在CD103的表達上發(fā)揮重要作用。Wang等[28]研究結果發(fā)現(xiàn)Runx3可能在TRM中作用于Hobit和Blimp-1的上游。

4 小結及展望

目前關于TGF-β信號與CD8+TRM在皮膚上的關系研究，主要集中在病毒或疫苗誘導TRM表達CD69和CD103等重要標志物及該細胞的抗感染哨兵功能上。

綜上所述，TGF-β信號可能在尋常型銀屑病的復發(fā)中起到重要作用。本研究團隊提出研究假說（圖1）：銀屑病角質(zhì)細胞表達整合素αvβ6和αvβ8可激活TGF-β，TGF-β信號可通過調(diào)控銀屑病患者皮損的CD8+TRM內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子 [抑制T-bet、Eomes，上調(diào)Runx3和（或）Hobit-Blimp-1]，促進 CD8+TRM 的分化形成及生存，持續(xù)分泌IL-17，在尋常型銀屑病的復發(fā)中發(fā)揮重要作用。這個假說有待筆者進一步研究探討，基于TGF-β對銀屑病患者皮膚CD8+TRM相關活性調(diào)控作用，TGF-β有望成為銀屑病復發(fā)防治的新干預靶點。

圖1 TGF-β信號介導CD8+TRM分化形成和生存干預銀屑病復發(fā)機制假說圖