高娟，邢海洲

白血病是一類常見(jiàn)的造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，主要表現(xiàn)為克隆性白血病細(xì)胞增殖失控、分化障礙、凋亡受阻進(jìn)而導(dǎo)致其在骨髓和其他造血組織中大量累積，浸潤(rùn)其他非造血組織和器官，同時(shí)抑制正常造血功能。因此，如何有效的抑制白血病細(xì)胞的增殖促進(jìn)其凋亡對(duì)白血病的治療意義重大。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類具有18～22 個(gè)核苷酸的非編碼小RNA，在白血病的診斷、預(yù)后和治療中發(fā)揮著重要作用［1-2］。微小RNA-218-5p（miR-218-5p）是近年的研究熱點(diǎn)miRNA，研究發(fā)現(xiàn)，miR-218-5p 在白血病病人中表達(dá)下調(diào)，過(guò)表達(dá)miR-218 通過(guò)靶向SNX4抑制白血病細(xì)胞增殖和侵襲，但miR-218-5p在白血病中的作用機(jī)制尚未完全闡明［3-4］。生物信息學(xué)分析顯示，B細(xì)胞淋巴瘤因子3基因（B-cell CLL/lymphoma 3，BCL3）能夠和miR-218-5p 相互作用，BCL3最初發(fā)現(xiàn)于B淋巴細(xì)胞白血病，研究發(fā)現(xiàn)BCL3在白血病病人體內(nèi)表達(dá)顯著上調(diào)［5］。但miR-218-5p能否靶向BCL3 參與對(duì)白血病細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控尚未可知。因此，通過(guò)以下研究，以探討miR-218-5p對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響，初步探討其作用機(jī)制，以期為白血病的治療提供新的策略。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 主要材料和試劑 人慢性髓原白血病細(xì)胞K562購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)；RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、青鏈霉素雙抗、噻唑藍(lán)（MTT）試劑盒購(gòu)于美國(guó)Gibco 公司；LipofectamineTM2000 購(gòu)于美國(guó)Invitrogen公司，總RNA提取試劑盒購(gòu)于上海生工生物工程有限公司；模擬物陰性對(duì)照（miR-con）、miR-218-5p模擬物（miR-218-5p mimics）、干擾對(duì)照（si-con）、干擾BCL3（si-BCL3）、空載體（pcDNA）、過(guò)表達(dá)BCL3（pcDNA-BCL3）、抑制物對(duì)照（anti-miR-con）、抑制物miR-218-5p（anti-miR-218-5p）、BCL3 野生型熒光素酶載體（WT-BCL3）以及BCL3 突變型熒光素酶載體（MUT-BCL3）的構(gòu)建由上海吉瑪制藥有限公司提供；膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素（Annexin V-FITC）/碘化丙啶（propidium iodide，PI）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京凱基生物技術(shù)有限公司；B 細(xì)胞淋巴瘤因子3（BCL3）兔多克隆抗體、細(xì)胞增殖抗原（Ki67）兔多克隆抗體、細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）兔單克隆抗體、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Cleaved Caspase-3）兔多克隆抗體購(gòu)于美國(guó)Abcam 公司；山羊抗兔Ⅱ抗購(gòu)于廣西銳博生物科技技術(shù)有限公司。

1.1.2 樣本收集 白血病骨髓樣本20例來(lái)源于2016年1月至2018年1月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院的住院病人，所有病人均在其初診時(shí)采集其骨髓標(biāo)本。另取同時(shí)期10例正常骨髓捐獻(xiàn)者骨髓標(biāo)本為對(duì)照組。本研究在術(shù)前病人或其近親屬均簽署知情同意書，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染和分組 將K562細(xì)胞接種于含有10%胎牛血清、1%青鏈霉素雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基，于37 ℃、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)為5%的細(xì)胞培養(yǎng)箱進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。按照1∶3比例傳代培養(yǎng)，選取對(duì)數(shù)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)研究。按照每孔5×103個(gè)K562細(xì)胞接種于96孔板，按照LipofectamineTM2000 使用說(shuō)明分別將miR-con、miR-218-5p mimics、si-con、si-BCL3轉(zhuǎn)染至K562 細(xì)胞，依次標(biāo)記為miR-con 組、miR-218-5p 組、si-con組、si-BCL3組，轉(zhuǎn)染6 h更換培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)染48 h用胰蛋白酶消化收集細(xì)胞，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析。此外，正常培養(yǎng)的K562 細(xì)胞標(biāo)記為NC 組（對(duì)照組）。為進(jìn)一步驗(yàn)證miR-218-5p 是通過(guò)調(diào)控BCL3 表達(dá)影響白血病細(xì)胞的增殖和遷移，進(jìn)行回復(fù)實(shí)驗(yàn)，將miR-218-5p mimics 分別與pcDNA 或pcDNA-BCL3共轉(zhuǎn)染K562 細(xì)胞，分別標(biāo)記為miR-218-5p+pcDNA組和miR-218-5p+pcDNA-BCL3 組檢測(cè)K562 細(xì)胞的增殖和凋亡變化。

1.2.2 RT-qPCR 檢測(cè) 取轉(zhuǎn)染48 h 的各組K562 細(xì)胞，按照TRIzol 總RNA 提取試劑盒提取各組細(xì)胞的總RNA，檢測(cè)總RNA 純度后，采用一步法RT-PCR試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后將cDNA 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，利用2-ΔΔCT法計(jì)算miR-218-5p 和BCL3 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。引物序列如下：miR-218-5p 正向引物 5’-TTGCGGATGGTTCCGTCAAGCA-3’，反向引物5’-ATCCAGTGCAGGGTCCGAGG-3’；U6 正向引物5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反向引物5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’；BCL3 正向引物5’-GAAAACAACAGCCTTAGCATGGT-3’，反向引物5’-CTGCGGAGTACATTTGCG-3’；β-actin 正向引物5’-CCAACCGCGAGAAGATGA-3’，反向引物 5’-CCAGAGGCGTACAGGGATAG-3’。

1.2.3 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力 轉(zhuǎn)染48 h 時(shí)，各取一組K562 細(xì)胞，向每孔內(nèi)加入終濃度為5 mg/mL的MTT 試劑20 μL，培養(yǎng)箱孵育4 h，向每孔內(nèi)加入二甲基亞砜（DMSO）150 μL，培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育2 h 至結(jié)晶充分溶解，用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)490 nm 處測(cè)定各孔的吸光度值，計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)染48 h 后，胰蛋白酶消化細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS 液洗滌細(xì)胞2 次，離心收集細(xì)胞。加入適量的1×結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度約為1×106個(gè)/毫升，取100 μL 細(xì)胞懸液加入流式管內(nèi)，加入5 μL Annexin V-FITC，室溫避光，輕輕地混勻10 min，再加入5 μL 的PI，室溫避光孵育5 min，補(bǔ)加PBS 液至500 μL，混勻后，1 h 內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

1.2.5 蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）檢測(cè) 轉(zhuǎn)染48 h后，收集各組細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液于冰上裂解30 min，離心收集上清液即為細(xì)胞總蛋白。采用BCA 蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。取適量蛋白樣品，煮沸5 min 使其充分變性，隨后進(jìn)行上樣和十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），利用濕法轉(zhuǎn)膜裝置將細(xì)胞蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜。室溫條件5%脫脂牛奶封閉1 h；Ⅰ抗溶液4 ℃孵育過(guò)夜；二抗室溫條件孵育1 h；凝膠成像系統(tǒng)曝光后分析目的條帶的灰度值。

1.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè) 采用生物信息學(xué)軟件targetscan 進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)顯示，BCL3 的3’-UTR 含有與miR-218-5p 的互補(bǔ)配對(duì)的核苷酸序列，BCL3 是miR-218-5p 的潛在靶基因。利用LipofectamineTM2000 將BCL3 野生型熒光素酶報(bào)告基因載體WT-BCL3 和突變型熒光素酶報(bào)告基因載體MUT-BCL3 分別與miR-218-5p mimics 或miR-con 共轉(zhuǎn)染K562 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48 h 后，雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒分析各組細(xì)胞的熒光素酶活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0 軟件對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，多組間間數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析，進(jìn)一步組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-218-5p和BCL3白血病骨髓細(xì)胞和正常人骨髓細(xì)胞中的表達(dá)圖1、表1、表2顯示，與正常人骨髓細(xì)胞相比，白血病骨髓細(xì)胞中miR-218-5p的表達(dá)水平顯著降低，BCL3 mRNA和BCL3蛋白的表達(dá)水平顯著升高；與人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞HS-5比較，K562細(xì)胞中miR-218-5p的表達(dá)水平顯著降低，BCL3 mRNA和BCL3蛋白的表達(dá)水平顯著升高（P＜0.001）。

圖1 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)白血病骨髓細(xì)胞和正常人骨髓細(xì)胞中BCL3表達(dá)

表1 檢測(cè)白血病骨髓細(xì)胞和正常人骨髓細(xì)胞中miR-218-5p和BCL3表達(dá)/

表1 檢測(cè)白血病骨髓細(xì)胞和正常人骨髓細(xì)胞中miR-218-5p和BCL3表達(dá)/

注：miR-218-5p 為微小-218-5p，BCL3 mRNA 為B 細(xì)胞淋巴瘤因子3 基因mRNA，BCL3 protein 為B 細(xì)胞淋巴瘤因子3 基因蛋白，Normal為正常人骨髓細(xì)胞，Cancer為白血病骨髓細(xì)胞。

表2 檢測(cè)人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞HS-5和白血病K562細(xì)胞中miR-218-5p和BCL3表達(dá)/

表2 檢測(cè)人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞HS-5和白血病K562細(xì)胞中miR-218-5p和BCL3表達(dá)/

注：miR-218-5p 為微小-218-5p，BCL3 mRNA 為B 細(xì)胞淋巴瘤因子3基因mRNA，BCL3 protein為B細(xì)胞淋巴瘤因子3基因蛋白，HS-5為人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞，K562為白血病細(xì)胞。

2.2 miR-218-5p抑制白血病K562細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡圖2、表3 顯示，與NC 組和miR-con 組比較，miR-218-5p組白血病K562細(xì)胞miR-218-5p的表達(dá)水平顯著升高（P＜0.001），表明過(guò)表達(dá)miR-218-5p的K562 細(xì)胞株構(gòu)建成功。與NC 組和miR-con 組比較miR-218-5p 組白血病K562 細(xì)胞Cyclin D1 和Ki67蛋白的表達(dá)水平顯著降低，Cleaved-Caspase-3的表達(dá)水平顯著升高，細(xì)胞存活率顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.001）。提示，過(guò)表達(dá)miR-218-5p抑制白血病K562細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

圖2 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)白血病K562細(xì)胞Ki67、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3表達(dá)（A）和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白血病K562細(xì)胞凋亡（B）

表3 上調(diào)miR-218-5p表達(dá)對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響/

表3 上調(diào)miR-218-5p表達(dá)對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響/

注：NC 為對(duì)照組，miR-con 為模擬物陰性對(duì)照，miR-218-5p 為miR-218-5p 模擬物，Ki67 為細(xì)胞增殖抗原，CyclinD1 為細(xì)胞周期蛋白D1，Cleaved Caspase-3為活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶。①與miR-con組比較，P＜0.001。

2.3 miR-218-5p 靶向BCL3 調(diào)控其表達(dá)生物信息學(xué)軟件targetscan 在線預(yù)測(cè)顯示，miR-218-5p 和BCL3 的3’-UTR 存在部分連續(xù)的特異性結(jié)合位點(diǎn)，見(jiàn)圖3。表4顯示，與miR-con和WT-BCL3共轉(zhuǎn)染組比較，miR-218-5p 和WT-BCL3 共轉(zhuǎn)染組K562 細(xì)胞熒光素酶活性顯著降低（P＜0.001）；與miR-con 和MUT-BCL3共轉(zhuǎn)染組比較，miR-218-5p和MUT-BCL3共轉(zhuǎn)染組K562 細(xì)胞熒光素酶活性變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表5 顯示，與miR-con 組比較，miR-218-5p 組K562 細(xì)胞BCL3 蛋白的表達(dá)水平顯著降低；與antimiR-con 組比較，anti-miR-218-5p 組K562 細(xì)胞BCL3蛋白的表達(dá)水平顯著升高（P＜0.001）。以上結(jié)果提示，BCL3 是miR-218-5p 的靶基因，miR-218-5p 可靶向負(fù)性調(diào)控BCL3表達(dá)。

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)/

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)/

注：WT-BCL3 為BCL3 野生型熒光素酶載體，MUT-BCL3 為BCL3突變型熒光素酶載體。

表5 miR-218-5p調(diào)控BCL3的表達(dá)/

表5 miR-218-5p調(diào)控BCL3的表達(dá)/

注：BCL3 為B 細(xì)胞淋巴瘤因子3，miR-con 為模擬物陰性對(duì)照，miR-218-5p 為miR-218-5p 模擬物，anti-miR-con 為抑制物對(duì)照，antimiR-218-5p為抑制物miR-218-5p。①與miR-con 組比較，P＜0.001。②與anti-miR-con 組比較，P＜0.001。

圖3 miR-218-5p與BCL3互補(bǔ)的核苷酸序列（A）及miR-218-5p調(diào)控BCL3表達(dá)（B）

2.4 沉默BCL3 表達(dá)抑制白血病K562 增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡圖4、表6 顯示，與NC 組和si-con 組比較，si-BCL 組K562 細(xì)胞BCL3 的表達(dá)水平顯著降低，表明沉默BCL3 的K562 細(xì)胞株構(gòu)建成功。與NC組和si-con組比較，si-BCL 組K562細(xì)胞Cyclin D1 和Ki67 蛋白的表達(dá)水平顯著降低，Cleaved-Caspase-3 的表達(dá)水平顯著升高，細(xì)胞存活率顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.001）。提示，沉默BCL3 抑制白血病K562 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

表6 沉默BCL3表達(dá)對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響/

表6 沉默BCL3表達(dá)對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響/

注：NC 為對(duì)照組，si-con 為干擾對(duì)照，si-BCL3 為干擾BCL3，BCL3 為B 細(xì)胞淋巴瘤因子3，Ki67 為細(xì)胞增殖抗原，CyclinD1 為細(xì)胞周期蛋白D1，Cleaved Caspase-3為活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶。①與si-con組比較，P＜0.001。

圖4 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)沉默BCL-3表達(dá)對(duì)白血病K562細(xì)胞BCL3、Ki67、Cyclin D1和Cleaved Caspase-3表達(dá)的影響

2.5 過(guò)表達(dá)BCL3 部分逆轉(zhuǎn)miR-218-5p 對(duì)白血病細(xì)胞K562 增殖和凋亡的影響圖5、表7 顯示，與miR-con組比較，miR-218-5p 組K562 細(xì) 胞BCL3、Ki67和Cyclin D1蛋白的表達(dá)水平顯著降低，Cleaved Caspase-3 蛋白的表達(dá)水平顯著升高，細(xì)胞存活率顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高；與miR-218-5p+pcDNA 組比較，miR-218-5p+pcDNA-BCL3 組K562 細(xì)胞BCL3、Ki67 和Cyclin D1 蛋白的表達(dá)水平顯著升高，Cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)水平顯著降低，細(xì)胞存活率顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著降低（P＜0.001）。提示，過(guò)表達(dá)BCL3能夠部分逆轉(zhuǎn)miR-218-5p對(duì)白血病細(xì)胞K562增殖和凋亡的影響。

表7 過(guò)表達(dá)BCL3表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)miR-218-5p對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響/

表7 過(guò)表達(dá)BCL3表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)miR-218-5p對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響/

注：miR-con 為模擬物陰性對(duì)照，miR-218-5p 為miR-218-5p 模擬物，miR-218-5p+pcDNA 為miR-218-5p 模擬物+空載體，miR-218-5p+pcDNA-BCL3 為miR-218-5p 模擬物+過(guò)表達(dá)BCL3，BCL3 為B 細(xì)胞淋巴瘤因子3，Ki67 為細(xì)胞增殖抗原，CyclinD1 為細(xì)胞周期蛋白D1，Cleaved Caspase-3為活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶。①與miR-con組比較，P＜0.001。②與miR-218-5p+pcDNA組比較，P＜0.001。

圖5 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)過(guò)表達(dá)BCL3 部分能逆轉(zhuǎn)miR-218-5p對(duì)白血病K562細(xì)胞BCL3、Ki67、Cyclin D1和Cleaved Caspase-3表達(dá)的影響

3 討論

白血病是一種常見(jiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來(lái)其發(fā)病率呈升高趨勢(shì)［6］。骨髓移植作為白血病病人最有效的治療手段，卻存在供體難求、費(fèi)用昂貴、并發(fā)癥導(dǎo)致的死亡風(fēng)險(xiǎn)高等特點(diǎn)［7-8］。因此，探索新的白血病治療策略勢(shì)在必行。

近年來(lái)，大量的研究表明，miRNA在白血病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。miR-148b在急性髓系白血病病人及細(xì)胞系中的表達(dá)水平顯著降低，過(guò)表達(dá)miR-148b 可引起細(xì)胞周期G0 至G1 期阻滯，細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞凋亡率增加［9］；miR-320c在白血病病人中顯著低表達(dá)，miR-320c 表達(dá)水平升高是白血病病人預(yù)后良好的獨(dú)立因素，過(guò)表達(dá)miR-320c 可通過(guò)調(diào)控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信號(hào)通路抑制白血病細(xì)胞活性和克隆形成能力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抑癌基因作用［10］。近年來(lái)，miR-218-5p被報(bào)道在多種人類惡性腫瘤中具有抑癌基因作用。miR-218-5p 在胃癌組織中表達(dá)降低，miR-218-5p 低表達(dá)與胃癌晚期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良有關(guān)，過(guò)表達(dá)miR-218-5p 在體內(nèi)可抑制胃癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞G1期停滯，抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移［11］；miR-218-5p 在前列腺癌中表達(dá)下調(diào)，過(guò)表達(dá)miR-218-5p 抑制前列腺癌裸鼠異種移植瘤的生長(zhǎng)，抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抗腫瘤作用［12］。在白血病中，miR-218-5p 也是一種潛在的腫瘤抑制因子，但miR-218-5p 影響白血病進(jìn)展的機(jī)制尚未完全闡明。為探討miR-218-5p在白血病中的作用機(jī)制，本研究首先對(duì)白血病病人骨髓細(xì)胞和正常人骨髓細(xì)胞miR-218-5p的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示miR-218-5p 在白血病病人骨髓細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，與相關(guān)研究結(jié)論相吻合［13］。選取K562細(xì)胞進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)miR-218-5p 可顯著抑制Cyclin D1和Ki67蛋白表達(dá)，促進(jìn)Cleaved-Caspase-3 表達(dá)，抑制白血病K562 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。提示，上調(diào)miR-218-5p是白血病的潛在治療靶點(diǎn)。

為進(jìn)一步揭示miR-218-5p調(diào)控白血病細(xì)胞增殖和凋亡的分子機(jī)制，采用生物學(xué)信息軟件進(jìn)行預(yù)測(cè)靶基因，發(fā)現(xiàn)BCL3的3’-UTR存在miR-218-5p的部分結(jié)合位點(diǎn)。隨后采用雙熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)BCL3是miR-218-5p的靶基因，Western blotting檢測(cè)顯示miR-218-5p可負(fù)性調(diào)控BCL3表達(dá)。BCL3是一種原癌基因，BCL3的表達(dá)失調(diào)與乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌等實(shí)體腫瘤的進(jìn)展有關(guān)［14-15］。BCL3在宮頸癌組織中表達(dá)上調(diào)，BCL3陽(yáng)性表達(dá)與不良預(yù)后特征及生存率降低有關(guān)，下調(diào)BCL3抑制宮頸癌模型小鼠異種移植瘤的生長(zhǎng)［16］；BCL3在卵巢癌中呈高表達(dá)，BCL3可促進(jìn)程序性死亡配體1表達(dá)，增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的存活、增殖和遷移能力［17］；此外，BCL3高表達(dá)與急性髓系白血病病人生存期短密切相關(guān)［5］此外，BCL3的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病人的總生存期顯著相關(guān)，BCL3高表達(dá)預(yù)示腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)增加和預(yù)后較差［18］。本研究顯示，BCL3在白血病病人骨髓細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，沉默BCL3可抑制白血病K562 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與過(guò)表達(dá)miR-218-5p抑制BCL3的作用一致。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)BCL3可逆轉(zhuǎn)miR-218-5p對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響。提示miR-218-5p在白血病中起抑癌基因作用，通過(guò)靶向下調(diào)BCL3表達(dá)來(lái)影響白血病細(xì)胞的增殖和凋亡。然而，miR-218-5p下游靶基因眾多［19-20］，后續(xù)將對(duì)其他靶基因進(jìn)行研究，全面揭示miR-218-5p對(duì)白血病細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控作用。

綜上所述，miR-218-5p 在白血病中表達(dá)下調(diào)，BCL3 表達(dá)上調(diào)，miR-218-5p 通過(guò)靶向調(diào)控BCL3 表達(dá)抑制白血病細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。本研究的發(fā)現(xiàn)為白血病的臨床治療指明了方向，miR-218-5p有望成為白血病的分子治療靶點(diǎn)。