張 偉，喬樹平，尚培中，劉 冰，李 偉，南潤玲

(1.中國人民解放軍陸軍第八十一集團軍醫(yī)院普通外科，河北 張家口 075000；2.河北懷來世濟醫(yī)院普通外科， 河北 懷來 075400；3.中國人民解放軍陸軍第八十一集團軍醫(yī)院檢驗病理科，河北 張家口 075000)

乳腺浸潤性導管癌(breast invasive ductal carcinoma，BIDC)是女性乳腺癌常見的一種病理類型，盡管采用術前新輔助化療、手術切除、術后化療、放射治療、內分泌治療、靶向治療、中藥治療、有氧運動等多種方法綜合治療，仍有不少病人較快出現(xiàn)復發(fā)轉移甚至死亡[1-4]。研究表明，許多腫瘤標志物與BIDC的發(fā)生發(fā)展密切相關[5-6]。SLeX(sialyl Lewis X)是細胞表面特有的一種糖類腫瘤標志物，系與選擇素發(fā)生黏附作用的配體之一；Maspin(mammary serine protease inhibitor)系乳腺絲氨酸蛋白酶抑制劑，在細胞外基質中可與一些參與細胞生長、侵襲的因子結合發(fā)揮抑癌作用。我們應用EliVisionTMplus免疫組織化學(IHC)染色二步法檢測SLeX和Maspin在BIDC及癌旁乳腺組織中的表達，探討其與部分臨床病理指標的相關性。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2014-05-2015-12月間陸軍第八十一集團軍醫(yī)院收治的80例BIDC患者的手術切除標本，年齡29～73歲，平均(55.0±8.7)歲；癌灶直徑1.0～6.5 cm，平均(3.7±2.1)cm；根據(jù)2017年《AJCC癌癥分期手冊(第8版)》進行TNM分期，其中T1期11例，T2期40例，T3期21例，T4期8例。根據(jù)術前彩超乳腺影像報告和數(shù)據(jù)系統(tǒng)(breast imaging，reporting and data system，BI-RADS)分類及其他影像學檢查、冰凍報告、納米碳示蹤情況，按照診療規(guī)范確定手術方式。對照組30例癌旁組織取自距癌灶3 cm處的同側乳腺。

納入標準：①病理判定及分類明確的BIDC(非特殊性)；②術前未接受過新輔助化療、放療等抗癌措施；③無嚴重內科系統(tǒng)性疾??；④凝血功能正常，無出血傾向。排除標準：①病理證實的原位癌、浸潤性小葉癌、硬癌、單純癌、浸潤性特殊癌或其他少見的組織類型；②并發(fā)其他部位惡性腫瘤的多元癌；③并發(fā)各種炎癥性疾??；④并發(fā)妊娠或其他嚴重系統(tǒng)性疾病。

診療方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批，病人及(或)親屬均于術前知情同意并簽字。

1.2 IHC染色方法

采用EliVisionTMplus IHC染色二步法檢測癌組織及癌旁乳腺組織SLeX和Maspin的表達。制備石蠟切片厚度為4μm。選取與蘇木精-伊紅染色相鄰的切片，采用微波儀修復抗原。鼠抗人SLeX即用型單克隆抗體、Maspin濃縮型單克隆抗體(工作濃度1：150)、3，3'-二氨基聯(lián)苯胺顯色劑和EliVisionTMplus試劑盒均購于福州邁新公司。技術步驟及陰性對照按說明書操作，陽性對照采用SLeX和Maspin陽性染色片。

1.3 判定標準

由2位病理醫(yī)師聯(lián)合觀察判定IHC染色結果。在清晰的背景下呈黃、棕、褐色顆粒者為陽性反應。計分方法：①染色深淺度：無染色、黃色、棕黃色、黃褐色，對應計0、1、2、3分；②染色百分比：≤5%、6%～30%、31%～69%、≥70%，對應計0、1、2、3分。①和②計分相加即為定性結果：≤2分為陰性(-)，3～6分均為陽性，其中3分、4分為弱陽性(+)，5分、6分為強陽性(++)。

1.4 觀察指標

①SLeX和Maspin在BIDC組織及癌旁乳腺組織中的表達部位及陽性率；②SLeX和Maspin表達與病人年齡、TNM分期、分化等級、淋巴結宏轉移、術后隨訪5年內復發(fā)轉移等臨床病理指標的相關性；③BIDC組織SLeX與Maspin表達的相關性。

1.5 統(tǒng)計學方法

運用SPSS 22.0分析數(shù)據(jù)。SLeX和Maspin陽性計數(shù)資料采用n(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，通過χ2值計算列聯(lián)系數(shù)進行相關性分析。檢驗水準α=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 BIDC組織及癌旁乳腺組織SLeX和Maspin表達的比較

BIDC組織及癌旁乳腺組織SLeX陽性染色多見于細胞膜和細胞質(圖1A～B)，Maspin蛋白陽性染色多見于細胞質和細胞核(圖2A～B)。癌組織SLeX和Maspin陽性率與癌旁乳腺組織比較差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)(表1)。

A：SLeX在BIDC組織強陽性表達 B：SLeX在癌旁乳腺組織陰性表達

A：Maspin在BIDC組織弱陽性表達 B：Maspin在癌旁乳腺組織強陽性表達

表1 BIDC組織及癌旁乳腺組織SLeX和Maspin表達比較 n(%)

2.2 BIDC組織SLeX和Maspin表達與病人臨床病理指標的關系

SLeX和Maspin表達與年齡無關(均P>0.05)。在TNM T3+T4期、低分化、有淋巴結宏轉移和5年內復發(fā)轉移病人中，SLeX高表達，Maspin低表達(均P<0.05)(表2)。

表2 BIDC組織SLeX和Maspin表達與病人臨床病理指標的關系 n(%)

表2(續(xù))

2.3 BIDC組織SLeX和Maspin表達的相關性

80例病人SLeX和Maspin同時陽性者28例，共陽性率為35.0%；同時陰性者1例，共陰性率為1.2%。經(jīng)相關性分析，SLeX和Maspin在BIDC的表達呈負相關(r=-0.33)(表3)。

表3 BIDC組織SLeX和Maspin表達的相關性 n(%)

3 討 論

多種腫瘤標志物的異常表達及協(xié)同作用與乳腺癌的生物學特性密切相關。為了探討SLeX和Maspin在乳腺癌的表達特點，提高研究的針對性及結果的客觀性，我們選擇臨床常見的BIDC作為研究對象，結果顯示，癌組織SLeX陽性率顯著高于癌旁乳腺組織，而Maspin陽性率顯著低于癌旁乳腺組織，表明兩者均可視為判斷乳腺良、惡性病變的標志物。

3.1 BIDC組織SLeX表達與病人年齡、TNM分期、分化等級及復發(fā)轉移的關系

SLeX(即CD15s)是腫瘤標志物SLeA(即CA19-9)的同分異構體，作為細胞表面重要的黏附分子，可與血管內皮細胞選擇素結合通過Lewis-Selectin轉移途徑導致癌轉移[7-8]。近年研究發(fā)現(xiàn)，SLeX在正常上皮細胞多為不表達或低表達，但在肺癌、肝癌、胰腺癌、結直腸癌等許多癌瘤中呈異常的高表達[9-11]。有研究報道，SLeX表達與乳腺癌細胞浸潤轉移有關，可視為病人預后不良的標志物[12-14]。本研究通過對69例SLeX陽性表達病人進行分組對比分析，結果表明，SLeX表達與年齡無關(P>0.05)；在TNM T3+T4期、低分化和有復發(fā)轉移病人中，SLeX表達顯著高于TNM T1+T2期、高分化+中分化、無復發(fā)轉移的病人(均P<0.05)，表明臨床分期越高(癌灶越大)、分化等級越低、復發(fā)轉移越早，SLeX陽性率越高。SLeX表達與BIDC惡性發(fā)展呈顯著正相關，其表達上調預示易發(fā)生復發(fā)轉移。

3.2 BIDC組織Maspin表達與病人年齡、TNM分期、分化等級及復發(fā)轉移的關系

Maspin是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的一員，與絲氨酸蛋白酶抑制劑高度同源。研究發(fā)現(xiàn)，Maspin在正常上皮細胞多為高表達，但在宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌等多種癌瘤中呈異常表達，通過MKL-1/miR-142-5p/DNMT1/Maspin信號通路可調控乳腺癌細胞增殖和轉移[15-18]。本研究通過對38例Maspin陽性表達病人進行分組對比分析，結果表明，Maspin表達與年齡無關(P>0.05)。在TNM T3+T4期、低分化和有復發(fā)轉移病人中，Maspin表達顯著低于TNM T1+T2期、高分化+中分化、無復發(fā)轉移的病人(均P<0.05)，表明臨床分期越高(癌灶越大)、分化等級越低、復發(fā)轉移越早，Maspin陽性率越低。Maspin表達與BIDC的惡性發(fā)展呈顯著負相關，其表達下調預示易發(fā)生復發(fā)轉移。有研究發(fā)現(xiàn)，Maspin細胞質陽性率與細胞核陽性率比值也與乳腺癌惡性發(fā)展行為顯著相關[19-20]。

3.3 BIDC組織SLeX和Maspin表達與淋巴結宏轉移的關系

淋巴結轉移是BIDC常見的轉移途徑，而前哨淋巴結轉移與否對乳腺癌的治療策略及預后評估具有重要指導價值[21-22]，利用納米碳示蹤、乳腔鏡技術，有助于提高淋巴結清除的精準性和徹底性，從而使術后對轉移淋巴結的IHC研究更全面可靠[23-24]。我們研究了SLeX和Maspin表達與淋巴結宏轉移的關系，結果表明，有淋巴結宏轉移與無淋巴結宏轉移病人SLeX和Maspin表達陽性率差異有顯著性(均P<0.05)，表明SLeX表達上調和(或)Maspin的表達下調均在BIDC淋巴結宏轉移中發(fā)揮了重要作用。Umekita等[25]研究了乳腺癌轉移前哨淋巴結Maspin mRNA表達，發(fā)現(xiàn)其陽性率不僅與原發(fā)癌灶Maspin表達水平密切相關，也是預測非前哨淋巴結轉移、超過4枚淋巴結轉移、淋巴管浸潤及腫瘤大小的獨立病理指標。

綜上，SLeX高表達和(或)Maspin低表達均與BIDC的惡性發(fā)展密切相關，且兩者表達呈負相關。檢測SLeX和Maspin的表達對評估病人預后及臨床治療效果具有一定指導價值。當前，基于SLeX和Maspin的分子診斷和抗癌治療為研究熱點之一，譬如應用H2受體拮抗劑西咪替丁、FAK抑制劑等抑制癌細胞SLeX的表達、對ER陽性乳腺癌應用氧化鋅納米顆粒增強癌細胞Maspin的表達等。相信隨著研究的不斷深入，有望開發(fā)出針對BIDC的靶向治療或化學治療新制劑，推進精準個體化分子治療的發(fā)展[7-8，26-27]。