張 潔，閆國棟，陳 崗，張正東，曾林子，周 敏，陳有才，陳 曦

布魯氏菌病(brucellosis,簡稱布病)是由布魯氏菌感染引起的人獸共患傳染病，傳染源主要為染疫動物，主要通過直接或間接接觸病畜、肉制品及排泄物等感染[1]。自貢市自2014年出現(xiàn)首次報告布病病例以來，疫情呈現(xiàn)快速增長態(tài)勢，并多次出現(xiàn)暴發(fā)疫情，為了解自貢市布病暴發(fā)疫情特征，為制定科學(xué)有效的防治策略提供依據(jù)，現(xiàn)將2016-2021年自貢市布病暴發(fā)疫情分析如下。

1 材料與方法

1.1 暴發(fā)疫情監(jiān)測 對自貢市2016-2021年醫(yī)療機構(gòu)報告的所有布魯氏病例進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，對其中從事牲畜相關(guān)工作人員以及存在流行病學(xué)關(guān)聯(lián)病例進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)查。暴發(fā)疫情指3周內(nèi)，同一鄉(xiāng)鎮(zhèn)、飼養(yǎng)場及屠宰加工廠等場所3例及以上急性期布病病例。

1.2 現(xiàn)場調(diào)查 對病例家庭成員及共同暴露者進(jìn)行問卷調(diào)查。聯(lián)合畜牧、食藥等相關(guān)部門開展聯(lián)合調(diào)查，查驗病例所在村(街道)周邊羊只交易、檢疫情況，評估病例所在街道及周邊羊肉餐館衛(wèi)生學(xué)狀況，了解羊肉加工流程及人員職業(yè)暴露情況。

1.3 病例定義

1.3.1 疑似病例 2016年以來自貢市醫(yī)療機構(gòu)報告的布病病例以及與病例有關(guān)的職業(yè)人群(含養(yǎng)殖、屠宰及餐館加工等)及家屬中，出現(xiàn)發(fā)熱伴關(guān)節(jié)肌肉疼痛、多汗乏力者。

1.3.2 確診病例 疑似病例中，血清學(xué)陽性或者細(xì)菌培養(yǎng)陽性。

1.3.3 隱性感染者 與病例具有共同暴露的人員血清學(xué)檢測陽性(SAT滴度≥1∶100)但無布病相關(guān)臨床表現(xiàn)者。

1.4 實驗室檢測 采取虎紅平板凝集試驗(RBT)及試管滴度試驗(SAT)對涉疫重點人群開展血清學(xué)篩查，實驗方法和判定參照WS 269-2019《布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)》。所有醫(yī)療機構(gòu)分離培養(yǎng)出的布魯氏菌菌株送上級疾病預(yù)防控制中心實驗室進(jìn)行鑒定和分型。

1.5 溯源分析 利用多位點可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列分析(multiple locus variable-number tandem repeat analysis,MLVA)技術(shù)，對布魯氏菌病菌株采用16個位點進(jìn)行引物擴增，根據(jù)測定的各點位PCR 產(chǎn)物長度與已知標(biāo)準(zhǔn)菌株16M的16個可變數(shù)名串聯(lián)重復(fù)序列(variable-number tandem repeat,VNTR)位點PCR產(chǎn)物序列、重復(fù)單元序列與串聯(lián)重復(fù)數(shù)目進(jìn)行比較，計算待測菌株16個位點的串聯(lián)重復(fù)數(shù)目[2-3]。將各位點重復(fù)序列重復(fù)數(shù)與MLVA數(shù)據(jù)庫(http://mlva.upsud.fr)收錄的布魯氏菌各種型菌株數(shù)據(jù)采用Bio Numerics 5.0軟件，利用非加權(quán)配伍圖平均法對16個位點進(jìn)行聚類分析，獲得MLVA聚類圖。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用Epi data 3.0軟件建立數(shù)據(jù)庫，利用Epi info7對數(shù)據(jù)進(jìn)行描述性統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié) 果

2.1 布病病例基本情況 2016-2021年自貢市醫(yī)療機構(gòu)報告布病病例35人，病例中男性占62.86%(22/35)；病例年齡跨度最小19歲，最大76歲，中位發(fā)病年齡為49歲；發(fā)病時間主要集中在每年3-6月；人群分類以從事餐館生肉加工、屠宰及養(yǎng)殖人員為主，分別占28.57%(10/35)、25.71%(9/35)及22.86%(8/35)。通過流行病學(xué)調(diào)查和重點人群篩查，共發(fā)現(xiàn)符合布病暴發(fā)疫情定義4起。

2.2 暴發(fā)疫情特征分析 4起暴發(fā)疫情傳染源均為病羊，均與外地輸入羊只存在關(guān)聯(lián)。暴發(fā)疫情一共涉及患者20人(含隱性感染者)，無死亡病例。20人布病患者中，其中7例為醫(yī)院報告，另外13例通過主動篩查發(fā)現(xiàn)；主動篩查時共采集相關(guān)人群血清樣本75份，經(jīng)檢測血清學(xué)抗體陽性13人，陽性率 17.33%，2人在一個最長潛伏期內(nèi)發(fā)病(以脫離傳染源起算)(表1和表2)。疫情輸入可能原因中，3起與養(yǎng)殖戶引種未檢疫羊相關(guān)，1起為羊肉餐館聚集。

表1 自貢市2016-2021年布病暴發(fā)疫情基本特征及重點人群篩查情況Tab.1 Epidemic characteristics and population screening of brucellosis outbreaks in Zigong City from 2016 to 2021

表2 自貢市2016-2021年布病暴發(fā)疫情20例病例基本情況Tab.2 Twenty cases of brucellosis outbreaks in Zigong City from 2016 to 2021

2.3 動物疫情調(diào)查 對自貢市4起因養(yǎng)殖、屠宰相關(guān)聯(lián)暴發(fā)疫情開展畜間血清學(xué)篩查，共采樣114只羊，檢出陽性19只，陽性率16.67%，撲殺109只山羊，并對其進(jìn)行無害化處理，見表3。

表3 畜間疫情血清學(xué)篩查Tab.3 Serological screening of animal epidemics

2.4 病例治療 對所有發(fā)現(xiàn)布病患者告知檢測結(jié)果，并督促其到自貢市定點治療機構(gòu)進(jìn)行治療，由鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院醫(yī)生定期對患者開展隨訪督導(dǎo)。同時密切關(guān)注無癥狀感染者，截至2021年10月，所有患者均已痊愈，無癥狀感染者無臨床癥狀。

2.5 菌株鑒定及MLVA分析 2016-2021年我市醫(yī)療機構(gòu)共分離到5株布魯氏菌，其中3株來源于2019年某羊肉湯館關(guān)聯(lián)布病暴發(fā)疫情。經(jīng)由四川省疾病預(yù)防控制中心對菌株進(jìn)行復(fù)核鑒定，所有菌株均為羊種布魯氏菌病3型。MLVA結(jié)果顯示所有菌株均為MLVA-8基因型，為42型，屬于東地中海型。其中2019年暴發(fā)疫情分離到3株布魯氏菌MLVA-16型別完全一致，與2018年報告病例(某屠宰場工人)血液中分離到菌株(編號BSC201911)僅存在bruce04位點存在重復(fù)數(shù)目差異，與北京及寧夏地區(qū)分離到菌株同源性為90.6%。見圖1。

圖1 自貢市布魯氏菌臨床分離株MLVA聚類分析Fig.3 Cluster analysis of clinical isolates of Brucella MLVA in Zigong City

3 討 論

四川屬于國家劃定的布病二類防控地區(qū)，畜間疫情監(jiān)測為主動發(fā)現(xiàn)染疫動物的主要手段。2016-2020年畜牧部門布病常態(tài)化防控監(jiān)測累計檢測羊只血清樣本25 930份，無陽性檢出。近年來發(fā)現(xiàn)的布病疫情大部分能追溯到外地輸入，本地?zé)o布病持續(xù)傳播[4-7]，人群和牲畜自然感染率和疫苗免疫率均極低，疫情輸入后容易引起暴發(fā)疫情。本研究4起暴發(fā)中的2起源于中轉(zhuǎn)站，另外2起發(fā)生在屠宰和餐館銷售環(huán)節(jié)，以養(yǎng)殖場/中轉(zhuǎn)站、集中屠宰點工作人員為中心，向散養(yǎng)戶、餐館加工人員及消費者蔓延，與我國北方布病傳統(tǒng)牧區(qū)以牧民、獸醫(yī)為主的散發(fā)模式存在較大差異[8-10]。本研究對布病病例先完成流行病學(xué)調(diào)查，聯(lián)合畜牧、食藥部門對其中有動物接觸史的病例進(jìn)行現(xiàn)場追蹤，不但發(fā)現(xiàn)了大量處于潛伏期感染者并開展了早期治療，還發(fā)現(xiàn)2處牲畜疫點，病例和病畜發(fā)現(xiàn)率遠(yuǎn)高于直接監(jiān)測水平[11-13]，提示這一模式在非牧區(qū)布病防控中可能存在推廣運用價值。

自貢市無成規(guī)模牧場，所消費羊肉主要來自外地活羊輸入。羊肉產(chǎn)業(yè)鏈模式主要為以家庭為單位的養(yǎng)殖戶購置外地山羊與本地羊混養(yǎng)，之后直接供應(yīng)集中屠宰點或當(dāng)?shù)匮蛉獠宛^。分子分型(MLVA)聚類分析結(jié)果顯示自貢菌株均為42型，與全國主要流行毒株型別一致[14-15]，2019年羊肉餐館暴發(fā)疫情分離菌株與2018年屠宰場工人分離的菌株均與北京、寧夏分離布魯氏菌菌株親緣關(guān)系較近，提示布魯氏菌病隨著畜牧業(yè)發(fā)展和畜產(chǎn)品的交易逐漸向非牧區(qū)擴散，優(yōu)質(zhì)羊種引種及肉制品交易同時可能會伴隨布病持續(xù)輸入的風(fēng)險，加之本地羊中轉(zhuǎn)站內(nèi)一直不斷有羊購入和售出，不同批次的羊混養(yǎng)，可能形成局部持續(xù)傳播。

對于非牧區(qū)，應(yīng)將牲畜中轉(zhuǎn)站和屠宰場作為檢疫和管理重點，定期對場所內(nèi)牲畜開展檢疫手續(xù)查驗和畜間布病篩查，及時發(fā)現(xiàn)并剔除病畜，嚴(yán)格牲畜分批次管理，對從業(yè)人員及其家屬開展定期布病篩查，降低從業(yè)人員在工作過程中因接觸染疫動物造成自身感染的風(fēng)險。醫(yī)療機構(gòu)發(fā)現(xiàn)布病病例后，應(yīng)對病例可能感染環(huán)境人員和牲畜開展篩查，早期發(fā)現(xiàn)隱性感染病例和清除畜間疫點。