李維康，李立賢，劉泓宇，譚北平，董曉慧，楊奇慧，遲淑艷，章 雙，謝瑞濤

低魚粉飼料添加丁酸梭菌對凡納濱對蝦生長、抗氧化能力和非特異性免疫的影響

李維康1,2,3，李立賢1,2,3，劉泓宇1,2,3，譚北平1,2,3，董曉慧1,2,3，楊奇慧1,2,3，遲淑艷1,2,3，章 雙1,2,3，謝瑞濤4

（1.廣東海洋大學水產(chǎn)學院 // 2.農(nóng)業(yè)部華南水產(chǎn)與畜禽飼料重點實驗室 // 3.廣東省水產(chǎn)動物精準營養(yǎng)與高效飼料工程技術(shù)研究中心 // 4.廣東恒興飼料實業(yè)股份有限公司，廣東 湛江 524088）

【目的】研究濃縮棉籽蛋白替代魚粉飼料中添加丁酸梭菌（）對凡納濱對蝦（）生長性能、血清生化、抗氧化能力、免疫力和腸道消化能力的影響。【方法】?。?.87 ± 0.06）g的健康凡納濱對蝦，隨機分為6組，分別投喂魚粉組（PC）、替代組（NC，濃縮棉籽蛋白替代30%魚粉蛋白）、替代組基礎(chǔ)上添加質(zhì)量分數(shù)0.03%（C1，3 × 108cfu/kg）、0.12%（C2，1.2 × 109cfu/kg）、0.48%（C3，4.8 × 109cfu/kg）和1.92%（C4，1.92 × 1010cfu/kg）丁酸梭菌的實驗飼料8周，測定對蝦生長性能、腸道消化酶活性、抗氧化能力及非特異性免疫指標?！窘Y(jié)果】PC組和C2組對蝦增重率（WGR）和特定生長率（SGR）顯著高于C4組（< 0.05），飼料系數(shù)（FCR）顯著低于C4組（< 0.05）。PC組血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（T-CHO）、低密度脂蛋白（LDL）和酸性磷酸酶（ACP）顯著高于NC組（< 0.05），谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）顯著低于NC組（0.05）。相比于PC組與NC組，各實驗組血清TG、T-CHO、LDL、高密度脂蛋白（HDL）含量均顯著降低（< 0.05），C2組堿性磷酸酶（AKP）顯著升高（< 0.05），C3組ACP顯著升高（< 0.05），C4組血清總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）、溶菌酶（LMZ）、淀粉酶（AMS）、胰蛋白酶（TRY）和脂肪酶（LIP）顯著升高（< 0.05），丙二醛（MDA）含量和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）顯著降低（< 0.05）?！窘Y(jié)論】在本研究條件下，當濃縮棉籽蛋白替代30%魚粉蛋白時，飼料中添加丁酸梭菌可顯著提高凡納濱對蝦抗氧化能力、腸道消化能力和非特異性免疫力。以WGR和SGR為判據(jù)，丁酸梭菌的最適添加量為1.2 × 109cfu/kg。

濃縮棉籽蛋白；丁酸梭菌；凡納濱對蝦；生長；非特異性免疫；抗氧化能力

凡納濱對蝦() 又名南美白對蝦，其生長速度快，抗逆性強，風味佳，在我國廣泛養(yǎng)殖，有極高的經(jīng)濟價值[1]。近年來，隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，飼料主要蛋白源魚粉價格逐年攀升，飼料成本加大。尋求新型蛋白源已成為亟待解決的問題。乙醇梭菌蛋白等菌體蛋白，黑水虻、黃粉蟲等昆蟲蛋白，濃縮棉籽蛋白等非糧植物蛋白成為研究熱點[2]。濃縮棉籽蛋白的蛋白質(zhì)含量與魚粉相近，遠高于豆粕、花生麩等植物蛋白[3]。但植物蛋白有含抗營養(yǎng)因子和氨基酸失衡等問題[4]，過量添加會導致水產(chǎn)動物生長性能下降、免疫力低下、腸道受損等[5-9]，因而在水產(chǎn)飼料中應(yīng)用比例較低。益生菌有提高動物生長性能、降低飼料系數(shù)、維持腸道健康、增強免疫力和抗病力等優(yōu)點[10-12]，已作為飼料添加劑廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖。目前，常用益生菌主要為芽孢桿菌類、乳酸菌類、酵母菌類等。丁酸梭菌（）又名酪酸菌，為革蘭陽性芽孢桿菌[13]，可生成丁酸、乙酸等短鏈脂肪酸，產(chǎn)生B族維生素等生物活性物質(zhì)，以及淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等消化酶[14-15]；還有耐熱、耐酸和耐膽汁的優(yōu)點[16]。投喂添加丁酸梭菌飼料的鯉（L.）免疫力顯著增強[17]。羅氏沼蝦（）飼料中添加丁酸梭菌，可顯著提高其生長性能和消化酶活性[18]。羅非魚（）在投喂添加丁酸梭菌的飼料后，增重率和特定生長率顯著升高，飼料系數(shù)顯著降低[19]；用噴涂丁酸梭菌發(fā)酵液的飼料飼喂珍珠龍膽石斑魚（♀×♂），其腸道消化酶活性和抗氧化能力顯著升高[20]。目前對丁酸梭菌的研究仍以魚粉飼料為主，在植物蛋白替代魚粉的飼料中研究較少，丁酸梭菌及其代謝產(chǎn)物能否修復因植物蛋白替代魚粉而造成的腸道損傷，提高此條件下水產(chǎn)動物的生長性能、抗氧化能力和免疫力未見報道。本研究分析在濃縮棉籽蛋白替代魚粉飼料中添加丁酸梭菌對凡納濱對蝦生長性能、血清生化、抗氧化能力、免疫力和腸道消化能力的影響，為丁酸梭菌在植物蛋白替代魚粉飼料中的應(yīng)用研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

養(yǎng)殖實驗在廣東恒興集團有限公司國家（863）項目海水養(yǎng)殖種子工程南方基地進行，實驗用蝦由基地苗場提供，實驗用水為經(jīng)過濾、沉淀后天然海水。

1.2 方法

1.2.1 飼料配制 以紅魚粉和濃縮棉籽蛋白為主要蛋白源，魚油和大豆卵磷脂為脂肪源配制成6組等氮等脂的飼料，分別為魚粉組（PC），替代組（棉籽蛋白替代30%魚粉蛋白，NC），替代組基礎(chǔ)上添加質(zhì)量分數(shù)0.03%、0.12%、0.48%和1.92%丁酸梭菌的飼料[分別記為C1（3×108cfu/kg）、C2（1.2×109cfu/kg）、C3（4.8×109cfu/kg）、C4（1.92×1010cfu/kg）組]。丁酸梭菌由碧沃豐生物科技（廣東）股份有限公司提供，含菌量為1×109cfu/g。

所有原料粉碎后過孔徑180 μm的篩，按飼料配方（表1）準確稱取混勻，丁酸梭菌采用逐級擴大法加入，用V型混合機（浙江正泰電器股份有限公司，JS-14S型）混勻，加入魚油和大豆卵磷脂再次混勻，在攪拌機中加入適量水攪拌，用雙螺桿擠條機（華南理工大學，F(xiàn)-75型）擠壓成型，在75℃烘箱熟化15 min，自然風干，于– 20 ℃冰箱保存，備用。

表1 實驗飼料組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）

注：1）預(yù)混料（多維多礦）由青島瑪斯特生物技術(shù)有限公司提供。

Note: 1）premix (the vitamin premix and the mineral premix) offered by Qingdao Master Biotech Co., Ltd.

1.2.2 實驗設(shè)計及養(yǎng)殖管理 取大小均勻、體質(zhì)健壯、體質(zhì)量 (0.87±0.06) g的凡納濱對蝦蝦苗隨機分配到18個0.3 m3的玻璃鋼桶，每桶蝦苗40尾。共6個處理組，每組3個重復組。每日7:00、11:00、17:00和21:00分別投喂對蝦體質(zhì)量的3%、2%、2%和3%的實驗飼料。養(yǎng)殖實驗為期8周。

養(yǎng)殖水溫為（28±2）℃，鹽度為28 ～ 30，溶氧量≥5 mg/L，pH 7.8 ～ 8.2。流水養(yǎng)殖，流速為0.5 m3/h。定時觀察對蝦攝食情況并及時調(diào)整投喂量，每日記錄飼料投喂量和對蝦死亡情況。

1.2.3 樣品采集和處理 養(yǎng)殖實驗結(jié)束后，停飼24 h，對蝦經(jīng)丁香酚麻醉后取樣。每桶蝦稱取質(zhì)量，計數(shù)，計算如下生長指標。

增重率WGR (%) = (終末體質(zhì)量－初始體質(zhì)量) /初始體質(zhì)量；

特定生長率SGR (%/d) = ( ln終末體質(zhì)量－ln初始體質(zhì)量) /實驗時間；

存活率SR (%) = 實驗結(jié)束時對蝦數(shù)量 /試驗開始時對蝦數(shù)量；

飼料系數(shù)FCR = 攝食干飼料總質(zhì)量/ (終末體質(zhì)量－初始體質(zhì)量) 。

每桶取蝦6尾，抽血，置于4 ℃冰箱12 h，離心，取上清，用于血清生化、抗氧化能力和免疫力測定；剖取腸道，置于液氮中，于– 80℃冰箱保存，用于消化酶活力測定。

1.2.4 飼料營養(yǎng)成分測定 水分按GB/T6435-2006測定，粗蛋白質(zhì)按GB/T6432-1994測定，粗脂肪按GB/T6433-2006測定，粗灰分按GB/T6438-2007測定。

1.2.5 對蝦腸道消化酶活力的測定 淀粉酶（AMS，ml036449）、胰蛋白酶（TRY，ml036384）和脂肪酶（LIP，ml036371）的測定均采用上海酶聯(lián)Elisa試劑盒測定。

1.2.6 血清生化指標的測定 血清總蛋白（TP，A045-4-2）、甘油三酯（TC，A110-1-1）、總膽固醇（T-CHO，A111-1-1）、高密度脂蛋白（HDL，A112-1-1）和低密度脂蛋白（LDL，A113-1-1）均采用南京建成試劑盒測定。

1.2.7 對蝦抗氧化能力測定 血清總抗氧化能力（T-AOC，ml541001）、丙二醛（MDA，ml069715）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX，ml099758）、超氧化物歧化酶（SOD，ml518614）的測定均采用上海酶聯(lián)Elisa試劑盒測定。

1.2.8 對蝦非特異性免疫指標的測定 血清溶菌酶（LMZ，ml036413）采用上海酶聯(lián)Elisa試劑盒測定，血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT，C010-2-1）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT，C009-2-1）、堿性磷酸酶（AKP，A059-2-2）和酸性磷酸酶（ACP，A060-2-2）采用南京建成試劑盒測定。

1.3 數(shù)據(jù)分析

存活率先進行反正弦轉(zhuǎn)換，再進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)均采用平均值±標準差表示，采用SPSS21.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行單因素方差分析。如數(shù)據(jù)存在顯著差異，則進行Turkey’s多重比較，< 0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 丁酸梭菌對凡納濱對蝦生長性能的影響

由表2可知，各組之間存活率（SR）無顯著差異（> 0.05）。NC組增重率（WGR）、特定生長率（SGR）和飼料系數(shù)（FCR）與PC組無顯著差異（> 0.05）。隨著丁酸梭菌添加水平的提高，對蝦WGR和SGR總體上呈先升后降的趨勢，C2組WGR和SGR顯著高于C4組（< 0.05），F(xiàn)CR顯著低于C4組（<0.05）。

表2 飼料中添加丁酸梭菌對凡納濱對蝦生長性能的影響

說明：同列數(shù)據(jù)肩標相同字母或無字母表示差不顯著(＞0.05)。

Notes: In the same column, values with the same or no letter superscripts mean no significant difference (＞0.05).

2.2 丁酸梭菌對凡納濱對蝦腸道消化酶的影響

由表3可知，PC組淀粉酶（AMS）、胰蛋白酶（TRY）、脂肪酶（LIP）活性與NC組無顯著差異（> 0.05）。隨著丁酸梭菌添加水平的提高，對蝦腸道AMS、LIP、TRY活性呈上升趨勢，C4 組AMS平均值最高，顯著高于PC、NC組（< 0.05），C4組LIP、TRY顯著高于其他組（< 0.05）。

2.3 丁酸梭菌對凡納濱對蝦血清生化指標的影響

由表4可知，各組血清總蛋白（TP）含量無顯著差異（> 0.05）。PC組血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（T-CHO）和低密度脂蛋白（LDL）含量顯著高于NC組（< 0.05），高密度脂蛋白（HDL）含量與NC組無顯著差異（> 0.05）。添加丁酸梭菌實驗組對蝦血清TG、T-CHO、HDL、LDL含量均顯著低于PC組與NC組（< 0.05）。

表3 飼料丁酸梭菌對凡納濱對蝦腸道消化酶的影響

說明：同列數(shù)據(jù)肩標相同字母或無字母表示差不顯著(＞0.05)。

Notes: In the same column, the data with the same or no letter superscripts mean no significant difference (＞0.05).

表4 飼料中添加丁酸梭菌對凡納濱對蝦血清生化指標的影響

說明：同列數(shù)據(jù)肩標相同字母或無字母表示差不顯著(＞0.05)。

Notes: In the same column, values with the same or no letter superscripts mean no significant difference (＞0.05).

2.4 丁酸梭菌對凡納濱對蝦血清抗氧化能力的影響

表5可見，PC組血清總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）均與NC組無顯著差異（> 0.05）。總體上，隨著丁酸梭菌添加水平的提高，對蝦血清T-AOC、SOD和GPX活性呈上升趨勢（< 0.05），MDA含量呈下降趨勢（< 0.05）。

2.5 丁酸梭菌對凡納濱對蝦血清非特異性免疫指標的影響

由表6可知，PC組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）顯著低于NC組（< 0.05），酸性磷酸酶（ACP）顯著高于NC組（< 0.05）。總體上，隨著丁酸梭菌添加水平的提高，溶菌酶（LMZ）呈升高趨勢（< 0.05）；C4組GPT顯著高于其他各組（< 0.05）；C4組谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）平均值最低，顯著低于C1、C2組（< 0.05）；堿性磷酸酶（AKP）呈先升后降趨勢，C2組顯著高于其他各組（< 0.05）；C3組酸性磷酸酶（ACP）平均值最高，顯著高于NC、PC組（< 0.05）。

表5 飼料中添加丁酸梭菌對凡納濱對蝦血清抗氧化能力的影響

Table.5 Effects of dietary Clostridium butyricum on serum antioxidant capacity of Litopenaeus vannamei

說明：同列數(shù)據(jù)肩標相同字母或無字母表示差不顯著(＞0.05)。

Notes: In the same column, values with the same or no letter superscripts mean no significant difference (＞0.05).

表6 飼料中添加丁酸梭菌對凡納濱對蝦血清非特異性免疫指標的影響

說明：同列數(shù)據(jù)肩標凡含一個相同字母或無字母表示差不顯著(＞0.05)。

Notes: In the same column, values with a same letter or no letter superscripts mean no significant difference (＞0.05).

3 討論

用濃縮棉籽蛋白高比例替代魚粉的飼料投喂卵形鯧鲹（），其生長性能與魚粉組無顯著差異[21]。本研究中，NC組生長性能與PC組無顯著差異。這是由于經(jīng)過脫酚處理的濃縮棉籽蛋白中游離棉酚等抗營養(yǎng)因子含量較低[22]，對凡納濱對蝦腸道造成的損傷較小，未顯著降低對蝦的消化吸收能力。用添加不同梯度丁酸梭菌的飼料投喂凡納濱對蝦，隨著丁酸梭菌添加比例的升高，對蝦生長性能呈上升趨勢[23]。本研究中，隨著丁酸梭菌添加水平的提高，對蝦增重率和特定生長率呈上升趨勢。原因是丁酸梭菌能維持腸道微生態(tài)平衡，促進腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，此外丁酸梭菌分泌的丁酸有修復腸道損傷的作用[17,19,24]。當添加質(zhì)量分數(shù)0.12%的丁酸梭菌（C2組）時，對蝦增重率、特定生長率平均值最高，與PC組無顯著差異。這與李軍亮等以添加益生菌的低魚粉飼料投喂珍珠龍膽石斑魚生長性能無顯著變化的結(jié)果一致[25]。隨著丁酸梭菌添加水平的進一步提高，對蝦增重率和特定生長率呈下降趨勢。當丁酸梭菌添加量（質(zhì)量分數(shù)）為1.92%（C4組）時，對蝦增重率和特定生長率顯著低于C2組，飼料系數(shù)顯著高于C2組。使用添加益生菌的飼料投喂黑鯛（）、羅非魚，最高添加量組生長性能顯著低于中間添加量組[26-27]，這與本研究結(jié)果相似。過量添加單一益生菌，并不會取得積極效果，反而抑制其他益生菌在腸道的生長繁殖，破壞腸道微生態(tài)平衡，降低腸道消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)的能力[28]。

益生菌通過修復腸道損傷，維持腸道微生態(tài)平衡，刺激腸道分泌消化酶等作用提高水產(chǎn)動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[29-30]。研究表明，以添加芽孢桿菌的飼料投喂鯉魚、以添加乳酸菌的飼料投喂金頭鯛（），均可顯著提高水產(chǎn)動物腸道淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶等消化酶活性[31-32]。本研究中，NC組凡納濱對蝦腸道消化酶活力與PC組無顯著差異，但隨著丁酸梭菌添加水平的提高，淀粉酶、胰蛋白酶與脂肪酶呈上升趨勢。這表明丁酸梭菌同芽孢桿菌、乳酸菌等益生菌一樣，具有提高水產(chǎn)動物腸道消化酶活力的作用。當添加質(zhì)量分數(shù)0.12%的丁酸梭菌（C2組）時，對蝦腸道淀粉酶和胰蛋白酶活力顯著高于PC、NC組，脂肪酶活力與PC、NC組均無顯著差異。此丁酸梭菌添加量下，C2組對蝦的生長性能優(yōu)于NC組和其他實驗組，與PC組最為接近。這是由于丁酸梭菌在宿主腸道中定植，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，改善腸道環(huán)境及生理功能；同時，丁酸梭菌及腸道內(nèi)其他有益菌分泌多種消化酶，直接進入宿主腸道，提高腸道消化酶活力[16,33]。當添加質(zhì)量分數(shù)1.92%丁酸梭菌（C4組）時，對蝦腸道蛋白酶、胰蛋白酶和脂肪酶活力均顯著高于PC、NC組。但C4組對蝦生長性能卻顯著低于PC、C2組。這是由于過量添加丁酸梭菌等益生菌會在刺激腸道產(chǎn)生大量的消化酶類，過量的消化酶反而會抑制腸道對營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收。這在賴凱昭等以添加益生菌的飼料投喂奧尼羅非魚（）的研究中也得到證實[34]。

使用植物蛋白替代魚粉的飼料投喂水產(chǎn)動物，植物蛋白中的蛋白酶抑制劑、植酸、棉酚等抗營養(yǎng)因子經(jīng)過腸道的消化吸收進入動物體內(nèi)各個組織，導致機體發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，從而引起動物血清生化、抗氧化能力和免疫力的改變。甘油三酯和總膽固醇反映機體對脂質(zhì)的代謝能力，兩者在血清中含量減少，說明機體代謝能力增強[35]。高密度脂蛋白將膽固醇由組織向肝臟轉(zhuǎn)運并代謝排出，低密度脂蛋白與之相反[36]。本研究中，NC組甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白顯著低于PC組，與嚴全根等用棉粕替代魚粉的飼料投喂草魚（）的結(jié)果相似[22]。這是因為植物蛋白替代比例的上升，導致水產(chǎn)動物腸道積累一定的抗營養(yǎng)因子，抑制腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[37-38]，從而減少甘油三酯和膽固醇的攝入。添加丁酸梭菌實驗組的甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白均顯著低于PC、NC組。這是因為丁酸梭菌提高了對蝦腸道的消化酶活力，加速脂類物質(zhì)在腸道中消化吸收，提高對蝦對脂質(zhì)的代謝能力。

總抗氧化能力反映機體抑制脂質(zhì)過氧化物形成的能力；超氧化物歧化酶可清除體內(nèi)自由基，保護機體免受損傷[39]；丙二醛為脂質(zhì)過氧化物分解產(chǎn)物，反映細胞受損程度和脂質(zhì)過氧化程度[40]；谷胱甘肽過氧化物酶可清除體內(nèi)過氧化氫和脂質(zhì)過氧化物。本研究中，NC組抗氧化能力與PC組無顯著差異。研究表明，用濃縮棉籽蛋白高比例替代魚粉的飼料投喂卵形鯧鯵，其抗氧化能力也無顯著變化[21,41]；用高蛋白棉粕替代魚粉的飼料投喂凡納濱對蝦，對蝦抗氧化能力變化不顯著[42]。這表明高比例添加濃縮棉籽蛋白不會對凡納濱對蝦抗氧化能力產(chǎn)生不利影響。這與濃縮棉籽蛋白中游離棉酚等抗營養(yǎng)因子含量較低，未嚴重損害對蝦腸道，且濃縮棉籽蛋白中含有少量棉子糖對腸道有保護作用有關(guān)[43-44]。隨著丁酸梭菌添加水平的提高，總抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶呈上升趨勢，丙二醛呈下降趨勢，當添加1.92%丁酸梭菌（C4組）時，對蝦抗氧化能力顯著高于PC組和NC組。用添加益生菌的飼料投喂日本囊對蝦（）、草魚和銀鯧（），對蝦抗氧化能力較不加菌組顯著升高[24,45-46]。這是由于丁酸梭菌等益生菌產(chǎn)生丁酸、丙酸等短鏈脂肪酸，并在機體內(nèi)進一步反應(yīng)生成氫氣，氫氣中的氫原子結(jié)合自由基，保護細胞免受自由基破壞，提高機體各組織抗氧化酶的活性，從而提高水產(chǎn)動物抗氧化能力[15]。另一方面，丁酸梭菌能產(chǎn)生SOD和還原型輔酶Ⅰ/還原型輔酶Ⅱ( NADH/NADPH) 過氧化物酶，可直接清除體內(nèi)活性氧[47-48]。

動物機體血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶含量通常較低，當組織病變或受嚴重損傷時，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度上升[49-50]。溶菌酶可殺滅革蘭陽性菌，主要存在于動物血清和淋巴組織，是動物非特異性免疫的重要組成部分[51]。堿性磷酸酶和酸性磷酸酶是溶酶體的重要組成部分，廣泛分布在動物機體各組織、細胞和體液中。本研究中，NC組溶菌酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶與PC組無顯著差異，谷丙轉(zhuǎn)氨酶顯著高于PC組，酸性磷酸酶顯著低于PC組，表明濃縮棉籽蛋白替代魚粉，可能會造成對蝦免疫力下降。這與使用植物蛋白替代魚粉的飼料投喂齊口裂腹魚（）、青魚（），其免疫力顯著降低的結(jié)果一致[52-53]。隨著丁酸梭菌添加水平的提高，溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶含量上升，谷草轉(zhuǎn)氨酶含量下降，表明在濃縮棉籽蛋白替代魚粉的飼料中添加丁酸梭菌可以提高凡納濱對蝦的非特異性免疫力。使用添加丁酸梭菌的飼料投喂羅氏沼蝦、珍珠龍膽石斑魚，其免疫力顯著提高[18,20]。其原因可能是丁酸梭菌或其產(chǎn)物激活機體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生多種免疫因子[54-55]，同時刺激溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶等活性提高，從而增強對蝦免疫功能，保護機體各組織免受損傷，維持機體健康。

4 結(jié)論

在本研究條件下，當濃縮棉籽蛋白替代30%魚粉蛋白時，飼料中添加丁酸梭菌可顯著提高凡納濱對蝦抗氧化能力、腸道消化能力和非特異性免疫力，改善對蝦生長性能。以WGR和SGR為判據(jù)，丁酸梭菌的最適添加量為1.2×109cfu/kg。

[1] 謝仁政, 劉建勇, 范才軍, 等.高位池養(yǎng)殖凡納濱對蝦生長的研究[J].廣東海洋大學學報, 2007, 27(6): 50-54.

[2] 陳明, 田麗霞, 劉永堅.水產(chǎn)飼料新型蛋白源的研究進展[J].廣東飼料, 2015, 24(2): 35-38.

[3] 薛敏.棉籽濃縮蛋白加工工藝及其在水產(chǎn)飼料中營養(yǎng)價值[J].飼料工業(yè), 2021, 42(12): 1-5.

[4] 殷彬.植物蛋白源替代魚粉對珍珠龍膽生長性能、腸道菌群和免疫的影響[D].湛江: 廣東海洋大學, 2019.

[5] 谷珉.影響海水魚蝦對植物蛋白利用的抗營養(yǎng)因子和蛋氨酸的研究[D].青島: 中國海洋大學, 2013.

[6] ABBASI A, OUJIFARD A, TORFI MOZANZADEH M, et al.Dietary simultaneous replacement of fish meal and fish oil with blends of plant proteins and vegetable oils in yellowfin seabream () fry: Growth, digestive enzymes, antioxidant status and skin mucosal immunity[J].Aquaculture Nutrition, 2020, 26(4): 1131-1142.

[7] RAY G W.三種植物蛋白源分別替代魚粉對凡納濱對蝦幼蝦生長、血清生化指數(shù)和抗氧化功能的影響[D].湛江: 廣東海洋大學, 2020.

[8] 王銨靜, 楊奇慧, 譚北平, 等.大豆酶解蛋白對凡納濱對蝦幼蝦生長性能、血清生化指標、非特異性免疫力和抗病力的影響[J].廣東海洋大學學報, 2018, 38(1): 14-21.

[9] 冷向軍.低魚粉水產(chǎn)飼料的研究與應(yīng)用[J].飼料工業(yè), 2020, 41(22): 1-8.

[10] 林艾影, 王維政, 陳剛, 等.2種乳酸菌對軍曹魚幼魚生長及消化酶、免疫酶活性的影響[J].廣東海洋大學學報, 2020, 40(5): 112-117.

[11] 湯菊芬, 黃瑜, 蔡佳, 等.中草藥復合益生菌制劑對凡納濱對蝦生長、抗病力及水質(zhì)的影響[J].廣東海洋大學學報, 2015, 35(6): 47-52.

[12] SHA Y J, WANG L, LIU M, et al.Effects of lactic acid bacteria and the corresponding supernatant on the survival, growth performance, immune response and disease resistance of[J].Aquaculture, 2016, 452: 28-36.

[13] TRAN N T, LI Z Z, MA H Y, et al.: a promising probiotic confers positive health benefits in aquatic animals[J].Reviews in Aquaculture, 2020, 12(4): 2573-2589.

[14] 徐亞飛, 曾新福, 樂敏, 等.丁酸梭菌的生物學功能及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用研究進展[J].漁業(yè)研究, 2018, 40(5): 408-412.

[15] 梁靜, 聶存喜, 張文舉, 等.丁酸梭菌的生物學功能及其在動物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].動物營養(yǎng)學報, 2018, 30(5): 1639-1646.

[16] 艾春香.丁酸梭菌的研發(fā)及其在水產(chǎn)配合飼料中的應(yīng)用[J].飼料工業(yè), 2018, 39(24): 1-7.

[17] MENG X L, WU S K, HU W P, et al.improves immune responses and remodels the intestinal microbiota of common carp (L.)[J].Aquaculture, 2021, 530: 735753.

[18] SUMON M S, AHMMED F, KHUSHI S S, et al.Growth performance, digestive enzyme activity and immune response offed with probioticincorporated diets[J].Journal of King Saud University - Science, 2018, 30(1): 21-28.

[19] POOLSAWAT L, LI X Q, HE M, et al.as probiotic for promoting growth performance, feed utilization, gut health and microbiota community of tilapia (×)[J].Aquaculture Nutrition, 2020, 26(3): 657-670.

[20] 何瑞鵬, 奉杰, 田相利, 等.酪酸菌對珍珠龍膽石斑魚生長、消化酶、血清抗氧化酶和溶菌酶活性的影響[J].中國海洋大學學報(自然科學版), 2017, 47(11): 15-23.

[21] SHEN J F, LIU H Y, TAN B P, et al.Effects of replacement of fishmeal with cottonseed protein concentrate on the growth, intestinal microflora, haematological and antioxidant indices of juvenile golden pompano ()[J].Aquaculture Nutrition, 2020, 26(4): 1119-1130.

[22] 嚴全根, 朱曉鳴, 楊云霞, 等.飼料中棉粕替代魚粉蛋白對草魚的生長、血液生理指標和魚體組成的影響[J].水生生物學報, 2014, 38(2): 362-369.

[23] DUAN Y F, ZHANG Y, DONG H B, et al.Effect of dietaryon growth, intestine health status and resistance to ammonia stress in Pacific white shrimp[J].Fish & Shellfish Immunology, 2017, 65: 25-33.

[24] DUAN Y F, ZHANG Y, DONG H B, et al.Effect of the dietary probioticon growth, intestine antioxidant capacity and resistance to high temperature stress in kuruma shrimp[J].Journal of Thermal Biology, 2017, 66: 93-100.

[25] 李軍亮, 楊奇慧, 譚北平, 等.低魚粉飼料添加枯草芽孢桿菌對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長、消化酶活性、抗氧化酶活性及其mRNA表達的影響[J].水產(chǎn)學報, 2019, 43(4): 1126-1137.

[26] 李盈鋒, 齊鑫, 華穎, 等.枯草芽孢桿菌對黑鯛幼魚生長、消化酶活性及抗氧化功能的影響[J].揚州大學學報(農(nóng)業(yè)與生命科學版), 2014, 35(1): 37-42.

[27] LI H Q, ZHOU Y, LING H Y, et al.The effect of dietary supplementation withon the growth performance, immunity, intestinal microbiota and disease resistance of tilapia ()[J].PLoS One, 2019, 14(12): e0223428.

[28] 孫盛明, 蘇艷莉, 張武肖, 等.飼料中添加枯草芽孢桿菌對團頭魴幼魚生長性能、肝臟抗氧化指標、腸道菌群結(jié)構(gòu)和抗病力的影響[J].動物營養(yǎng)學報, 2016, 28(2): 507-514.

[29] 田啟文, 郭振, 嵇樂樂, 等.水產(chǎn)養(yǎng)殖中益生菌研究進展[J].工業(yè)微生物, 2019, 49(4): 50-55.

[30] 王倩, 朱琪, 晏凱, 等.丁酸梭菌與動物腸道互作機理的研究進展[J].中國飼料, 2018(21): 31-35.

[31] WANG Y B, XU Z R.Effect of probiotics for common carp () based on growth performance and digestive enzyme activities[J].Animal Feed Science and Technology, 2006, 127(3/4): 283-292.

[32] SUZER C, OBAN D, KAMACI H O, et al.spp.bacteria as probiotics in gilthead sea bream (, L.) larvae: Effects on growth performance and digestive enzyme activities [J].Aquaculture, 2008, 280(1/2/3/4): 140-145.

[33] 宋增福.丁酸梭菌C2菌株對鮸魚腸道微生態(tài)調(diào)控作用與機理研究[D].杭州: 浙江大學, 2006.

[34] 賴凱昭, 呂逸歡, 梁明振, 等.餌料中添加益生菌對奧尼羅非魚生長性能和腸道蛋白酶活性的影響[J].南方農(nóng)業(yè)學報, 2012, 43(11): 1769-1774.

[35] 邱燕.三種微生態(tài)制劑對草魚()生長性能、生理機能及腸道黏膜的影響[D].蘇州: 蘇州大學, 2010.

[36] 王成強, 王際英, 黃炳山, 等.飼料花生四烯酸水平對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長性能、抗氧化能力、血清生化指標以及肝臟和肌肉脂肪酸組成的影響[J].動物營養(yǎng)學報, 2018, 30(9): 3567-3580.

[37] JAIN A K, KUMAR S, PANWAR J.Antinutritional factors and their detoxification in pulses-a review [J].agricultural reviews, 2009, 30(1): 64-70.

[38] LI Y X, YANG P, ZHANG Y J, et al.Effects of dietary glycinin on the growth performance, digestion, intestinal morphology and bacterial community of juvenile turbot,L[J].Aquaculture, 2017, 479: 125-133.

[39] 蔣錦坤.殼聚糖對虹鱒()和星斑川鰈()幼魚生長及非特異性免疫的影響[D].上海: 上海海洋大學, 2012.

[40] LIVINGSTONE D R.Oxidative stress in aquatic organisms in relation to pollution and aquaculture [J].Revue de Médecine Vétérinaire, 2003, 154(6): 427-430.

[41] 申建飛, 陳銘燦, 劉泓宇, 等.濃縮棉籽蛋白替代魚粉對卵形鯧鲹幼魚生長性能、血清生化指標、肝臟抗氧化指標及胃腸道蛋白酶活性的影響[J].動物營養(yǎng)學報, 2019, 31(2): 746-756.

[42] 張海濤, 蒲雪松, 楊奇慧, 等.高蛋白棉粕替代魚粉對凡納濱對蝦生長性能、非特異性免疫指標及抗病力的影響[J].廣東海洋大學學報, 2018, 38(4): 20-26.

[43] 葛紅云, 王蘭梅, 鄭銀樺, 等.棉子糖對花鱸生長、免疫抗應(yīng)激及抵御嗜水氣單胞菌攻毒的影響[J].水生生物學報, 2011, 35(2): 283-290.

[44] LIN S M, PAN Y, LUO L, et al.Effects of dietary β-1,3-glucan, chitosan or raffinose on the growth, innate immunity and resistance of koi (koi) [J].Fish & shellfish immunology, 2011, 31(6): 788-794.

[45] LI W F, ZHANG X P, SONG W H, et al.Effects ofpreparations on immunity and antioxidant activities in grass carp (idellus)[J].Fish Physiology and Biochemistry, 2012, 38(6): 1585-1592.

[46] GAO Q X, XIAO C F, MIN M H, et al.Effects of probiotics dietary supplementation on growth performance, innate immunity and digestive enzymes of silver pomfret,[J].Indian Journal of Animal Research, 2016, 50(6): 936-941.DOI:10.18805/ijar.9640

[47] KAWASAKI S, NAKAGAWA T, NISHIYAMA Y, et al.Effect of oxygen on the growth of(type species of the genus), and the distribution of enzymes for oxygen and for active oxygen species in Clostridia[J].Journal of Fermentation and Bioengineering, 1998, 86(4): 368-372.

[48] 賈聰慧, 楊彩梅, 曾新福, 等.丁酸梭菌對肉雞生長性能、抗氧化能力、免疫功能和血清生化指標的影響[J].動物營養(yǎng)學報, 2016, 28(3): 908-915.

[49] 孟兆娜, 陳玉春, 管雪婷, 等.復方中草藥對鏡鯉(L.)血清轉(zhuǎn)氨酶及紅細胞抗氧化酶活性的影響[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報, 2010, 41(8): 75-80.

[50] WU C L, YE J Y, GAO J E, et al.The effects of dietary carbohydrate on the growth, antioxidant capacities, innate immune responses and pathogen resistance of juvenile Black carp[J].Fish & Shellfish Immunology, 2016, 49: 132-142.

[51] ACKERMAN P A, IWAMA G K, THORNTON J C.Physiological and immunological effects of adjuvantedvaccines on juvenile rainbow trout[J].Journal of Aquatic Animal Health, 2000, 12(2): 157-164.

[52] 向梟, 周興華, 陳建, 等.飼料中豆粕蛋白替代魚粉蛋白對齊口裂腹魚幼魚生長性能、體成分及血液生化指標的影響[J].水產(chǎn)學報, 2012, 36(5): 723-731.

[53] 田芊芊, 胡毅, 毛盼, 等.低魚粉飼料中添加?；撬釋η圄~幼魚生長、腸道修復及抗急性擁擠脅迫的影響[J].水產(chǎn)學報, 2016, 40(9): 1330-1339.

[54] 王柳懿, 李?；? 李玉鵬, 等.丁酸梭菌對仔豬回腸免疫信號通路相關(guān)蛋白和血清細胞因子的影響[J].中國畜牧雜志, 2017, 53(8): 84-88.

[55] GAO Q X, QI L L, WU T X, et al.activates TLR2-mediated MyD88-independent signaling pathway in HT-29 cells[J].Molecular and Cellular Biochemistry, 2012, 361(1/2): 31-37.

Effects ofon Growth, Antioxidant Capacity and Non-specific Immunology ofFed with Concentrated Cottonseed Protein Replacement of Fishmeal

LI Wei-kang1,2,3, LI Li-xian1,2,3, LIU Hong-yu1,2,3, TAN Bei-ping1,2,3, DONG Xiao-hui1,2,3,YANG Qi-hui1,2,3, CHI Shu-yan1,2,3, ZHANG Shuang1,2,3, XIE Rui-tao4

（1.,// 2.,,// 3.// 4.524088,）

【Objective】and its metabolites, including butyric acid, have been shown to repair intestinal damage, maintain intestinal micro-ecological balance and improve immunity.This experiment was conducted to investigate the effects ofon growth performance, serum biochemical indexes, antioxidant capacity, immunity and intestinal digestive enzymes offed with concentrated cottonseed protein replacement fishmeal.【Method】Healthy[(0.87 ± 0.06) g] were randomly divided into 6 groups.They were fed with either fish meal (PC), alternativebasic feed with concentrated cottonseed protein replaced 30% fish meal protein (NC) ,supplemented with 0.03% (C1, 3×108cfu/kg), 0.12% (C2, 1.2×109cfu/kg), 0.48% (C3, 4.8×109cfu/kg), and 1.92% (C4, 1.92×1010cfu/kg) of alternative group basic feed, respectively.The experiment lasted for 8 weeks.【Result】The shrimp weight gain rate (WGR) and specific growth rate (SGR) were significantly higher in the PC and C2 groups than those in the C4 group (< 0.05), and the feed conversion ratio (FCR) was significantly lower compared to the C4 group (< 0.05).Serum triglyceride (TG), total cholesterol (T-CHO), low density lipoprotein (LDL) and acid phosphatase (ACP) were significantly higher in the PC group than in the NC group (< 0.05); alanine aminotransferase (GPT) were significantly lower than in the NC group (< 0.05).Compared with the PC and NC groups, serum TG, T-CHO, LDL and high density lipoprotein (HDL) were significantly lower in all experimental groups (< 0.05); alkaline phosphatase (AKP) were significantly higher in C2 group (< 0.05); ACP were significantly higher in C3 group (< 0.05); serum total antioxidant capacity (T-AOC ), superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPX), lysozyme (LMZ), amylase (AMS), trypsin (TRY) and lipase (LIP) were significantly higher and malondialdehyde (MDA) and aspartate aminotransferase (GOT) were significantly lower in C4 group (0.05).【Conclusion】Diet supplementationwithsignificantly improved the antioxidant capacity, intestinal digestibility and non-specific immunity ofwhen cottonseed protein concentrate replaced 30% fishmeal protein.The most optimal supplementation level forwas 1.2 × 109cfu/kg, using WGR and SGR as assessment criteria.

concentrated cottonseed protein;;;growth performance; non-specific immunity; antioxidant capacity

S963.73+9

A

1673-9159（2022）02-0029-09

10.3969/j.issn.1673-9159.2022.02.004

2021-08-24

國家重點研發(fā)計劃（2019YFD0900200）；國家自然科學基金（31772864）；廣東省自然科學基金（2018A030313154，2020A1515011129）；科技廳企業(yè)特派員項目（GDKTP2020017800）

李維康（1995―），男，碩士研究生，從事水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料研究。E-mail: 1720346549@qq.com

劉泓宇，副教授，從事水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料研究。E-mail: liuhyu@gdou.edu.cn

李維康，李立賢，劉泓宇，等.低魚粉飼料添加丁酸梭菌對凡納濱對蝦生長、抗氧化能力和非特異性免疫的影響[J].廣東海洋大學學報，2022，42（2）：29-37.

（責任編輯：劉慶穎）