蘇雅靜 羅安平 葉琳 李煒 王立娟

分泌性中耳炎為非化膿炎癥類疾病，其主要特征包括中耳腔積液、耳悶及聽力下降，多數(shù)患者早期未給予足夠重視，導(dǎo)致病情易反復(fù)、遷延不愈，增加耳聾風(fēng)險，給患者生活造成極大困擾，嚴重影響患者身心健康。目前該病病因尚不完全清楚。分泌性中耳炎在病情發(fā)展過程中涉及炎癥因子及免疫調(diào)節(jié)因子水平變化[1，2]。高遷移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)為一種重要的炎癥介質(zhì)，可促進血小板活化及神經(jīng)軸突生長，調(diào)節(jié)機體固有免疫功能，在機體受到刺激時，炎癥細胞的壞死細胞將HMGB1從核內(nèi)分泌到胞外，發(fā)揮促炎因子的作用。HMGB1在急性肺損傷、急性胰腺炎、盆腔炎等多種炎性疾病中發(fā)揮重要作用[3，4]。白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）是由巨噬細胞、T細胞、成纖維細胞等產(chǎn)生的炎癥因子，具有強烈的致炎活性，在免疫、炎癥中發(fā)揮重要作用[5]。IL-6在急性分泌性中耳炎患者耳積液中表達水平升高，且顯著高于外周血IL-6水平[6]。分泌性中耳炎是一種炎性反應(yīng)疾病，本研究推測HMGB1與IL-6可能與分泌性中耳炎炎癥的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，因此通過檢測分泌性中耳炎患者HMGB1與IL-6表達情況，探討二者與分泌性中耳炎的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年6月～2020年12月本院治療的分泌性中耳炎患者83例，其中男41例，女42例，年齡20～70歲，平均年齡56.70±6.50歲。依據(jù)患者病情分期[7]分為急性組(急性中耳炎，病程＜3周)28例、亞急性組(亞急性中耳炎，病程3周～3個月)30例和慢性組(慢性中耳炎，病程3～6個月)25例；根據(jù)耳積液性質(zhì)分為漿液性組50例，黏液性組33例。納入標準：（1）符合分泌性中耳炎診斷標準[8]；（2）單耳發(fā)病者且穿刺檢測抽出耳積液；（3）患者知情同意并簽署知情同意書。排除標準：（1）合并免疫性疾病或者急慢性感染者；（2）合并嚴重心、肝、腎疾病或其他疾病者；（3）鼓膜穿刺不能抽出積液者。

另選取同期健康體檢人員（無任何耳鼻喉疾病史）85例作為對照組（只采取外周血），其中男45例，女40例，年齡21～72歲，平均年齡55.90±5.60歲。各組性別、年齡一般資料無顯著差異（P＞0.05）。本研究樣本采集均經(jīng)過本院倫理委員會批準，患者簽署知情同意書。

1.2 試劑與儀器

人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、人白細胞介素6（IL-6）試劑盒購自美國Elabscience公司，Bio-rad酶標儀購自美國伯樂公司。

1.3 研究方法

1.3.1 樣品采集及保存 治療前收集中耳炎患者耳積液，在耳內(nèi)鏡監(jiān)視系統(tǒng)下，鼓膜表面麻醉，無菌條件下經(jīng)鼓膜穿刺抽取0.5 ml中耳積液，穿刺過程中避免污染耳積液，置于-80 ℃保存?zhèn)溆?。抽取患者晨起空腹外周靜脈血，健康體檢人員于體檢當天清晨空腹抽取外周靜脈血4 ml，室溫下靜置30 min后，3000 r/min離心10 min，留取血清，置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 HMGB1、IL-6檢測 采用ELISA方法檢測血清及耳積液HMGB1、IL-6水平，按照相應(yīng)檢測試劑盒說明書進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組血清及耳積液中HMGB1、IL-6水平比較

對照組與觀察組血清HMGB1、IL-6水平無顯著差異（P＞0.05）；與觀察組血清比較，分泌性中耳炎患者耳積液HMGB1、IL-6水平顯著升高（P<0.05），見表1。

表1 觀察組與對照組血清及耳積液中HMGB1、IL-6 水平比較

2.2 觀察組各亞組患者耳積液中HMGB1、IL-6水平比較

3組間HMGB1、IL-6水平比較均有顯著差異（P<0.05），與急性組相比，亞急性組、慢性組中耳炎患者耳積液HMGB1、IL-6表達水平顯著升高（P<0.05），與亞急性組比較，慢性組中耳炎患者耳積液HMGB1、IL-6表達水平均顯著升高（P<0.05），見表2。

表2 觀察組各亞組患者耳積液中HMGB1、IL-6 水平比較

2.3 不同性質(zhì)耳積液中 HMGB1、IL-6表達水平比較

與漿液性組比較，黏液性組患者耳積液HMGB1、IL-6表達水平顯著升高（P<0.05），見表3。

表3 不同性質(zhì)耳積液中HMGB1、IL-6 表達水平比較

2.4 分泌性中耳炎患者耳積液HMGB1、IL-6表達水平與病程相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示，分泌性中耳炎患者耳積液HMGB1、IL-6表達水平與患者病程呈正相關(guān)（r=0.667，r=0.546，P＜0.05），見圖1。

圖1 HMGB1、IL-6表達水平與病程相關(guān)性

3 討論

分泌性中耳炎是耳鼻喉科臨床的常見病，以聽力減退、耳鳴、耳痛，伴耳堵塞、悶脹感及鼓室積液等主要特征，該病患者分布于各個年齡段，若治療不及時，會產(chǎn)生中耳黏連、鼓膜萎縮等嚴重并發(fā)癥，最終造成聽力受損，因此對于分泌性中耳炎患者病情及早判斷、治療和預(yù)后具有重要臨床意義[9，10]。

分泌性中耳炎是一種炎癥性疾病，其病情嚴重程度與炎癥因子水平變化有關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)分泌性中耳炎患者耳積液HMGB1、IL-6水平顯著升高，本研究國內(nèi)外對于中耳炎中HMGB1、IL-6的表達及釋放及其在該病中起的作用研究較少，因此，本研究把這兩個炎癥因子作為評價指標。

HMGB1在真核細胞內(nèi)廣泛存在，胞外的HMGBl作為一種重要的炎癥介質(zhì)和致炎細胞因子，與關(guān)節(jié)炎、急性肺炎、膿毒癥、肝炎、自身免疫性疾病等的發(fā)病機理關(guān)系密切，在耳部疾病中主要表達在不同發(fā)育階段的耳蝸中，表達分布于血管紋、螺旋韌帶、螺旋緣、Corti器、螺旋神經(jīng)元等處，在耳蝸的形態(tài)發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用[11]。HMGB1可以介導(dǎo)炎癥和免疫反應(yīng)，與多種疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[12]，Bellussi等[13]分析了慢性化膿性中耳炎患者黏膜中HMGB1表達情況，結(jié)果顯示，HMGB1陽性與炎性浸潤的密度一致，HMGB1在慢性中耳炎中過度表達，并且可能在從復(fù)發(fā)性急性中耳炎到慢性化膿性中耳炎的炎癥過程中發(fā)揮作用。巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染的新生小鼠耳蝸組織中，HMGB-1 mRNA 表達水平顯著升高，HMGB-1炎性通路可能在CMV先天性感染所致聽力減退的發(fā)病機制中發(fā)揮作用[14]。本研究結(jié)果顯示，分泌性中耳炎患者耳積液中HMGB1水平高于對照組血清水平，且急性組、亞急性組、慢性組患者的HMGB1水平均依次升高，提示患者體內(nèi)存在明顯炎癥反應(yīng)，HMGB1可能參與中耳炎的發(fā)展進程，可成為評價中耳炎疾病進展情況的一項指標。

IL-6是由單核巨噬細胞等多種細胞活化產(chǎn)生的炎癥因子，具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)，在發(fā)生內(nèi)外傷、外科手術(shù)、應(yīng)激反應(yīng)、感染、腦死亡、腫瘤產(chǎn)生以及其它情況的急性炎癥反應(yīng)過程中IL-6會快速生成，其過度激活時可加重炎性反應(yīng)程度，對組織造成損害[15]。IL-6在成人分泌性中耳炎患者中表達水平升高，且耳積液中IL-6水平顯著高于血漿水平[16]。急性分泌性中耳炎患者外周血IL-6水平顯著升高，且治療無效組患者外周血IL-6水平顯著高于治療有效組，表明可根據(jù)IL-6水平變化早期預(yù)測患者預(yù)后[17]。IL-6水平高的患者，機體可能存在過度免疫應(yīng)答，咽鼓管功能損傷嚴重，影響預(yù)后。本研究結(jié)果顯示，與對照組血清水平比較，分泌性中耳炎患者耳積液中IL-6水平顯著升高，與先前報道一致，且急性組、亞急性組、慢性患者的HMGB1水平均依次升高，提示IL-6水平變化與中耳炎患者的炎癥嚴重程度有關(guān)，可能參與中耳炎的發(fā)生發(fā)展。

本研究顯示，分泌性中耳炎患者耳積液HMGB1、IL-6水平顯著高于其血清水平，提示HMGB1、IL-6主要由病變部位局部分泌，其水平升高可能與機體免疫反應(yīng)有關(guān)。不同積液性質(zhì)患者 HMGB1、IL-6水平亦存在明顯差異。本研究顯示，黏液性組患者耳積液HMGB1、IL-6表達水平顯著升高，黏液性中耳積液患者更為嚴重，是導(dǎo)致中耳積液黏滯度增加的主要因素，患者炎癥程度越重，表明咽鼓管纖毛上皮以及鼓室黏膜受到耳積液影響時間越長，病情越嚴重[18]。本研究顯示分泌性中耳炎患者耳積液HMGB1、IL-6表達水平與患者病程呈正相關(guān)，進一步表明HMGB1、IL-6與患者病情嚴重程度相關(guān)。臨床上可作為提示中耳炎發(fā)病程度的預(yù)測因子。

綜上所述，HMGB1、IL-6在分泌性中耳炎患者耳積液中明顯高表達，與分泌性中耳炎的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，考慮到HMGBl刺激內(nèi)皮細胞可誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞釋放TNF-a、IL- 8和MCP-1，可以預(yù)測這些細胞因子產(chǎn)生了局部微環(huán)境的炎癥反應(yīng)，將這幾類炎癥因子在中耳炎積液中的表達程度納入筆者后繼研究中。