龐春燕，方婕，祁荷栩，肖力*

（1.電子科技大學(xué) 附屬醫(yī)院∥四川省人民醫(yī)院 口腔科，四川 成都 610072；2.口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室∥國(guó)家口腔疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心∥四川大學(xué) 華西口腔醫(yī)院 正畸科，四川 成都 610041）

顳下頜關(guān)節(jié)紊亂（temporomandibular joint disorder，TMD）是一種復(fù)雜而有爭(zhēng)議的疾?。?］。顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎（temporomandibular joint osteoarthritis，TMJOA）是TMD分類中最嚴(yán)重的疾病之一，其特點(diǎn)是關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)的破壞和喪失、軟骨下骨硬化、滑膜炎和骨質(zhì)增生［2］。顳下頜關(guān)節(jié)是唯一由纖維軟骨組成的關(guān)節(jié)。TMJOA患者的關(guān)節(jié)軟骨的退行性改變一般被認(rèn)為是由于關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)功能障礙后的自我重建所致［3］。然而，目前仍難以解釋導(dǎo)致這種疾病進(jìn)展的病理生理學(xué)機(jī)制。據(jù)報(bào)道，滑膜炎是導(dǎo)致關(guān)節(jié)病變的主要因素，而滑膜巨噬細(xì)胞的聚集，是滑膜炎的主要病理特征［4］。研究證實(shí)，甲基轉(zhuǎn)移酶樣蛋白3（methyltransferaselike 3，METTL3）作為一種m6A甲基轉(zhuǎn)移酶，可誘導(dǎo)M1巨噬細(xì)胞分化［5］。因此，本研究通過(guò)構(gòu)建TMJOA大鼠模型和巨噬細(xì)胞焦亡模型，進(jìn)一步探究METTL3對(duì)TMJOA滑膜巨噬細(xì)胞炎癥及焦亡的影響及其機(jī)制，以期為臨床防治TMJOA提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠（雄性，SPF級(jí)，8周齡）購(gòu)買于中山大學(xué)（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心東校區(qū)），許可證號(hào)SCXK（粵）2021-0029。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)過(guò)四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院∥四川省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)，倫理審批號(hào)：倫審（研）2022年第233號(hào)。

1.1.2 主要試劑

DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；Lipofectamine 3000購(gòu)自Thermo Fisher公司；蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒購(gòu)自碧云天公司；聚偏二氟乙烯（PVDF）膜購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad Laboratories公司；化學(xué)發(fā)光試劑購(gòu)自MILLIPORE公司；METTL3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，METTL3 siRNAs及對(duì)應(yīng)的對(duì)照購(gòu)自中國(guó)上海Genechem公司；蘇木精和伊紅（H＆E）、番紅固綠和阿利新藍(lán)染色試劑盒購(gòu)自Servicebio公司；所有免疫印跡抗體購(gòu)自Abcam公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 TMJOA模型構(gòu)建

實(shí)驗(yàn)前，所有大鼠在特定的無(wú)病原體實(shí)驗(yàn)室中飼養(yǎng)7 d。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)按四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院∥四川省人民醫(yī)院動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)的機(jī)構(gòu)準(zhǔn)則進(jìn)行。在大鼠右上第1磨牙牙面粘接金屬絲造成咬合創(chuàng)傷的辦法建立TMJOA動(dòng)物模型［6］。16只SD大鼠隨機(jī)分為2組，對(duì)照組（n＝8）和TMJOA組（n＝8）。

1.2.2 組織學(xué)檢測(cè)

顳下頜關(guān)節(jié)標(biāo)本在10%中性緩沖福爾馬林中固定3 d。樣本在10%乙二胺四乙酸中脫鈣14 d，梯度脫水進(jìn)行石蠟包埋。每只大鼠3張切片。從顳下頜關(guān)節(jié)的內(nèi)側(cè)切下3個(gè)不同層次的3 μm厚的矢狀面切片（相隔50μm）。對(duì)切片進(jìn)行蘇木精和伊紅（H＆E）染色，番紅固綠染色和阿利新藍(lán)染色以觀察樣本的病理結(jié)構(gòu)和軟骨基質(zhì)中蛋白多糖的變化。

1.2.3 Mankin's評(píng)分

Mankin's評(píng)分系統(tǒng)被用于評(píng)估顳下頜關(guān)節(jié)炎。組織學(xué)評(píng)分包含：（1）軟骨結(jié)構(gòu)光滑的非糜爛軟骨，0分；粗糙的非糜爛軟骨，1分；淺層纖維化，2分；未鈣化與鈣化軟骨的分離，3分；（2）細(xì)胞周圍基質(zhì)染色正常為0分；輕微增強(qiáng)為1分；強(qiáng)烈增強(qiáng)為2分；（3）軟骨細(xì)胞的空間排列正常為0分；彌漫性高細(xì)胞性為1分；集群性為2分；低細(xì)胞性為3分；（4）背景基質(zhì)染色正常為0分；輕微增加或減少為1分；嚴(yán)重增加或減少為2分；無(wú)染色為3分。

1.2.4 骨關(guān)節(jié)炎軟骨損傷分級(jí)（OARSI）評(píng)分

OARSI評(píng)分系統(tǒng)通過(guò)測(cè)量OA軟骨表現(xiàn)的縱向（等級(jí)）和橫向（階段）的進(jìn)展來(lái)評(píng)估軟骨的損傷程度。總分為OA等級(jí)（0～6）分加OA階段（0～4）分，代表對(duì)OA嚴(yán)重程度和范圍的綜合評(píng)估（0～24）分［7］。

1.2.5 顳下頜關(guān)節(jié)滑液巨噬細(xì)胞的分離

采用30 mg／kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠后，對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)區(qū)皮膚進(jìn)行消毒，采用玻璃注射器吸取0.2mL的生理鹽水，針尖緊貼關(guān)節(jié)凹表面進(jìn)入關(guān)節(jié)上腔，注入生理鹽水，經(jīng)反復(fù)回抽多次后再抽回，獲得的關(guān)節(jié)滑液采用Ficoll密度梯度離心法分離獲得單個(gè)核細(xì)胞，采用含10%胎牛血清（OriCell?，廣州賽業(yè)）的RPMI1640培養(yǎng)基（賽維爾，武漢）進(jìn)行培養(yǎng)。分離獲得的單個(gè)核細(xì)胞在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h后，去除懸浮細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞即為單核巨噬細(xì)胞。采用CD45抗體（ab10558，abcam）和CD68抗體（ab283654，abcam）進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，確定單核巨噬細(xì)胞純度大于90%，分離獲得的單核巨噬細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)研究。

1.2.6 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)

RAW264.7巨噬細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院。RAW264.7培養(yǎng)于添加10%胎牛血清、100 U／mL青霉素和100μg／mL鏈霉素的DMEM 中，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中。

1.2.7 焦亡細(xì)胞模型構(gòu)建

用500μng／mL脂多糖（LPS）處理RAW264.7細(xì)胞4 h，然后用5 mmol／L腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）處理細(xì)胞30 min，建立巨噬細(xì)胞焦亡細(xì)胞模型。

1.2.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

RAW264.7以每孔5×104個(gè)細(xì)胞的密度接種在12孔板中。24 h后，RAW264.7用Lipofectamine 3000（3 μL／孔）轉(zhuǎn)染METTL3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，METTL3 siRNAs及其對(duì)照。轉(zhuǎn)染48 h后，細(xì)胞被用于后期實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分5組：對(duì)照組、LPS+ATP模型組（模型組）、LPS+ATP模型轉(zhuǎn)染METTL過(guò)表達(dá)對(duì)照質(zhì)粒組（模型+OE-CTRL組）、LPS+ATP模型轉(zhuǎn)染METTL過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組（模型+OEMETTL3組）、LPS+ATP模型轉(zhuǎn)染METTL對(duì)照干擾RNA組（模型+si-CTRL組）、LPS+ATP模型轉(zhuǎn)染METTL干擾RNA組（模型+si-METTL3組）。

1.2.9 ELISA分析

收集大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液和各組RAW264.7培養(yǎng)液，離心后提取上清液。將上清液樣品（50μL）加入ELISA板中，在37℃下孵育2 h。孵育后，丟棄板內(nèi)容物，用0.01 mol／L三乙醇胺緩沖鹽水溶液（TBS）洗板6次。隨后，將底物溶液加入每個(gè)孔中。板子在黑暗中孵育20 min。最后，在每個(gè)孔中加入終止液。使用微孔板分光光度計(jì)在雙波長(zhǎng)（450 nm和570 nm）下測(cè)定光密度OD值。

1.2.10 免疫印跡

利用RIPA緩沖液提取各組細(xì)胞中的總蛋白。采用BCA試劑盒對(duì)各組蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行量化，采用SDS-PAGE分離等量的蛋白質(zhì)（40μg），然后轉(zhuǎn)移蛋白到PVDF。PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉1 h后，PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉1 h，PVDF膜與一抗后在4℃下孵育過(guò)夜，抗體包括METTL（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶1000）；NLRP3（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶1000）；IL-18（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶1000）；IL-1β（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶1000）；Caspase-1濃度2μg／mL；Caspase3（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶2000）；p65（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶1500）；p-p65（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶1000）；IκBα（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶1000）；p-IκBα（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶1000）；GAPDH（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶5000）。清洗后，膜與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育2 h，抗體包括山羊抗兔IgG H＆L（HRP）（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶5000）；山羊抗小鼠IgG H＆L（HRP）（V抗體∶V抗體稀釋液＝1∶5000）。增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑孵育后，將印跡暴露在X射線膠片上15 s進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 TM JOA造模對(duì)大鼠顳下頜關(guān)節(jié)組織病理結(jié)構(gòu)和關(guān)節(jié)軟骨的影響

H＆E染色結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠的顳下頜關(guān)節(jié)軟骨組織完整，排列整齊，結(jié)構(gòu)層次清晰，軟骨表面光滑；TMJOA組大鼠的顳下頜關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)嚴(yán)重破壞，軟骨細(xì)胞排列紊亂，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。番紅固綠染色結(jié)果顯示，對(duì)照組的蛋白多糖分布均勻而豐富，TMJOA組則表現(xiàn)出軟骨退化，伴隨著蛋白多糖區(qū)域和軟骨細(xì)胞的減少。阿利新藍(lán)染色也顯示，對(duì)照組相比，TMJOA模型組顯著變淺（圖1A）?；贖＆E和番紅固綠染色與阿利新藍(lán)染色結(jié)果，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，Mankin和OARSI評(píng)分在TMJOA模型組顯著升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1B和1C）。上述結(jié)果表明，通過(guò)在大鼠右上第1磨牙牙面粘接金屬絲造成咬合創(chuàng)傷的辦法成功建立了TMJOA大鼠模型。

圖1 TMJOA造模對(duì)大鼠顳下頜關(guān)節(jié)組織的影響Figure 1 Effect of TMJOAmolding on histopathological structure and articular cartilage of the temporomandibular joint in rats

2.2 METTL3在模型大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液巨噬細(xì)胞中的表達(dá)變化

為了進(jìn)一步探究TMJOA造模影響大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨組織的可能機(jī)制，首先從大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液中提取巨噬細(xì)胞。顯微鏡下，對(duì)照和TMJOA組的巨噬細(xì)胞都呈圓形或橢圓形，并伴隨短小突起（圖2A）。ELISA數(shù)據(jù)表示，與對(duì)照組相比，乳酸脫氫酶（LDH）活性在TMJOA模型大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液中顯著升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2B）。免疫印跡結(jié)果表明，METTL3蛋白在TMJOA模型大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液巨噬細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組（圖2C），結(jié)果說(shuō)明，METTL3潛在調(diào)控顳下頜關(guān)節(jié)滑液巨噬細(xì)胞參與TMJOA。

圖2 TMJOA造模后大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液中LDH活性和巨噬細(xì)胞中METTL3的表達(dá)Figure 2 The LDH activity in rat temporomandibular joint synovial fluid and METTL3 expression inmacrophages

2.3 NLRP3炎性小體和焦亡相關(guān)蛋白在模型大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液巨噬細(xì)胞中的表達(dá)

從對(duì)照組和TMJOA模型組大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液中提取巨噬細(xì)胞后，采用免疫印跡鑒定NLRP3炎性小體和焦亡相關(guān)蛋白在兩組巨噬細(xì)胞中的表達(dá)變化。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，NLRP3炎性小體相關(guān)蛋白（NLRP3、IL-18和IL-1β）在TMJOA模型組的表達(dá)顯著升高；同時(shí)，焦亡相關(guān)蛋白（cleaved Caspase 1／pro-Caspase 1）在TMJOA模型組的表達(dá)也明顯高于對(duì)照組（圖3）。結(jié)果說(shuō)明，大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液中巨噬細(xì)胞焦亡參與TMJOA。

圖3 TMJOA造模后大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液巨噬細(xì)胞中NLRP3炎性小體和焦亡相關(guān)蛋白的表達(dá)Figure 3 The NLRP3 inflammasome-and pyroptosis-related protein expression levels inmacrophages from rat temporomandibular joint synovial fluid.

2.4 NLRP3炎性小體和焦亡相關(guān)蛋白在METTL3過(guò)表達(dá)或沉默的焦亡模型中巨噬細(xì)胞中的表達(dá)變化

培養(yǎng)巨噬細(xì)胞RAW264.7，利用LPS聯(lián)合ATP誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞焦亡模型，構(gòu)建METTL3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和合成siRNAs，并轉(zhuǎn)染焦亡模型細(xì)胞。如圖4所示，與對(duì)照組相比，NLRP3、IL-18、IL-1β、cleaved Caspase 1／pro-Caspase 1在焦亡模型組顯著上調(diào)；與模型+OE-CTRL組相比，NLRP3、IL-18、IL-1β和cleaved Caspase 1／pro-Caspase 1表達(dá)在METTL3過(guò)表達(dá)的焦亡模型巨噬細(xì)胞中明顯升高；與模型+si-CTRL組相比，NLRP3、IL-18、IL-1β和cleaved Caspase 1／pro-Caspase 1表達(dá)在METTL3沉默的焦亡模型巨噬細(xì)胞中明顯降低，結(jié)果說(shuō)明，METTL3參與調(diào)控巨噬細(xì)胞焦亡。

圖4 METTL3對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞焦亡模型中NLRP3炎性小體和焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Figure 4 Effect of METTL3 on NLRP3 inflammasome-and pyroptosis-associated protein expressions in RAW264.7 macrophages pyroptosismodel

2.5 LDH 活性在METTL3過(guò)表達(dá)或沉默的焦亡模型巨噬細(xì)胞中的變化

ELISA數(shù)據(jù)顯示，與對(duì)照組相比，LDH活性在焦亡模型組明顯增強(qiáng)；與模型+OE-CTRL組相比，LDH活性在METTL3過(guò)表達(dá)的焦亡模型巨噬細(xì)胞中顯著升高；與模型+si-CTRL組相比，LDH活性在METTL3沉默的焦亡模型巨噬細(xì)胞中顯著降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖5）。

圖5 METTL3對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞焦亡模型中LDH活性的影響Figure 5 Effect of METTL3 on LDH activity in RAW264.7 macrophages pyroptosismodel

2.6 IκBα和p65磷酸化在METTL3過(guò)表達(dá)或沉默的焦亡模型巨噬細(xì)胞中的變化

免疫印跡顯示，與對(duì)照組相比，p-IκBα／IκBα和p-p65／p65比值在焦亡模型組顯著增加；與模型+OE-CTRL組相比，p-IκBα／IκBα和p-p65／p65比值在METTL3過(guò)表達(dá)的焦亡模型巨噬細(xì)胞中明顯升高；與模型+si-CTRL組相比，p-IκBα／IκBα和p-p65／p65比值在METTL3沉默的焦亡模型巨噬細(xì)胞中明顯降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖6）。結(jié)果說(shuō)明，METTL3通過(guò)激活NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)巨噬細(xì)胞焦亡。

圖6 METTL3對(duì)焦亡模型巨噬細(xì)胞中IκBα、p-IκBα、p65、p-p65蛋白表達(dá)的影響Figure 6 Effect of METTL3 on IκBα，p-IκBα，p65，and p-p65 protein expressions in pyroptosismodel macrophages

3 討論

TMJOA是一種多因素的疾病，以軟骨退化、滑膜炎和慢性疼痛為特征，是顳下頜關(guān)節(jié)最常見(jiàn)的疾病之一，發(fā)病率高，預(yù)后差［8］。炎癥、代謝和機(jī)械壓力與顳下頜關(guān)節(jié)炎密切相關(guān)［9］。目前TMJOA的機(jī)制并不完全清楚。因此，進(jìn)一步探究TMJOA相關(guān)的有效分子靶點(diǎn)對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的治療至關(guān)重要。本研究結(jié)果表明，TMJOA模型大鼠顳下頜關(guān)節(jié)組織病理?yè)p傷嚴(yán)重，且骨關(guān)節(jié)炎加重。

滑膜由內(nèi)膜層和下膜層組成。內(nèi)膜層是由纖維母細(xì)胞樣的滑膜細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組成?；は聦佑衫w維結(jié)締組織和血管組成，有巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞［10］?；ぱ缀突ぴ錾男螒B(tài)特征主要是巨噬細(xì)胞在內(nèi)膜層增殖和聚集［11］。M1和M2巨噬細(xì)胞之間的不平衡是誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）炎癥的關(guān)鍵［11］。巨噬細(xì)胞在受到炎癥刺激后會(huì)發(fā)生病理變化并釋放促炎分子，導(dǎo)致軟骨的退行性變化，而導(dǎo)致這些變化的機(jī)制尚不清楚。本研究首先證實(shí)LDH 活性在TMJOA大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液中顯著升高，并進(jìn)一步提取滑膜巨噬細(xì)胞，確定了NLRP3炎性小體和焦亡相關(guān)蛋白在TMJOA大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液巨噬細(xì)胞中高表達(dá)。更重要的是，我們意外發(fā)現(xiàn)，METTL3在TMJOA大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑液巨噬細(xì)胞中的表達(dá)明顯增加，表明METTL3在TMJOA中的重要作用。

METTL3作為最著名的m6A甲基轉(zhuǎn)移酶，其功能是對(duì)m6A修飾進(jìn)行可逆的轉(zhuǎn)錄組調(diào)節(jié)［12］。METTL3除了作為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶外，還調(diào)節(jié)mRNA翻譯等生物學(xué)過(guò)程［13］。研究表明，METTL3在多個(gè)生物過(guò)程中具有至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用，如細(xì)胞周期、增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移、分化和炎癥反應(yīng)等［14］。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，METTL3與M1巨噬細(xì)胞分化相關(guān)［15］。例如，METTL3可通過(guò)誘導(dǎo)M1巨噬細(xì)胞分化增強(qiáng)骨髓間質(zhì)干細(xì)胞成骨分化和遷移［16］；METTL3可通過(guò)STAT1甲基化促進(jìn)M1巨噬細(xì)胞極化［17］；METTL3通過(guò)NF-κB減輕LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)［5］。然而，METTL3對(duì)TMJOA滑膜巨噬細(xì)胞的影響及機(jī)制并不清楚。本研究首次證實(shí)了METTL3過(guò)表達(dá)可顯著增加NLRP3炎性小體和焦亡相關(guān)蛋白在LPS和ATP誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞RAW264.7中的表達(dá)，且METTL3沉默發(fā)揮相反的作用。此外，METTL3過(guò)表達(dá)也可增強(qiáng)焦亡模型巨噬細(xì)胞LDH的活性。

在機(jī)制探究中，本研究也初步證實(shí)，在LPS和ATP誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞RAW264.7中，METTL3過(guò)表達(dá)可明顯激活I(lǐng)κBα和p65磷酸化，METTL3沉默可顯著抑制IκBα和p65磷酸化。IκBα和p65是NF-κB信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白［18］。已有研究報(bào)道，NF-κB與TMJOA進(jìn)程相關(guān)［19-21］；另有研究證實(shí)，METTL3可通過(guò)NF-κB信號(hào)通路減弱LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)［5］。

綜上所述，METTL3可誘導(dǎo)TMJOA滑膜巨噬細(xì)胞NLRP3炎性小體和焦亡，且其調(diào)控機(jī)制可能與NF-κB信號(hào)通路的激活有關(guān)。因此，當(dāng)前的研究揭示，METTL3可能成為T(mén)MJOA治療的新靶點(diǎn)。

作者貢獻(xiàn)聲明

龐春燕：設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物造模，統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，撰寫(xiě)論文；方婕：實(shí)驗(yàn)操作，統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，修改論文；祁荷栩：實(shí)驗(yàn)操作，修改論文；肖力：提出研究思路和框架，修改論文。

利益沖突聲明

本研究未受到企業(yè)、公司等第三方資助，不存在潛在利益沖突。