陳 娟， 古麗波斯坦·買買提艾力， 卡迪麗婭·木拉提， 郭小平， 張 瑾， 唐 亮

新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院 耳鼻喉診療中心，新疆 烏魯木齊 830001

變應性鼻炎(allergic rhinitis，AR)為臨床較常見的非傳染性鼻炎，以鼻黏膜慢性炎癥為主要特征，發(fā)病率呈上升趨勢[1]。AR發(fā)病機制復雜，免疫細胞、肥大細胞、嗜酸性粒細胞、炎癥介質(zhì)等均參與此過程，其中，免疫反應是AR發(fā)病的病理基礎，免疫機制失衡可引起大量炎癥因子釋放，加重AR病情[2]。miRNAs在免疫細胞發(fā)育分化、炎癥反應起到調(diào)控作用，其異常表達可能導致免疫紊亂，激發(fā)炎癥反應[3]。miR-107參與炎癥反應調(diào)控，其表達可抑制炎癥反應信號通路，從而減少炎癥反應的發(fā)生[4]。本研究旨在探討miR-107與AR病情嚴重程度以及炎癥因子的相關性，以期為臨床診治提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院自2018年1月至2020年10月收治的74例AR患者納入B組。納入標準：典型陣發(fā)性噴嚏、流鼻涕、鼻癢、鼻塞，符合2015年天津AR診治指南相關標準[5]；年齡>18歲。排除標準：血管運動性鼻炎、非變應性鼻炎伴嗜酸粒細胞增多綜合征、感染性鼻炎、激素性鼻炎、藥物性鼻炎等其他鼻部疾??；近期患有急慢性感染性疾病；合并其他部位惡性腫瘤。另將同期于我院行鼻中隔矯治手術(shù)的69例患者納入A組。A組：男性39例，女性30例；年齡25～59歲，平均年齡(35.02±4.93)歲。B組：男性41例，女性33例；年齡23～56歲，平均年齡(34.41±4.72)歲。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 局部麻醉下，取患者下鼻甲前黏膜組織，無菌生理鹽水漂洗干燥后，于-80℃液氮保存待檢。室溫下，復融組織標本，TRIzol法提取總RNA。選擇吸光度值A260/A280在1.8～2.0的RNA樣品，采用M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(Epicentre公司)，按照試劑盒說明將其轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用CFX96實時熒光定量PCR儀(美國Bio-Rad)檢測組織中miR-107、白細胞介素(interleukin，IL)-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)表達。引物合成及序列測定由上海基康公司完成。miR-107：上游5′-ACACTCCAGCTGGGAGCAGCATTGTACAGG-3′，下游5′-TGTCGTGGAGTCGGCAATTC-3′。IL-6：上游5′-GGTACATCCTCGACGGCATCTC-3′，下游5′-GCTCTGGCTTGTTCCTCACTACT-3′。IL-1β：上游5′-ATCTGTACCTGTCCTGCGTGTTG-3′，下游5′-TTCTGCTTGAGAGGTGCTGATGT-3′。IL-13：上游5′-CCACGGTCATTGCTCTCACTT-3′，下游5′-GCTGTCAGGTTGATGCTCCAT-3′。IL-17：上游5′-TTACTACAACCGATCCACCTCAC-3′，下游5′-CCACGGACACCAGTATCTTCTC-3′。IL-22：上游5′-AGGACACAGACGGTGGAAAC-3′，下游5′-TGTTTTCGCAGCATCAGAAC-3′。IL-23：上游5′-AGCAGCTCAAGGATGGCACTCAG-3′，下游5′-CCCCAAATTTCCCTTCCCATCTA-3′。IL-10：上游5′-TGTTGCCTGGTCCTCCTGACT-3′，下游5′-GCCTTGATGTCTGGGTCTTGGTT-3′。TGF-β1：上游5′-GCTAATGGTGGACCGCAAC-3′，下游5′-GCAGTGAGCACTGAAGCGA-3′。反應條件：95℃變性10 s，65℃退火20 s；75℃延伸15 s，共40個循環(huán)。以U6 snRNA為內(nèi)參，根據(jù)2-ΔΔCt計算miR-107、IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23、IL-10、TGF-β1相對表達量。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者鼻黏膜組織中miR-107及各炎癥因子水平比較 B組患者鼻黏膜組織中miR-107、IL-10、TGF-β1水平均低于A租，IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23水平均高于A租，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 AR患者miR-107表達水平與臨床病理特征關系 中重度患者鼻黏膜組織中miR-107表達水平低于輕度患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；IgE陽性患者鼻黏膜組織中miR-107表達低于陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；伴哮喘患者鼻黏膜組織中miR-107表達低于無哮喘患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。不同年齡、性別、癥狀發(fā)作時間患者miR-107表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 AR患者miR-107表達水平與臨床病理特征關系

2.3 AR患者鼻黏膜組織中miR-107表達與病情嚴重程度、炎癥因子相關性 AR患者鼻黏膜組織中miR-107表達與疾病嚴重程度、IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23表達均呈負相關性(r=-0.543、-0.609、-0.598、-0.537、-0.429、-0.538、-0.491，P<0.05)，與IL-10、TGF-β1表達呈正相關性(r=0.612、0.693，P<0.05)。

3 討論

miRNAs調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡以及分化等多種生理過程，并參與惡性腫瘤、炎癥性疾病、免疫疾病等多種疾病發(fā)病機制[6]。miR-107在心臟、骨骼肌、大腦、肺、胎盤中廣泛而穩(wěn)定的表達，在細胞對缺血應激反應、細胞代謝、細胞周期調(diào)控、組織損傷修復中發(fā)揮重要作用[7]。miR-107具有免疫調(diào)節(jié)功能，在炎癥性疾病中表達降低，可通過調(diào)控免疫反應影響炎癥因子水平，促炎細胞因子對miR-107也有調(diào)控作用，兩者相互作用參與炎癥性疾病發(fā)生[8]。本研究結(jié)果表明，miR-107在AR患者鼻黏膜組織中表達明顯降低。這說明，miR-107表達缺乏可能引起AR發(fā)病。本研究同時發(fā)現(xiàn)，B組患者鼻黏膜組織中IL-10、TGF-β1水平均低于A租，IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23水平均高于A租，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。這表明，AR患者體內(nèi)存在Th17/Treg免疫失衡和Th17介導的過度炎癥反應。

Th17/Treg動態(tài)平衡在維持免疫穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用，Th17/Treg失衡可能導致機體炎癥反應、自身免疫疾病的發(fā)生。IL-10可抑制炎癥細胞激活、遷移和粘附，起到抗炎作用[9]。TGF-β1可抑制免疫細胞增殖、淋巴細胞分化、炎癥細胞因子產(chǎn)生，并能誘導Treg細胞產(chǎn)生，TGF-β1、Treg細胞在AR患者均降低，TGF-β1/Treg參與AR發(fā)病[10]。IL-6可促使CD4+T細胞向Th17細胞分化，IL-17、IL-22、IL-23均為Th17細胞相關因子，具有介導T細胞炎癥反應作用[11]。IL-1β是一種典型促炎因子，AR患者線粒體活性氧和NLRP3炎癥小體產(chǎn)生可上調(diào)IL-1β，IL-1β過度釋放可促進AR嚴重炎癥反應[12]。IL-13可誘導鼻上皮炎癥反應，參與AR發(fā)病[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-107表達與IL-10、TGF-β1表達呈正相關性，與IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23表達呈負相關性。這說明，miR-107可能通過調(diào)控Th17/Treg系統(tǒng)參與AR發(fā)病機制，miR-107表達缺失可誘導Th17相關細胞因子釋放，抑制Treg相關細胞因子合成，進而促進炎癥反應的發(fā)生。miR-107調(diào)控AR炎癥反應的機制尚不清楚，可能機制為：miR-107作為一種抑制炎癥反應基因，通過多種信號通路降低炎癥反應、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應，并通過調(diào)控炎癥因子表達抑制炎癥反應[3，9-11]。miR-107表達缺失可能導致AR免疫失調(diào)，導致促炎細胞因子過度釋放，加重上呼吸道炎癥反應。本研究還發(fā)現(xiàn)，miR-107表達與IgE表達和伴發(fā)哮喘有關。這說明，miR-107表達持續(xù)缺失可能導致AR病情加重，miR-107表達水平可能受IgE表達和伴發(fā)哮喘影響。IgE介導的Ⅰ型變態(tài)反應是AR發(fā)病的核心機制，IgE水平越高，AR發(fā)作強度越大[14]，可能導致miR-107表達下調(diào)。

綜上所述，AR患者鼻黏膜組織中miR-107表達下調(diào)，且與病情嚴重程度及炎癥因子水平均相關，miR-107介導的免疫失衡和過度炎癥反應在AR發(fā)病機制中可能發(fā)揮重要作用。