張圣潔，瞿利帥，曹 維

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 226001）

近年來胃癌檢出率明顯提高，但早期檢出率仍較低。出現(xiàn)不適癥狀而就診的患者多數(shù)已為腫瘤進展期，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差，因此探索新的早期胃癌生物學(xué)診斷指標(biāo)及治療靶點尤為重要[1]。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，LncRNA），作為一組擁有大于200核苷酸單位卻缺乏蛋白質(zhì)編碼能力的核苷酸序列，不僅廣泛參與細(xì)胞增殖、分化，還通過影響細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力來調(diào)節(jié)組織的異常發(fā)育，與癌癥的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系。小核仁RNA宿主基因12（SNHG12）為LncRNA的特殊類型，定位于染色體1p35.3。研究表明，LncRNA SNHG12與肝癌、胰腺癌、前列腺癌等多種癌癥的進程關(guān)系密切[2]。LncRNA SNHG12在癌組織中高表達，表達量越高預(yù)示癌癥增殖速度越快，侵襲能力越強。本研究選取2015—2020年南通大學(xué)附屬醫(yī)院手術(shù)切除的80對胃癌及癌旁組織，檢測LncRNA SNHG12在胃癌及配對癌旁組織中的表達，研究LncRNA SNHG12與胃癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，探討LncRNASNHG12對胃癌的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的80對胃癌組織及其配對癌旁組織（切緣離癌組織邊緣≥2 cm），術(shù)中組織切除后及時置于液氮中冷凍，并保存于-80℃冰箱?；颊咧心行?2例，女性38例，年齡38～85歲，平均68±3歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR） 按照說明書，使用Trizol試劑（Invitrogen公司，美國）提取組織中總RNA，然后采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Fermentas公司）進行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用MixPCR擴增試劑盒（Fermentas公司）在Light Cycler 96 PCR儀上進行qRT-PCR。PCR擴增體系為:SYBR Premix 12.5μL，Prime F和R（10μmol/L）各1μL，cDNA 2份，每份2μL，ddH2O 8.5μL。反應(yīng)條件:預(yù)變性95℃30 sec，PCR反應(yīng)95℃5 sec，60℃30 sec，共40個循環(huán)。PCR引物使用Primer 5.0軟件設(shè)計，由上海Invitrogen公司合成。LncRNA SNHG12_F:5’-TCTGGTGATCGAGGACTTCC-3’；R:5’-ACCTCCTCAGTATCACACACT-3’；GAPDH_F:5’-GTCGATGGCTAGTCGTAGCATCGAT-3’；R:5’-TGCTAGCTGGCATGCCCGATCGATC-3’。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt計算LncRNA SNHG12相對表達水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析處理，GrapghPad Prism8.0軟件繪圖。計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以頻數(shù)和率表示，組間比較采用Fisher精確概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 LncRNA SNHG12在胃癌組織中高表達 qRTPCR結(jié)果顯示，LncRNA SNHG12在胃癌組織中的表達水平顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖1。

圖1 LncRNA SNHG12在胃癌及癌旁組織中的表達

2.2 LncRNA SNHG12表達與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 LncRNA SNHG12在胃癌組織中表達量與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及血管侵犯顯著相關(guān)（P<0.05），但與患者性別、年齡及HP感染無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。見表1。

表1 LncRNA SNHG12表達與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 例

3 討 論

LncRNA參與正常發(fā)育及疾病的多種細(xì)胞生物學(xué)過程，通過轉(zhuǎn)錄、翻譯、蛋白質(zhì)修飾、RNA-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物形成等多種形式介導(dǎo)基因表達。研究表明LncRNA表達水平高低直接反映腫瘤的性質(zhì)，并與癌癥患者的預(yù)后及生存時間密切相關(guān)。LncRNA還可通過競爭性占據(jù)miRNA的共享結(jié)合序列，隔離miRNAs并改變下游靶基因的表達，進而發(fā)揮內(nèi)源性競爭性核糖核酸（competing endogenousRNAs，ceRNAs）作用[3]。例如，LncRNA HOTAIR通過調(diào)節(jié)miR-20a-5p/HMGA2軸影響乳腺癌細(xì)胞生長、遷移、侵襲和預(yù)后[4]，LncRNA MEG3通過調(diào)節(jié)p53信號通路抑制胃癌增殖和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]，LncRNA AK023391通過激活PI3K/Akt信號通路而促進胃癌發(fā)生和侵襲[5]。研究LncRNA在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其機制，有助于提高早期胃癌檢出率，改善患者生存預(yù)后。

SNHG12是新發(fā)現(xiàn)的小核仁RNA宿主基因家族一員，在子宮內(nèi)膜癌、肝癌、胰腺癌、三陰性乳腺癌等惡性腫瘤中異常表達[6-7]。2015年首次發(fā)現(xiàn)SNHG12在子宮內(nèi)膜癌中高表達，降低LncRNA SNHG12表達則抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖、侵襲，過表達LncRNA SNHG12則促進內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖，抑制癌細(xì)胞凋亡[8]。肝癌組織SNHG12表達明顯高于癌旁組織，SNHG12通過介導(dǎo)miR-199a-5p軸調(diào)節(jié)肝細(xì)胞癌的增殖、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程[9]。SNHG12通過吸附miRNA-320b促進胰腺癌的進展[10]。三陰性乳腺癌中SNHG12表達顯著上調(diào)，通過調(diào)節(jié)MMP13表達促進乳腺癌細(xì)胞的生長[11]。YANG等[12]研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)LncRNA SNHG12表達可明顯減低miRNA-199a/b-5p軸的抑癌作用，進一步促進胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力。ZHAO等[13]研究表明，LncRNA SNHG12還可通過吸附miR-16而促進胃癌細(xì)胞的生物學(xué)進程。ZHANG等[14]證實LncRNA SNHG12可作為小分子RNA-320的“分子海綿”競爭性結(jié)合miR-320，從而促進胃癌細(xì)胞的快速增殖。

本研究結(jié)果顯示，LncRNA SNHG12在人胃癌組織中的表達顯著高于配對癌旁組織，LncRNA SNHG12在胃癌組織中表達量與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及血管侵犯顯著相關(guān)，提示LncRNA SNHG12確實可作為胃癌診斷和治療的生物學(xué)指標(biāo)。