張 慧，錢 泉，楊鉞戈，趙自愛，周錦燕，張 蕓，李 躍，李樹紅，曾千春，2**

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南辣木研究所，云南 昆明 650201；3.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所，云南 昆明 650223）

羊肚菌（Morchella spp.）隸屬于子囊菌亞門（Ascomycotina） 盤菌綱 （Discomycetes） 盤 菌 目（Pezizales） 羊肚菌科 （Morohellaceae） 羊肚菌屬（Morchella），是珍貴的食用和藥用真菌[1-2]。隨著人們生活水平的日益提高，更多人選擇食藥同源的羊肚菌作為營養(yǎng)滋補佳品。20世紀(jì)80年代初，我國開始羊肚菌人工栽培技術(shù)的研究[1-2]，目前梯棱羊肚菌（Morchella importuna）、六妹羊肚菌 （Morchella sextelata） 在我國的栽培量位居前列[3-5]。辣木（Moringa oleifera Lam），屬辣木科 （Moringaceae） 辣木屬（Moringa）植物，多年生喬木，速生，且葉片、莖稈中含有豐富的礦物質(zhì)、維生素和氨基酸[6-7]。在云南，菜用型辣木每年都要進行修剪，產(chǎn)生大量廢棄莖桿，將其添加至羊肚菌栽培基質(zhì)中，可以充分利用辣木莖桿中的營養(yǎng)成分，也能解決辣木莖桿廢棄資源的轉(zhuǎn)化利用問題，豐富了羊肚菌栽培基質(zhì)的原料來源，為栽培出更高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的羊肚菌提供更多可能。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

菌株YD1號（梯棱羊肚菌）、YD4號（六妹羊肚菌）來源于云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所食用菌研究中心。羊肚菌母種培養(yǎng)基選擇PDY培養(yǎng)基（葡萄糖20 g、瓊脂15 g、蛋白胨2 g、酵母粉2 g、磷酸二氫鉀0.2 g，水1 000 mL，自然pH），配好后用電磁爐加熱，使瓊脂溶解，裝入三角燒瓶，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌。接種后封口，放入23℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，約7 d～10 d菌絲長滿，母種制備成功，放入4℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 基質(zhì)配比

栽培袋中的基質(zhì)配比分為2組，配方組成見表1。

表1 基質(zhì)配比Tab.1 Formula proportion

由表1所示，基質(zhì)配方分為辣木組配方和對照組（雜木屑）配方，辣木屑[8]、雜木屑、麥殼提前潤濕12 h，將各個配方基質(zhì)分別攪拌均勻后裝入18 cm×35 cm×0.05 cm的菌袋，每個菌袋裝基質(zhì)500 g，每組12袋（每塊地可起3壟，每壟需播撒4袋，每袋500 g），控制含水量在55%～60%，放入滅菌鍋滅菌2 h（121℃、0.15 MPa）[3]，待冷卻后，在超凈工作臺上接入母種15袋，后放入菌絲培養(yǎng)室培養(yǎng)。

1.3 羊肚菌菌絲生長速率測定方法

接種后，每隔2 d～4 d用記號筆在菌袋上劃線記錄一次，直至菌絲長滿整袋。每組配方從中任意取出12袋計算平均速率，每2條相臨劃線間任取3段距離，計算平均值，得出菌絲平均生長速率；最后再將菌袋上所有相臨劃線間的平均生長速率取平均值，得到整個菌絲生長階段的菌絲平均生長速率。記錄菌絲生長過程中菌核的發(fā)生時間及成熟時間，菌核從白色小點逐漸變成黃色即為菌核成熟[9-10]。

1.4 羊肚菌大棚播種及管理

將菌株YD1號（梯棱羊肚菌） 和YD4號（六妹羊肚菌）播種于云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院嵩明現(xiàn)代試驗基地大棚，羊肚菌菌絲長滿整袋即可進行大田播種栽培。大田播種時，將羊肚菌栽培袋撕開、捏碎放入小盆，播種深度約4 cm～5 cm。每小區(qū)播量為4袋（1.76袋/m2），播撒完畢后覆土，澆水，播種7 d后采用滴灌（每天打開滴灌澆水10 min或每2天澆水15 min，采用滴灌會降低澆水時對表面菌絲的傷害）[9-10]。

1.5 羊肚菌成分測定方法

大棚羊肚菌出菇后進行采收、稱重，得到每試驗組產(chǎn)量數(shù)據(jù)。將田間最先收獲的辣木基質(zhì)栽培的羊肚菌及對照送至昆明市農(nóng)業(yè)農(nóng)村部產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測測試中心，測定其粗蛋白按照GB 5009.5-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定[20]方法、總糖按照GB 5009.7-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中還原糖的測定[21]方法、水分按照GB 5009.3-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定[22-23]方法、灰分按照GB 5009.4-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測定[24]方法、脂肪按照GB 5009.6-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪的測定[25]方法的含量，每個檢測項目設(shè)置3個重復(fù)[11]。

1.6 數(shù)據(jù)處理

將菌種培養(yǎng)期間和栽培階段記錄的試驗數(shù)據(jù)，利用統(tǒng)計軟件Excel 2016和DPS 7.05對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。對不同配方處理間的差異進行單因素方差分析和Duncan氏多重比較（P<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基質(zhì)羊肚菌菌核菌絲生長情況

不同配方基質(zhì)羊肚菌菌核及菌絲的生長情況見表2、表3。

表2結(jié)果表明，基質(zhì)中添加60%辣木莖桿栽培的2種羊肚菌（MR1組和MR4組） 菌核出現(xiàn)時間均比對照組提前2 d；菌核成熟時間均比對照組提前3 d～4 d。2種羊肚菌菌絲生長速度MR1組為12.594 3 mm·d-1、MR4 組 （六妹羊肚菌） 為 15.932 1 mm·d-1，顯著快于對照組。不同栽培基質(zhì)羊肚菌菌絲滿袋情況見表3。

表2 不同基質(zhì)羊肚菌菌核菌絲生長情況Tab.2 Growth of Morchella spp.sclerotium in different substrates

表3 不同基質(zhì)羊肚菌菌絲滿袋天數(shù)Tab.3 Full bag days of Morchells spp.mycelium with different substrates

由表3可知，添加辣木莖桿基質(zhì)培養(yǎng)的羊肚菌首袋滿袋菌絲均早于對照2 d；末袋均早于3 d。

2.2 大棚播種生長狀態(tài)

2種羊肚菌不同基質(zhì)栽培后移入大棚栽培5 d的生長情況見圖1。播種50 d后的生長情況見圖2。

圖1 播種5 d后羊肚菌生長情況Fig.1 Growth of Morchella spp.after sowing for 5 days

由圖1、圖2所示，在大田分別播種4種羊肚菌栽培種，播種5 d后，MR1組開始形成大量的菌霜，CK1無明顯變化；MR4組出現(xiàn)零散的少量菌霜，CK4無明顯變化；播種50 d后，MR1組發(fā)現(xiàn)土面有類似于羊肚菌原基的物質(zhì)形成；播種69 d后，在MR1組土面出現(xiàn)羊肚菌幼菇，證明了用辣木莖桿作替代基質(zhì)可以栽培羊肚菌；播種80 d后，CK1、CK4開始陸續(xù)出菇。

圖2 梯棱羊肚菌在辣木基質(zhì)下的生長情況Fig.2 Growth of Morchella importuna under Moringa oleifera stem substrate

2.3 羊肚菌產(chǎn)量測定

供試4組羊肚菌各在21.12 m2樣地中的5次采收結(jié)果見表4。

由表4可知，樣地中梯棱羊肚菌（MR1組）添加辣木培養(yǎng)出的鮮菌總產(chǎn)量為8.4 kg，高于對照組2.3 kg；六妹羊肚菌（MR4組） 添加辣木培養(yǎng)出的鮮菇總產(chǎn)量為2.9 kg，對照組為3.3 kg，低于對照組。在第5次采收時，梯棱羊肚菌（MR1組） 還在持續(xù)有幼菇長出，六妹羊肚菌（MR4組）幾乎結(jié)束了整個生長周期。

表4 羊肚菌產(chǎn)量Tab.4 Yield of Morchella spp.

2.4 辣木基質(zhì)栽培六妹羊肚菌成分測定

首次收獲的辣木基質(zhì)培養(yǎng)六妹羊肚菌的成分含量統(tǒng)計見圖3。

圖3 辣木基質(zhì)培養(yǎng)六妹羊肚菌成分含量Fig.3 Component content of Morchella sextelata cultured in Moringa oleifera substrate

由圖3所示，六妹羊肚菌辣木組（MR4組） 蛋白質(zhì)、總糖、水分、灰分、粗脂肪含量依次為3.67%、0.42%、88.10%、1.09%、7.02%；與對照組（CK4組）相比，蛋白質(zhì)含量提高0.27%，粗脂肪含量提高1.71%，灰分含量降低0.21%。從辣木基質(zhì)培養(yǎng)羊肚菌的成分分析來看，辣木不僅可以作為替代基質(zhì)來栽培羊肚菌，而且可以提高羊肚菌品質(zhì)。

3 結(jié)論與討論

3.1 辣木基質(zhì)對菌核菌絲生長情況的影響

以辣木莖桿為基質(zhì)栽培梯棱羊肚菌和六妹羊肚菌，均能使菌核更早發(fā)生、更快成熟，并能加速菌絲生長，縮短菌絲培養(yǎng)時間。菌絲體和菌核的產(chǎn)生是羊肚菌子實體形成的重要階段，而不同的基質(zhì)對菌絲和菌核產(chǎn)生的時間和數(shù)量有顯著影響[12]。研究中對照組的菌絲生長速度與賀國強等[13]研究結(jié)果一致。而采用辣木莖桿作基質(zhì)栽培的羊肚菌菌絲生長速度有顯著提高，可以縮短生長周期。故在后續(xù)研究中，可嘗試不同比例的辣木配方栽培羊肚菌，為進一步篩選最適羊肚菌栽培的辣木配方。

3.2 播種后對羊肚菌產(chǎn)量的影響

研究結(jié)果證實了采用辣木莖桿作基質(zhì)可栽培羊肚菌，并且可以提高梯棱羊肚菌的產(chǎn)菌量，帶來更高的經(jīng)濟效益；與六妹羊肚菌相比，辣木配方更適宜于栽培梯棱羊肚菌。儲甲松等[14]采用12 m2的試驗地栽培野生羊肚菌 [Morehella esculenta （L.）Pers.]，其產(chǎn)量在1.11 kg～1.22 kg，與本研究中六妹羊肚菌的產(chǎn)量相近。對于羊肚菌的人工栽培，目前有較多研究，有的試驗產(chǎn)量很高，但重復(fù)性普遍較低，產(chǎn)量不能穩(wěn)定[15]。因此，后續(xù)將進一步研究不同比例的辣木配方栽培梯棱羊肚菌品種，篩選出適宜于該品種生長的辣木配方，使其產(chǎn)量穩(wěn)定。

3.3 辣木莖桿作基質(zhì)對羊肚菌營養(yǎng)成分的影響

添加辣木莖桿作基質(zhì)栽培羊肚菌的試驗組MR4和對照組CK4相比，提高了羊肚菌中蛋白質(zhì)和粗脂肪的含量。研究表明，羊肚菌蛋白質(zhì)包含19種氨基酸，其中含有多數(shù)人體必需氨基酸[16]，并且具有抗氧化、提高免疫力和抗癌的作用[17]，是營養(yǎng)和保健佳品。羊肚菌的脂肪酸成分中：亞油酸占56.0%、油酸占28.41%、硬脂酸占2.02%、軟脂酸占13.54%[18]，其中亞油酸含量最高，也是其主要藥用成分，具有預(yù)防動脈粥樣硬化、降低膽固醇、促進人體腎上腺皮質(zhì)激素分泌、提高人體應(yīng)激能力的功效[19]。因此，采用辣木莖稈基質(zhì)栽培羊肚菌，可以提高其營養(yǎng)價值，但造成成分變化的因素還有待進一步研究。