王瑾琳

河南省人民醫(yī)院/鄭州大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州 450000

α-珠蛋白生成障礙性貧血(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“地貧”)為最常見(jiàn)的常染色體隱性遺傳病之一。其致病機(jī)制是α-珠蛋白基因缺失或非缺失突變，造成α-珠蛋白鏈合成受到抑制，引發(fā)遺傳性溶血性貧血[1-2]。α-地貧在地中海和東南亞發(fā)病率較高，我國(guó)發(fā)病人群多集中在南方地區(qū)[3]。α-地貧若未被及時(shí)發(fā)現(xiàn)、治療，隨著病情進(jìn)展，后期可引發(fā)較嚴(yán)重的慢性溶血性貧血，繼發(fā)溶血危象、骨骼變化、生長(zhǎng)發(fā)育障礙、重度貧血等，最終患者只能通過(guò)輸血以維持生命[4]。因此，及時(shí)、有效的診斷對(duì)α-地貧患者的預(yù)后尤為重要。新生兒期，患兒血液血紅蛋白(Hb) Bart′s水平為α-地貧篩查的敏感指標(biāo)[5]。鑒于此，本研究將足跟血干血斑毛細(xì)管電泳檢測(cè)用于新生兒期α-地貧篩查，以探討其應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2018年5月至2021年2月于本院治療的182例靜止型α-地貧患兒臨床資料。納入研究的患兒：男99例，女83例；出生時(shí)胎齡37～42周，平均(39.68±1.02)周。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)新生兒出生后3～5 d內(nèi)有采集足跟血進(jìn)行檢測(cè)；(2)家屬對(duì)本研究知情，并簽署知情同意書(shū)；(3)血斑直徑>8 mm且有良好滲透性。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有其他血液疾病；(2)有免疫功能障礙；(3)合并傳染性疾病。

1.2方法

1.2.1足跟血血斑標(biāo)本采集 采集新生兒出生3～5 d時(shí)的足跟內(nèi)或外側(cè)血，血液滴于采血濾紙上，注意每個(gè)血斑要求大于8 mm，均由正面滲透至背面，共采集3個(gè)血斑。晾干后置入塑料袋內(nèi)，放入4 ℃冰箱密封保存。將標(biāo)本送至篩查中心進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2干血斑毛細(xì)管電泳技術(shù) 采用全自動(dòng)干血片毛細(xì)管電泳儀(型號(hào)：Capillarys 2 Neeonat FAST)以及配套電泳試劑盒開(kāi)展檢測(cè)工作；采用專(zhuān)用打孔鉗取直徑3.8 mm血斑標(biāo)本置入樣品孔中，每孔加50 μL蒸餾水，置于4 ℃冰箱存放2～72 h；進(jìn)行血紅蛋白(Hb)電泳，測(cè)定Hb各成分的水平。

1.3觀察指標(biāo) (1)分析新生兒期靜止型α-地貧篩查的檢出率。(2)分析新生兒期各種靜止型α-地貧患兒Hb Bart′s水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，Hb Bart′s水平呈偏態(tài)分布，計(jì)量資料用[M(P25，P75)]表示，多組間比較采用多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis檢驗(yàn))，并進(jìn)行各組間兩兩比較；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)并進(jìn)行兩兩比較；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1靜止型α-地貧篩查的檢出率 新生兒期靜止型α-地貧檢出率為58.24%(106/182)。5種靜止型α-地貧中：αWSα/αα型的檢出率為0.00%；-α3.7α/αα型的檢出率為38.71%(24/62)；-α4.2α/αα型的檢出率為44.00%(11/25)；αQSα/αα型的檢出率為80.00%(8/10)；αCSα/αα型的檢出率為95.45%(63/66)，其檢出率最高。

2.2新生兒期4種靜止型α-地貧患兒的Hb Bart′s水平 -α3.7α/αα、-α4.2α/αα、αCSα/αα、αQSα/αα型患兒Hb Bart′s水平分別為0.30(0.30，0.40)%、0.36(0.30，0.49)%、0.89(0.68，1.11)%、0.63(0.47，0.78)%。以上4種靜止型α-地貧患兒的Hb Bart′s水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=71.29，P<0.001)。兩兩比較：αCSα/αα型患兒Hb Bart′s水平高于αQSα/αα、-α4.2α/αα、-α3.7α/αα型患兒；αQSα/αα型患兒Hb Bart′s水平高于-α4.2α/αα、-α3.7α/αα型患兒(P<0.05)；-α4.2α/αα型患兒Hb Bart′s水平與-α3.7α/αα型患兒比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。新生兒期4種靜止型α-地貧患兒Hb Bart′s水平分布見(jiàn)表1。

表1 新生兒期4種靜止型α-地貧患兒Hb Bart′s水平分布[n(%)]

3 討 論

地貧是全球病例數(shù)量最多、分布最廣的一種單基因病[6-7]。α-地貧臨床表現(xiàn)具有高度遺傳異質(zhì)性，診斷金標(biāo)準(zhǔn)為基因檢測(cè)，但該方法煩瑣，且對(duì)設(shè)備的要求較高，故臨床還需尋找更為簡(jiǎn)便且準(zhǔn)確的α-地貧篩查方法。

現(xiàn)階段，臨床診斷地貧的常用篩查手段包括血常規(guī)檢測(cè)結(jié)合紅細(xì)胞脆性檢測(cè)、Hb電泳法、高效液相色譜法等[8]。經(jīng)臨床實(shí)踐證實(shí)，血常規(guī)檢測(cè)結(jié)合紅細(xì)胞脆性檢測(cè)應(yīng)用于地貧篩查診斷，準(zhǔn)確性不高，漏檢現(xiàn)象時(shí)常發(fā)生，臨床應(yīng)用相對(duì)較少；高效液相色譜法篩查地貧易受到其他因素干擾，對(duì)操作要求較高，且檢測(cè)花費(fèi)昂貴，臨床適用范圍較小；毛細(xì)管電泳技術(shù)常用于Hb檢測(cè)，具備普適性，在地貧篩查中應(yīng)用較為廣泛，為目前較適合用于新生兒地貧篩查的技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)新生兒Hb中區(qū)帶，可輔助臨床判斷地貧[9]。有研究報(bào)道，地貧患者Hb Bart′s區(qū)帶增高，但也存在未見(jiàn)Hb Bart′s區(qū)帶增高的α-地貧患者[10]。調(diào)查顯示，新生兒期應(yīng)用臍帶血進(jìn)行Hb電泳分析Hb Bart′s水平對(duì)α-地貧的篩查結(jié)果與基因檢測(cè)結(jié)果的符合率可達(dá)90%，但對(duì)成人或兒童α-地貧的診斷符合率較低，故該項(xiàng)檢測(cè)應(yīng)選擇在新生兒時(shí)期進(jìn)行[11]。與以往研究中采用臍帶血為篩查標(biāo)本不同，本研究采用足跟血干血斑標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，與臍帶血相比，具有標(biāo)本保存簡(jiǎn)便、運(yùn)輸方便的優(yōu)勢(shì)，在新生兒出生3～5 d內(nèi)即實(shí)施α-地貧篩查，有助于臨床及早發(fā)現(xiàn)患者，對(duì)早期治療、改善預(yù)后有重要意義。

靜止型α-地貧包括缺失型、非缺失型(又稱(chēng)突變型)，常見(jiàn)缺失型有-α3.7、-α4.2，主要為α1或α2珠蛋白基因片段缺失；常見(jiàn)非缺失型突變有αCS、αQS、αWS[12]。本研究顯示，新生兒期靜止型α-地貧中的缺失型(除αWS外)患兒Hb Bart′s水平比突變型低，位于α1珠蛋白基因右側(cè)的缺失型(-α3.7)患兒的Hb Bart′s水平低于位于α2珠蛋白基因左側(cè)缺失型(-α4.2)患兒的Hb Bart′s水平。這說(shuō)明Hb Bart′s水平與α珠蛋白基因缺失突變類(lèi)型有關(guān)。本研究顯示，缺失型(除αWS外)Hb Bart′s水平中位數(shù)低于突變型α-地貧。干血斑毛細(xì)管電泳結(jié)果顯示，新生兒期靜止型α-地貧中-α3.7α/αα、-α4.2α/αα、αCSα/αα、αQSα/αα型的檢出率分別為38.71%、44.00%、95.45%、80.00%，較為理想；但αWSα/αα型的檢出率為0，導(dǎo)致新生兒期靜止型α-地貧總體檢出率較低(58.24%)。這與αWS未造成嚴(yán)重的珠蛋白鏈不平衡有關(guān)，臨床還需采用基因檢測(cè)的方法進(jìn)行確診。

綜上所述，足跟血干血斑毛細(xì)管電泳技術(shù)用于新生兒α-地貧篩查有一定價(jià)值，有助于臨床區(qū)分缺失與突變的靜止型α-地貧；但對(duì)于αWSα/αα型α-地貧難以有效檢出。