姚曉賓，周麗莉，許青霞，盛家和

鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州 450008

羅氏標(biāo)本前處理系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)標(biāo)本自動(dòng)離心、分揀和進(jìn)樣[1]，代替人工操作，使標(biāo)本預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)化、數(shù)字化、可追溯[2]。影響標(biāo)本離心效率和效果的主要因素有離心力、離心時(shí)間和溫度，需要根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目特點(diǎn)設(shè)置離心參數(shù)。電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)標(biāo)本的前處理過程中，是選擇低溫離心還是常溫離心，低離心力長(zhǎng)時(shí)間離心還是高離心力短時(shí)間離心，對(duì)這些參數(shù)的設(shè)置報(bào)道較少。本研究比較了不同離心參數(shù)條件下離心效率和效果的差異，旨在找出最適離心參數(shù)，并評(píng)估最適離心參數(shù)是否影響檢測(cè)結(jié)果。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本前處理系統(tǒng)和檢測(cè)儀器組成 羅氏標(biāo)本前處理系統(tǒng)由cobas p612自動(dòng)進(jìn)樣模塊和cobas p671標(biāo)本離心模塊組成。cobas p671模塊配置了兩臺(tái)離心機(jī)，每臺(tái)離心機(jī)1次可裝載60份標(biāo)本；離心倉(cāng)溫度最低10 ℃，最高25 ℃，離心機(jī)轉(zhuǎn)速最高4 500 r/min，對(duì)應(yīng)離心力4 100×g；根據(jù)離心力和離心轉(zhuǎn)速換算公式[3]，計(jì)算出離心機(jī)離心半徑為18.09 cm。cobas p612模塊可以對(duì)離心后的標(biāo)本拍照，與圖庫(kù)比對(duì)并給出血清指數(shù)，但是無法判斷血清中是否存在凝塊或纖維絲[4]。檢測(cè)單元由4臺(tái)羅氏E602全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀串聯(lián)組成，檢測(cè)項(xiàng)目包括腫瘤標(biāo)志物、甲狀腺功能指標(biāo)、性激素和傳染病相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)等。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集和準(zhǔn)備工作 血液標(biāo)本采集使用促凝管(13 mm×75 mm,三力醫(yī)用科技發(fā)展有限公司)，塑料材質(zhì)，采血量約3 mL。門診采集血液標(biāo)本后，于室溫放置至少15 min再進(jìn)入標(biāo)本前處理流程，住院患者標(biāo)本檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間小于120 min[5]。離心機(jī)每周保養(yǎng)1次，采用75%乙醇噴灑對(duì)離心倉(cāng)進(jìn)行消毒，離心轉(zhuǎn)子涂抹專用潤(rùn)滑油。每天檢測(cè)完標(biāo)本后執(zhí)行日常保養(yǎng)，并用純水和紗布清潔標(biāo)本吸樣針[6]。試驗(yàn)前工程師對(duì)加樣針電壓、報(bào)警閾值進(jìn)行檢測(cè)并排除故障。

1.2.2分析離心溫度對(duì)離心效果的影響 離心力1 822×g、離心時(shí)間5 min條件下，設(shè)置離心溫度分別為10 ℃、15 ℃、20 ℃和25 ℃，每個(gè)溫度運(yùn)行5 d，匯總數(shù)據(jù)并計(jì)算標(biāo)本凝集率。

1.3分析離心力和時(shí)間對(duì)離心效果的影響 在20 ℃離心溫度條件下，設(shè)置離心時(shí)間5 min，離心力1 822×g、2 480×g、3 239×g、4 100×g，各運(yùn)行5 d，匯總數(shù)據(jù)并計(jì)算標(biāo)本凝集率；然后將離心時(shí)間調(diào)整為10 min，以上述不同離心力各運(yùn)行5 d，匯總數(shù)據(jù)并計(jì)算標(biāo)本凝集率。

1.4評(píng)估離心參數(shù)調(diào)整對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響 選取檢測(cè)量大的項(xiàng)目——癌胚抗原(CEA)、對(duì)溶血敏感的項(xiàng)目——神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)[7]和可能受離心力影響項(xiàng)目——乙型肝炎表面抗原(HBsAg)[8]作為評(píng)估對(duì)象，收集生理和病理狀態(tài)下的患者血液標(biāo)本2～3 mL(分別作為水平1和水平2標(biāo)本)。在離心溫度20 ℃，離心時(shí)間5 min條件下，設(shè)置離心力為1 822×g或4 100×g，每份標(biāo)本在不同離心力下重復(fù)檢測(cè)5次。

2 結(jié) 果

2.1溫度對(duì)離心效果的影響 離心力1 822×g、離心時(shí)間5 min條件下，設(shè)置離心溫度為10 ℃時(shí)，標(biāo)本凝集率最高，為(4.70±0.44)%；設(shè)置離心溫度分別為10 ℃、15 ℃和20 ℃時(shí)的標(biāo)本凝集率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。低溫離心時(shí)，部分采血管的血清液面上側(cè)管壁掛有白色沉淀圈，隨著溫度升高，標(biāo)本凝集率逐漸降低，20 ℃時(shí)沉淀圈不再出現(xiàn)，20 ℃標(biāo)本凝集率為(3.44±0.24)%，25 ℃和20 ℃標(biāo)本凝集率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.917)，見圖1。

注：*表示離心溫度10 ℃、15 ℃和20 ℃的標(biāo)本凝集率比較，P=0.002；**表示離心溫度20 ℃和25 ℃的標(biāo)本凝集率比較，P=0.917。圖1 不同溫度條件下標(biāo)本凝集率比較

2.2離心力和時(shí)間對(duì)離心效果的影響 離心溫度固定在20 ℃，隨著離心力增加標(biāo)本凝集率不斷降低，當(dāng)離心力提高到4 100×g時(shí)，標(biāo)本凝集率最低，見圖2。離心機(jī)離心力4 100×g時(shí)，離心時(shí)間10 min標(biāo)本凝集率[(0.26±0.05)%]和5 min標(biāo)本凝集率[(0.30±0.03)%]相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.209)。離心機(jī)離心力4 100×g、時(shí)間5 min時(shí)凝集率[(0.30±0.03)%]比離心力1 822×g、時(shí)間10 min時(shí)凝集率[(2.88±0.27)%]低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，離心效率更高。

圖2 不同離心力和時(shí)間標(biāo)本凝集率的比較

2.3離心參數(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響的評(píng)估 2個(gè)水平的CEA、NSE、HBsAg檢測(cè)標(biāo)本，分別經(jīng)低離心力和高離心力前處理，檢測(cè)結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。離心力提高到4 100×g時(shí)，實(shí)驗(yàn)標(biāo)本未出現(xiàn)肉眼可見的溶血，其他檢測(cè)項(xiàng)目的標(biāo)本也未因離心力提高而溶血比例增加。

表1 2個(gè)水平的CEA、NSE、HBsAg檢測(cè)標(biāo)本不同離心力前處理的檢測(cè)結(jié)果比較

續(xù)表1 2個(gè)水平的CEA、NSE、HBsAg檢測(cè)標(biāo)本不同離心力前處理的檢測(cè)結(jié)果比較

3 討 論

羅氏標(biāo)本前處理系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)標(biāo)本自動(dòng)離心、拔帽、分揀和進(jìn)樣，代替人工重復(fù)操作，實(shí)現(xiàn)了標(biāo)本從進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室到上機(jī)檢測(cè)前的自動(dòng)準(zhǔn)備工作，避免了人工差錯(cuò)[9]。但離心模塊、離心機(jī)數(shù)量有限，參數(shù)設(shè)置相對(duì)固定，不如線下手工離心操作靈活，是影響標(biāo)本前處理效率的主要因素。手工離心后可以肉眼觀察是否有凝塊或纖維絲存在，而前處理系統(tǒng)的離心效果無法通過系統(tǒng)識(shí)別，如果血清中有凝塊或纖維絲，標(biāo)本進(jìn)入儀器后會(huì)出現(xiàn)凝集報(bào)警，需再次離心進(jìn)樣，這會(huì)影響檢測(cè)進(jìn)程。

和離心效果密切相關(guān)的參數(shù)是離心溫度、離心時(shí)間和離心力[10]。雖然低溫離心能夠保障血清待檢成分的穩(wěn)定性，但離心效果不如常溫離心，10 ℃離心時(shí)標(biāo)本凝集率最高，為(4.70±0.44)%，推測(cè)主要原因是離心過程中低溫會(huì)造成血清蛋白析出。溫度增加到20 ℃時(shí)標(biāo)本凝集率較低，25 ℃和20 ℃時(shí)相比，標(biāo)本凝集率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，因此前處理離心模塊離心溫度應(yīng)設(shè)定為20 ℃。增加離心時(shí)間能夠提升離心效果，減少血清中的凝塊或纖維絲，本研究顯示，相同條件下設(shè)置離心10 min比5 min具有更低的凝集率，但是增加離心時(shí)間必定會(huì)降低離心效率，在標(biāo)本量大、標(biāo)本堆積的情況下，增加離心時(shí)間必定會(huì)增加標(biāo)本檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間。提高離心機(jī)離心力也能夠提升離心效果，BOISSIER等[11]從凝血試驗(yàn)標(biāo)本處理的相關(guān)研究中得出結(jié)論，4 500×g離心2 min和2 200×g離心15 min的檢測(cè)結(jié)果無明顯差異，高離心力短時(shí)間離心具有更高的離心效率。這和本研究電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)項(xiàng)目的試驗(yàn)結(jié)果一致，4 100×g離心5 min比1 822×g離心10 min離心效率高，而且具有更低的標(biāo)本凝集率。

有研究報(bào)道，高離心力可能造成標(biāo)本溶血[12]。本研究中，以4 100×g離心5 min時(shí)，標(biāo)本并未出現(xiàn)肉眼可見的溶血，和低離心力離心相比，受溶血影響較大的NSE檢測(cè)結(jié)果并未因離心力增加而受到影響。HEIREMAN等[13]通過多篇文獻(xiàn)的Meta分析認(rèn)為，溶血現(xiàn)象主要發(fā)生在采血和運(yùn)輸過程中，離心造成的溶血和離心時(shí)間長(zhǎng)、反復(fù)離心相關(guān)。胡梅霞等[8]報(bào)道通過增加標(biāo)本的離心時(shí)間和提高離心力可有效減少HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的假陽(yáng)性例數(shù)，本研究顯示，增加離心力對(duì)HBsAg電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果無明顯影響，可能和試驗(yàn)的方法學(xué)原理不同有關(guān)。另外，本研究選取了檢測(cè)量最大的腫瘤標(biāo)志物CEA作為驗(yàn)證指標(biāo)，其檢測(cè)結(jié)果同樣不存在明顯差異。

信息化、自動(dòng)化技術(shù)的發(fā)展為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步提供了條件。在保證結(jié)果準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)上，醫(yī)院對(duì)標(biāo)本檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間的要求也更高了。本研究通過對(duì)前處理離心參數(shù)設(shè)置的多次測(cè)試，最終選擇了常溫條件下，高離心力短時(shí)間離心的參數(shù)設(shè)置，明顯降低了標(biāo)本凝集率，提高了離心效率。