歐陽(yáng)升，陳立峰，李少華

郴州市第一人民醫(yī)院北院兒童康復(fù)科，湖南郴州423000

孤獨(dú)癥譜系障礙（ASD）又稱為自閉癥，是兒童期較常見(jiàn)的神經(jīng)發(fā)育障礙性疾病，一般與后天的家庭教養(yǎng)無(wú)關(guān)。ASD較為典型的臨床表現(xiàn)為社交溝通障礙、興趣狹窄以及重復(fù)刻板行為，此外多數(shù)ASD患兒可共患注意缺陷多動(dòng)障礙、抑郁癥、焦慮癥、睡眠障礙、胃腸功能障礙、癲癇等。目前ASD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，生物學(xué)因素、神經(jīng)心理學(xué)因素及生態(tài)學(xué)因素是ASD 的主要理論機(jī)制，其中生物學(xué)因素被廣泛認(rèn)可［2］。在生物學(xué)因素中免疫因素是目前的研究熱點(diǎn)。既往研究發(fā)現(xiàn)，免疫功能異常不會(huì)直接導(dǎo)致ASD 的發(fā)生，而是間接通過(guò)升高兒童的遺傳易感性而增加ASD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［3］。近年來(lái)多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，免疫功能缺陷者多在胎兒期或新生兒期發(fā)生感染，炎癥因子永久損傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致ASD的發(fā)生，而趨化因子在防御和清除入侵病原體過(guò)程中同樣會(huì)誘發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，從而損傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)［4-5］。本研究觀察了ASD患兒血清多個(gè)炎癥因子與趨化因子的水平變化，并分析其與ASD 病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性及對(duì)ASD的早期診斷價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇 2019 年 6 月—2020 年 9 月于我院確診的ASD 患兒102 例作為觀察組，根據(jù)兒童期孤獨(dú)癥評(píng)定量表（CARS）分為輕中度（30～36 分）62 例、重度（＞36 分）40 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①CARS 評(píng)分≥30 分；②符合美國(guó)精神病學(xué)會(huì)制定《美國(guó)精神障礙診斷手冊(cè)（5 版）》中的ASD 診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］；③經(jīng)過(guò)3 名以上高級(jí)職稱醫(yī)師診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他精神類疾病或認(rèn)知障礙者；器質(zhì)性疾病引起精神行為異常者；合并其他診斷不明疾病者。按可比原則采用成組比較法，選擇同期體檢健康兒童120 例作為對(duì)照組。觀察組男80 例，女22 例，年齡（5.49 ± 1.57）歲，喂養(yǎng)方式：母乳喂養(yǎng)34 例、人工喂養(yǎng)41 例、混合喂養(yǎng) 27 例；對(duì)照組男 86 例、女 34 例，年齡（5.48 ±1.55）歲，喂養(yǎng)方式：母乳喂養(yǎng)65例、人工喂養(yǎng)35例、混合喂養(yǎng)20 例。觀察組母親孕期抑郁/焦慮、孕期睡眠差、孕期感染及孕期主動(dòng)/被動(dòng)吸煙的比例均高于對(duì)照組（P均＜0.05），兩組性別比、年齡及喂養(yǎng)方式比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05）。兩組母親孕期相關(guān)資料比較見(jiàn)表1。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核，受試者監(jiān)護(hù)人均簽署知情同意書(shū)。

表1 兩組母親孕期相關(guān)資料比較［例（%）］

1.2 血清炎癥因子和趨化因子水平檢測(cè) 三組入組后第2 天采集空腹靜脈血，采用ELISA 法檢測(cè)血清炎癥因子和趨化因子，炎癥因子包括白細(xì)胞介素5（IL-5）、白細(xì)胞介素8（IL-8）、巨噬細(xì)胞炎性蛋白α（MIP-α）；趨化因子包括 C-C 類趨化因子 5（RANTES）、C-X-XC類趨化因子9（MIG）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法。ASD 患兒CARS 評(píng)分及血清 IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES、MIG 之間的關(guān)系采用Spearman 相關(guān)分析法。影響ASD 發(fā)生的危險(xiǎn)因素采用多因素Logistic 回歸分析法，繪制五項(xiàng)血清指標(biāo)單獨(dú)及聯(lián)合診斷ASD 發(fā)生的受試者工作特征曲線（ROC 曲線），分析診斷效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清 IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES 及 MIG水平比較 見(jiàn)表2。

表2 兩組血清IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES及MIG水平比較（pg/mL，）

表2 兩組血清IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES及MIG水平比較（pg/mL，）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與輕中度患者比較，#P＜0.05。

組別觀察組輕中度重度對(duì)照組MIG 6 781.93±423.34*6 561.13±340.53*7 124.17±440.45*#5 041.17±342.42 n 102 62 40 120 IL-5 342.89±40.45*319.82±32.11*378.65±41.65*#269.89±32.76 IL-8 8.24±1.54*7.39±1.62*9.55±1.37*#5.85±1.12 MIP-α 192.73±23.43*235.87±24.56*125.86±23.76*#321.23±43.34 RANTES 3 388.60±356.37*3 561.13±451.53*3 121.17±330.32*#3 993.17±411.45

2.2 ASD 患兒CARS 評(píng)分及血清IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES、MIG之間的相關(guān)性 見(jiàn)表3。

表 3 ASD 患兒 CARS 評(píng)分及血清IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES、MIG的相關(guān)性（r值）

2.3 血清 IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES、MIG 對(duì)兒童發(fā)生ASD的影響 見(jiàn)表4。

表4 兒童發(fā)生ASD的多因素Logistic回歸分析結(jié)果

2.4 血清 IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES、MIG 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)兒童ASD 的診斷價(jià)值 見(jiàn)表5 和OSID碼圖1。

表5 五項(xiàng)血清指標(biāo)單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)兒童ASD的診斷價(jià)值

3 討論

目前全球 ASD 發(fā)病率約為 1.0%［7］，我國(guó)目前尚無(wú)全國(guó)性的流行病學(xué)數(shù)據(jù)，但有地域性研究報(bào)道ASD 發(fā)病率為 2.55‰［8］。雖然我國(guó) ASD 發(fā)病率較低，但有研究對(duì)2000～2016年多個(gè)ASD 流行病學(xué)研究分析發(fā)現(xiàn)，ASD 發(fā)病率是呈逐年上升趨勢(shì)的［9-10］。由于ASD 存在社交、言語(yǔ)等方面的障礙，因此患兒的成長(zhǎng)、健康、教育已成為涉及家庭、學(xué)校及社會(huì)的公共衛(wèi)生問(wèn)題。為及早診斷ASD，尋找客觀的標(biāo)志物是目前研究熱點(diǎn)之一。

本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組孕期抑郁/焦慮、孕期睡眠差、孕期感染及孕期主動(dòng)/被動(dòng)吸煙比例均高于對(duì)照組，且多因素分析顯示孕期抑郁/焦慮，孕期感染史是兒童ASD 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；提示孕產(chǎn)婦孕期因素、免疫因素均參與了ASD 的發(fā)生。分析原因，可能是孕期抑郁/焦慮會(huì)增加孕期母體促腎上腺皮質(zhì)素釋放及腎上腺素分泌，不僅可以直接收縮胎盤(pán)血管影響供血，導(dǎo)致胎兒大腦對(duì)缺氧更為敏感，而且可通過(guò)胎盤(pán)造成胎兒激素分泌異常。本研究未發(fā)現(xiàn)孕期主動(dòng)或被動(dòng)吸煙是ASD 發(fā)生的危險(xiǎn)因素，可能與本研究納入的吸煙孕婦樣本量少或本地區(qū)女性吸煙量少有關(guān)。王晨冉等［11］的Meta 分析亦建議開(kāi)展高質(zhì)量的大樣本的前瞻性研究進(jìn)行孕婦吸煙與ASD的相關(guān)性研究。

近年來(lái)，免疫學(xué)機(jī)制在ASD 發(fā)生、發(fā)展中的作用越來(lái)越得到認(rèn)可。本研究結(jié)果顯示，觀察組重度、輕中度患者及對(duì)照組血清IL-5、IL-8 及MIG 水平均依次降低，血清MIP-α、RANTES 水平均依次升高，提示上述炎癥因子及趨化因子不僅參與了ASD 的發(fā)生，且與患兒的疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)；本研究結(jié)果顯示，血清 IL-5、IL-8、MIG 水平升高及 MIP-α、RANTES 水平降低均是兒童ASD 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。肖鴿飛等［12］分析ASD 與炎癥因子相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，ASD組血清IL-5、MIG 水平均高于健康對(duì)照組，MIP-α、RANTES 水平均低于健康對(duì)照組。王天道等［13］同樣發(fā)現(xiàn)，ASD 患兒血清IL-8 明顯高于健康兒童。與本研究結(jié)果一致。本研究ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清 IL-5、IL-8、MIP-α、RANTES 及 MIG 單獨(dú)診斷 ASD有一定價(jià)值（AUC 均＞0.7），但五項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷ASD 的AUC 為0.860，提示有較高的診斷價(jià)值，因此建議多個(gè)指標(biāo)聯(lián)合診斷。

研究顯示，新生兒期炎癥反應(yīng)可通過(guò)損傷小膠質(zhì)細(xì)胞而影響海馬的依賴性行為［14-15］。IL-5、IL-8 是機(jī)體炎癥細(xì)胞因子，過(guò)高水平可以加重炎癥刺激，增加損傷程度及功能障礙［16-17］。RANTES 作為趨化因子可以反映機(jī)體對(duì)入侵病原體的清除及防御能力，因此水平越低表明機(jī)體防御能力越低，組織炎癥損傷越重［18-19］。本研究Spearman 相關(guān)分析結(jié)果顯示，CARS 評(píng)分與 IL-5、IL-8 呈正相關(guān)關(guān)系，與 RANTES呈負(fù)相關(guān)關(guān)系；MIP-α、MIG 分別與IL-5、IL-8、RANTES 呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，但與CARS 評(píng)分并不相關(guān)，可能MIP-α、MIG 在 CARS 評(píng)分與 IL-5、IL-8、RANTES 相關(guān)性過(guò)程中發(fā)揮中介作用。

綜上所述，ASD 患兒血清 IL-5、IL-8、MIG 水平升高，MIP-α、RANTES 水平降低，其中IL-5、IL-8、RANTES改變與患兒病情相關(guān)，上述指標(biāo)是ASD發(fā)生的危險(xiǎn)因素，同時(shí)對(duì)ASD的早期診斷有重要意義。但本研究為回顧性研究，且樣本量較小，因此研究結(jié)果可能存在偏倚，臨床上可通過(guò)聯(lián)合患兒的行為癥狀進(jìn)行篩查。