王遙，高穎，陳海若，井海亮，李卓虹

成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤科，成都 610072

放射性腸炎繼發(fā)于小腸和(或)大腸輻射損傷，常見于胃腸道腫瘤、婦科腫瘤和泌尿系惡性腫瘤的放射治療(簡稱放療)中，以腹痛、腸出血、腸梗阻、腸穿孔、瘺管、吸收不良、直腸疼痛、繼發(fā)于潰瘍的直腸出血為主要臨床表現(xiàn)[1]，最常見的癥狀為伴或不伴有疼痛的腹瀉。據(jù)報(bào)道，90%接受盆腔放療的患者排便習(xí)慣會(huì)發(fā)生永久性改變[2]，多達(dá)3/4的患者在接受盆腔放療時(shí)會(huì)發(fā)生急性不良反應(yīng)，常發(fā)生于放療過程中或90 d內(nèi)[3]，而5%～55%的患者會(huì)發(fā)生慢性放射性腸炎。放療相關(guān)毒性的防治和管理已成為臨床亟待解決的難題。目前，放射性腸炎的治療措施包括藥物治療、內(nèi)鏡治療、高壓氧治療、手術(shù)治療等，但缺乏臨床研究數(shù)據(jù)證實(shí)其確切的療效，且在預(yù)防放射性腸炎和治療慢性癥狀方面效果不明顯。因此，探索新的治療藥物和方式具有重要意義[3]。

黃連為毛莫科植物，其根莖為中藥要藥，性寒、味苦，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效。黃連的作用主要與根莖內(nèi)含有的生物堿有關(guān)。小檗堿(Berberine)是從中草藥黃連等小檗屬植物中分離出的一種異喹啉生物堿，是黃連活性成分中最有價(jià)值的單體[4]，具有多種藥理作用，如抑制細(xì)菌和毒素[5]、抑制腸道分泌和蠕動(dòng)、保護(hù)腸上皮屏障等，是治療炎癥性腸病的候選藥物[6-7]，但有關(guān)其治療放射性腸炎的研究較少。有研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿能夠提高放化療的療效；臨床研究發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方中應(yīng)用黃連能明顯減輕腹瀉、便血、里急后重等癥狀。本研究旨在探討小檗堿對大鼠急性放射性腸炎的療效及可能機(jī)制，以期為放射性腸炎的治療提供新的選擇，也為小檗堿治療放射性腸炎的機(jī)制研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器 HE染液套裝(G1005)、Masson染液套裝(G1006)購自武漢谷歌生物科技有限公司；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD，E-BC-K020-M)、丙二醛(malondialdehyde，MDA，E-BC-K025-M)購自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6，EK206/3-96)、IL-1β(EK201B/3-96)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α，70-EK282/3-96)酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒購自杭州聯(lián)科生物技術(shù)有限公司；脂多糖(lipopolysaccharide，LPS，ml02242)ELISA試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；RNA提取液(Trizol，15596018)購自美國Invitrogen公司；人尿糞隱血測試盒(C027-1-1)購自南京建成生物工程研究所；小檗堿(2021003125)購自成都瑞芬思生物科技有限公司；地塞米松(LOT20235135)購自北京索萊寶科技有限公司；RPMI Medium 1640 basic(C11875500BT)購自美國Gibco公司；青鏈霉素雙抗溶液(SV30010)購自美國Hyclone公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(BL699A)購自合肥志宏生物技術(shù)有限公司；SYBR Green qPCR Mix試劑盒(BL698A)購自合肥志宏生物技術(shù)有限公司。臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(Neofuge 15R)購自香港力康生物醫(yī)療科技控股有限公司；超聲細(xì)胞粉碎機(jī)(JY92-Iin)購自寧波新芝生物科技有限公司；渦旋混合器(MX-F)購自美國賽洛杰克公司；全自動(dòng)研磨儀(KH-Ⅲ)、勻漿儀(KZ-Ⅱ)購自武漢賽維爾生物科技有限公司；酶標(biāo)檢測儀(Epoch)購自美國BioTek公司；臺(tái)式高速冷凍型微型離心機(jī)(D3024R)購自美國SCILOGEX公司；全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)(SLAN-96S)購自上海宏石醫(yī)療科技有限公司；K2800核酸分析儀(K2800)購自北京凱奧科技發(fā)展有限公司；標(biāo)準(zhǔn)試劑型純水儀(FBZ2001-up-p)購自青島富勒姆科技有限公司；正置光學(xué)顯微鏡(Nikon Eclipse E100)購自日本尼康公司。

1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康成年SPF級雄性SD大鼠32只，體重200～220 g，由成都達(dá)碩科技生物有限公司提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(川)2020-199]。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組、模型組、小檗堿組和地塞米松組，每組8只，隨機(jī)編號(hào)稱重。實(shí)驗(yàn)過程符合國家和單位有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理和使用規(guī)定。

1.2.2 急性放射性腸炎大鼠模型制備 各組大鼠照射前禁食12 h，使用10%水合氯醛腹腔麻醉，仰臥位固定，空白對照組給予偽照射，余各組給予全腹部(從劍突至恥骨聯(lián)合)單次照射，其他部位用鉛板屏蔽，源波距50 cm，皮下距點(diǎn)1.5 cm，照射時(shí)間3 min，總照射劑量12 Gy，所有電離輻射照射均在成都友誼醫(yī)院放射醫(yī)學(xué)研究所進(jìn)行。照射后大鼠出現(xiàn)攝食、飲水量減少，體重下降，精神萎靡，蜷縮少動(dòng)、稀便及血便，表明造模成功。地塞米松組給予地塞米松0.12 mg/(kg.d)灌胃，小檗堿組給予小檗堿50 mg/(kg.d)灌胃，空白對照組與模型組大鼠給予相同體積生理鹽水灌胃。各組于照射后3 h開始行胃管灌胃，1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后12 h腹主動(dòng)脈取血保存血清，處死大鼠，取腸組織保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 大鼠排便情況及體重測量 觀察并記錄給藥期間各組大鼠的體重及排便情況，分別在實(shí)驗(yàn)第0、3、7天稱取體重，運(yùn)用人尿糞隱血試劑盒檢測大便隱血情況，并按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分。陰性：3 min不顯藍(lán)綠色，評分為0分；弱陽性：30～60 s顯藍(lán)色，評分為1分；陽性：立即顯藍(lán)綠色，評分為2分；強(qiáng)陽性：肉眼可觀察到血便，立即顯深藍(lán)色，評分為3分。

1.2.4 HE染色觀察腸組織病理學(xué)變化 取2 cm結(jié)腸或直腸組織，用10%多聚甲醛溶液固定，4 ℃預(yù)冷的生理鹽水洗凈血液，石蠟包埋、切片，行HE染色，使用CaseViewer 2.2在不同倍數(shù)下觀察腸組織病理變化，計(jì)數(shù)每個(gè)腸道截面的隱窩數(shù)量。

1.2.5 Masson染色觀察腸組織膠原纖維沉積情況

將腸組織切片脫蠟，重鉻酸鉀染色水洗，鐵蘇木精染色水洗，磷鉬酸浸染后直接入苯胺藍(lán)染液染色，切片用1%冰醋酸分化，無水乙醇脫水后透明封片，使用顯微鏡鏡檢，采集圖像分析。

1.2.6 ELISA檢測腸組織LPS、TNF-α、IL-6、IL-1β含量 取腸組織，用9倍勻漿介質(zhì)研磨，將研磨液以3000～4000 r/min離心10 min，離心半徑為6 cm，取上清制備成10%組織勻漿，采用ELISA試劑盒檢測LPS、TNF-α、IL-6、IL-1β含量，按照試劑盒說明書步驟操作。

1.2.7 腸組織SOD活性、MDA含量檢測 取腸組織，用高速分散器勻漿，制備成10%組織勻漿，采用SOD、MDA試劑盒測定SOD活性(WST-1法)、MDA含量(TBA法)，按照試劑盒說明書步驟操作。

1.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

1.3.1 含藥血清制備 將各組大鼠腹主動(dòng)脈血清樣本靜置4 h，低溫離心(4 ℃，3000 r/min，離心半徑6 cm)，取血清，56 ℃水浴30 min滅活補(bǔ)體，0.22 μm濾膜過濾后密封分裝，–20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)及處理 IEC-6細(xì)胞來源于ATCC CRL-1592，由上海酶研生物科技有限公司提供。將復(fù)蘇的IEC-6細(xì)胞用含90% RPMI Medium 1640 basic、10% FBS、1%青鏈霉素雙抗溶液的培養(yǎng)基于37 ℃、5% CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞密度達(dá)到80%時(shí)進(jìn)行傳代，取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞進(jìn)行等量載體孵育后分為空白對照組、模型組、小檗堿組、地塞米松組。空白對照組僅接受偽照射；余各組接受12 Gy60Co γ射線照射3 min。各組細(xì)胞分別按照含藥血清:培養(yǎng)基為1:10的比例加入對應(yīng)的含藥血清，并于24、48 h測量細(xì)胞色素C Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表達(dá)水平。

1.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative Real-time PCR，qPCR)檢測各組細(xì)胞色素C、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表達(dá)水平 參照RNA提取試劑盒說明書提取各組RNA，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒分別將2 μg總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。利用SYBR Green qPCR Mix試劑盒檢測細(xì)胞色素C、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表達(dá)水平，按照試劑盒說明書步驟操作。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，引物序列如表1所示。

表1 qPCR引物序列Tab.1 Primer sequence for qPCR

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用GraphPad Prism軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定量數(shù)據(jù)以表示，多組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠排便及體重變化情況 空白對照組大鼠大便正常，大便含血得分為0分。造模各組大鼠均出現(xiàn)不同程度的稀便或血便，模型組大鼠血便最嚴(yán)重，造模后即出現(xiàn)黏液便、稀爛血便，人尿糞隱血試劑盒檢測顯示大便含血得分為(1.88±0.30)分；地塞米松組血便較輕，人尿糞隱血試劑盒檢測顯示大便含血得分為(1.00±0.27)分；小檗堿組血便最輕，人尿糞隱血試劑盒檢測顯示大便含血得分為(0.75±0.25)分。各組大鼠第0天體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。模型組大鼠第3、7天出現(xiàn)體重下降(P<0.05)；地塞米松組第7天體重較模型組明顯下降(P<0.05)；小檗堿組第3、7天體重高于地塞米松組和模型組(P<0.05)(表2)。

表2 各組大鼠體重變化情況(g，±s，n=8)Tab.2 Changes in body weight of rats in each group (g, ±s,n=8)

表2 各組大鼠體重變化情況(g，±s，n=8)Tab.2 Changes in body weight of rats in each group (g, ±s,n=8)

組別 第0天 第3天 第7天空白對照組 18.09±0.96 18.91±0.19 20.24±0.19模型組 18.10±0.13 16.97±0.11(1) 17.23±0.17(1)地塞米松組 17.88±0.12 17.20±0.22(1) 16.10±0.24(1)(2)小檗堿組 18.03±0.22 18.72±0.63(2)(3) 19.14±0.72(2)(3)

2.2 各組大鼠腸組織病理學(xué)變化 HE染色結(jié)果顯示，空白對照組大鼠腸道黏膜完整，各層結(jié)構(gòu)清晰，未見充血水腫；模型組出現(xiàn)不同程度的腸道結(jié)構(gòu)破壞，可見黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落、隱窩受損、糜爛形成；地塞米松組腸腔內(nèi)見脫落細(xì)胞團(tuán)塊；小檗堿組見輕微黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落，未見明顯病理損傷改變(圖1)。

圖1 各組大鼠腸組織病理學(xué)變化(HE ×100)Fig.1 Histopathological changes of rats' intestinal tissues in each group (HE ×100)

2.3 各組大鼠腸組織膠原纖維變化 Masson染色

與空白對照組比較，(1)P<0.05；與模型組比較，(2)P<0.05；與地塞米松組比較，(3)P<0.05。結(jié)果顯示，空白對照組大鼠腸組織正常，無明顯膠原增生；模型組大鼠腸組織黏膜下層出現(xiàn)膠原纖維增生；與模型組比較，地塞米松組和小檗堿組膠原纖維增生明顯減少，且小檗堿組膠原纖維增生明顯少于地塞米松組(圖2)。

圖2 各組大鼠腸組織膠原纖維變化(Masson ×100)Fig.2 Changes of collagen fibers in intestinal tissues of rats in each group (Masson ×100)

2.4 各組大鼠腸道隱窩數(shù)量比較 與空白對照組[(183.67±2.6)個(gè)]比較，模型組[(115.67±1.45)個(gè)]、地塞米松組[(148.33±3.76)個(gè)]、小檗堿組[(173.67±2.33)個(gè)]腸道隱窩數(shù)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，地塞米松組、小檗堿組腸道隱窩數(shù)量明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與地塞米松組比較，小檗堿組腸道隱窩數(shù)量明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.5 各組大鼠腸組織炎性因子水平、SOD活性、MDA含量比較 ELISA檢測結(jié)果顯示，與空白對照組比較，模型組大鼠腸組織IL-6、TNF-α、IL-1β、LPS水平明顯升高(P<0.05)，地塞米松組大鼠腸組織IL-6水平升高(P<0.05)；與模型組比較，小檗堿組大鼠腸組織IL-6、TNF-α、IL-1β、LPS水平明顯降低(P<0.05)，地塞米松組大鼠腸組織IL-6水平升高、IL-1β水平降低(P<0.05)；與地塞米松組比較，小檗堿組大鼠腸組織IL-6水平明顯降低(P<0.05)(表3)。

與空白對照組比較，模型組大鼠腸組織MDA含量升高、SOD活性降低(P<0.05)；與模型組比較，小檗堿組和地塞米松組MDA含量降低、SOD活性升高(P<0.05)；與地塞米松組比較，小檗堿組MDA含量降低(P<0.05)(表3)。

表3 各組大鼠腸組織炎性因子水平、SOD活性及MDA含量比較(±s，n=8)Tab.3 Comparison of inflammatory factor level, SOD activity and MDA content in intestinal tissues of rats in each group (±s,n=8)

表3 各組大鼠腸組織炎性因子水平、SOD活性及MDA含量比較(±s，n=8)Tab.3 Comparison of inflammatory factor level, SOD activity and MDA content in intestinal tissues of rats in each group (±s,n=8)

IL-6. 白細(xì)胞介素-6；IL-1β. 白細(xì)胞介素-1β；TNF-α. 腫瘤壞死因子-α；LPS. 脂多糖；SOD. 超氧化物歧化酶；MDA. 丙二醛；與空白對照組比較，(1)P<0.05；與模型組比較，(2)P<0.05；與地塞米松組比較，(3)P<0.05。

組別 IL-6(pg/ml) IL-1β(pg/ml) TNF-α(pg/ml) LPS(ng/ml) SOD(U/ml) MDA(μmol/L)空白對照組 28.26±1.82 496.33±23.13 418.72±2.42 14.35±0.19 22.74±0.18 6.02±1.96模型組 42.23±2.89(1) 766.66±41.89(1) 925.10±88(1) 42.75±3.75(1) 21.62±0.76(1) 12.54±1.19(1)地塞米松組 102.66±10.05(1)(2) 552.00±6.35(2) 786.31±138.78 35.74±7.16 22.54±0.22(2) 11.09±0.92(2)小檗堿組 28.27±4.59(2)(3) 529.66±6.64(2) 470.71±13.19(2) 21.15±2.52(2) 22.55±0.06(2) 9.15±0.003(2)(3)

2.6 各組IEC-6細(xì)胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、細(xì)胞色素C mRNA表達(dá)水平比較 qPCR檢測結(jié)果顯示，含藥血清處理24 h和48 h后，模型組Bax、caspase-3和細(xì)胞色素C mRNA表達(dá)水平高于空白對照組，Bcl-2 mRNA表達(dá)水平低于空白對照組(P<0.05)；小檗堿組、地塞米松組Bax、caspase-3和細(xì)胞色素C mRNA表達(dá)水平低于模型組，Bcl-2 mRNA表達(dá)水平高于模型組(P<0.05)；小檗堿組與地塞米松組Bax、Bcl-2、caspase-3、細(xì)胞色素C mRNA表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表4)。

表4 各組IEC-6細(xì)胞Bax、Bcl-2、caspase 3、細(xì)胞色素C mRNA表達(dá)水平比較(±s，n=8)Tab.4 Comparison of the expression levels of Bax, Bcl-2, caspase 3, cytochrome C mRNA in IEC-6 cells in each group (±s, n=8)

表4 各組IEC-6細(xì)胞Bax、Bcl-2、caspase 3、細(xì)胞色素C mRNA表達(dá)水平比較(±s，n=8)Tab.4 Comparison of the expression levels of Bax, Bcl-2, caspase 3, cytochrome C mRNA in IEC-6 cells in each group (±s, n=8)

與空白對照組比較，(1)P<0.05；與模型組比較，(2)P<0.05。

組別 Bax Bcl-2 Caspase-3 細(xì)胞色素C 24h 48h 24h 48h 24h 48h 24h 48h空白對照組 0.99±0.06 1.17±0.13 0.89±0.07 1.00±0.00 0.93±0.04 1.11±0.07 0.89±0.07 1.01±0.01模型組 70.17±2.39(1) 92.10±3.41(1) 0.15±0.01(1) 0.11±0.01(1) 64.37±19.78(1) 65.84±22.41(1) 64.09±29.49(1) 63.68±28.65(1)地塞米松組 4.51±0.11(2) 7.45±0.23(2) 0.73±0.01(2) 0.82±0.04(2) 3.96±0.12(2) 8.14±0.30(2) 2.43±0.13(2) 3.07±0.22(2)小檗堿組 10.13±3.83(2) 9.90±0.48(2) 0.59±0.13(2) 0.46±0.01(2) 12.14±0.52(2) 19.35±0.50(2) 3.18±0.27(2) 4.36±1.21(2)

3 討 論

從天然產(chǎn)物中尋找毒副作用小、安全有效的藥物治療放射性腸炎是值得研究的方向。中藥黃連在腸炎的治療中應(yīng)用頗多且療效確切，小檗堿為黃連主要生物堿，在抗炎、抗菌及抗腫瘤方面藥效明確。本研究證實(shí)了小檗堿能夠有效治療大鼠急性放射性腸炎，為急性放射性腸炎的藥物研究提供了新的方向。

放射性腸炎是盆腔、腹腔或腹膜后惡性腫瘤放療后的主要并發(fā)癥[8]，為非特異性炎癥，主要表現(xiàn)為腹痛、膿液膿血便、腹瀉等，病變累及小腸、結(jié)腸、直腸黏膜及黏膜下層[9]。在放射性腸炎急性期，緊密連接表達(dá)降低導(dǎo)致黏膜破壞和上皮細(xì)胞死亡，從而引起炎癥[10]。單核細(xì)胞的額外募集和常駐肥大細(xì)胞的激活可刺激促炎和促纖維化介質(zhì)IL-1β、IL-6、TNF-α的產(chǎn)生[11]。本研究通過電離輻射一次性照射大鼠腹部12 Gy模擬急性放射性腸炎，結(jié)果顯示，模型組大鼠出現(xiàn)體重嚴(yán)重下降和稀爛血便，大便含血強(qiáng)陽性，腸組織可見黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落、隱窩受損，隱窩數(shù)量明顯減少，炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平明顯升高，提示電離輻射導(dǎo)致的炎性損傷與上皮細(xì)胞死亡有關(guān)，急性放射性腸炎大鼠模型構(gòu)建成功。本研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小檗堿組大鼠體重在第3、7天均明顯高于模型組和地塞米松組，血便情況優(yōu)于地塞米松組；與模型組比較，小檗堿組大鼠腸組織未見明顯的腸道結(jié)構(gòu)破壞，膠原纖維增生明顯減少，隱窩數(shù)量明顯增多，但與地塞米松組比較無明顯差異，表明小檗堿對大鼠急性放射性腸炎確有治療作用。

急性放射性腸損傷凋亡期主要表現(xiàn)為隱窩丟失[12-13]；在慢性期，輻射刺激誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖和膠原沉積，最終導(dǎo)致組織纖維化[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿對腸道隱窩有明顯的保護(hù)與修復(fù)作用，且對急性放射性腸炎早期出現(xiàn)的膠原纖維增生有抑制作用。放射線輻射可引起大量氧自由基堆積，氧自由基通過直接攻擊作用或氧化作用造成DNA及蛋白質(zhì)等生物大分子損傷，從而引起細(xì)胞凋亡，進(jìn)而引起腸道機(jī)械屏障、免疫屏障、化學(xué)屏障、生物屏障等功能異常，以及菌群失調(diào)與炎性因子釋放等，最終造成腸組織損傷[15]。本研究選擇MDA、SOD作為氧化應(yīng)激的代表性指標(biāo)，其中SOD活性可直接反映機(jī)體清除氧自由基、抗脂質(zhì)過氧化損傷的能力，MDA可間接反映組織中氧自由基的生成量，也可反映組織生物膜脂質(zhì)過氧化的程度和組織膜結(jié)構(gòu)受損的程度[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，放射性腸炎大鼠模型中MDA含量升高，SOD活性降低，而在使用小檗堿與地塞米松后以上指標(biāo)均有改善，且小檗堿降低MDA含量的效果優(yōu)于地塞米松，表明小檗堿具有減輕大鼠放射性腸炎過度氧化應(yīng)激損傷的作用。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿能夠明顯降低急性放射性腸炎大鼠腸組織中LPS的含量。LPS是革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜的重要組成成分，可激活生物體內(nèi)巨噬細(xì)胞等效應(yīng)靶細(xì)胞，刺激機(jī)體產(chǎn)生TNF-α、IL-1、IL-6等多種細(xì)胞因子[17]。放射性腸炎患者常存在腸道菌群紊亂，且與腸黏膜損傷、黏膜炎癥及炎性因子釋放相互影響[18]，而小檗堿能夠降低大鼠腸組織中LPS的含量，其與小檗堿抗菌作用的關(guān)系值得深入研究。

放射性腸炎的特征是隱窩細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)上皮屏障的破壞及隨后的炎癥[14]。細(xì)胞凋亡可通過暴露于包括電離輻射在內(nèi)的外源DNA損傷劑而被誘導(dǎo)。本研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿可明顯抑制促凋亡蛋白Bax、caspase-3和細(xì)胞色素C的表達(dá)，促進(jìn)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，表明小檗堿可能通過抑制IEC-6細(xì)胞凋亡而減輕腸道炎癥反應(yīng)并保護(hù)、修復(fù)隱窩細(xì)胞。

綜上所述，小檗堿能有效減輕大鼠急性放射性腸炎的炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能與小檗堿減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)、調(diào)控凋亡蛋白的表達(dá)以抑制隱窩細(xì)胞凋亡有關(guān)。小檗堿灌胃對大鼠放射性腸炎具有修復(fù)作用，其作用與地塞米松相當(dāng)，且在抑制膠原纖維增生、抑制炎性因子分泌、減輕氧化應(yīng)激等方面優(yōu)于地塞米松，表明小檗堿對于急性放射性腸炎具有綜合治療作用，具有進(jìn)一步研究價(jià)值。但本研究尚存在一些不足之處：僅在急性放射性腸炎的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡方面進(jìn)行效應(yīng)觀察，初步探索了小檗堿治療急性放射性腸炎的機(jī)制，但缺乏對急性放射性腸炎炎性因子、氧化應(yīng)激反應(yīng)以及細(xì)胞凋亡三者之間信號(hào)通路的深入探究，后續(xù)仍需進(jìn)一步進(jìn)行更加具體、全面的機(jī)制研究。