趙 楠,賈洪濤,劉一暢,翟春梅,戴 縉
(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)中心,黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150040;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150001)
冠心病作為致死率較高的一種疾病嚴(yán)重地危害著人類的健康,冠狀動脈痙攣?zhàn)鳛楣谛牟〉念愋椭唬饕怯捎诙喾N原因所引起的冠狀動脈一過性收縮,導(dǎo)致血管狹窄或閉塞,引起心肌缺血后所產(chǎn)生一系列臨床相應(yīng)的癥狀[1]。血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)是導(dǎo)致冠狀動脈痙攣的主要因素之一。血管內(nèi)皮源性舒張因子NO與內(nèi)皮源性內(nèi)皮素前體(BigET-1)在血管中相互調(diào)節(jié)維持其內(nèi)環(huán)境平衡狀態(tài)[2]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),枳實(shí)薤白桂枝湯作為經(jīng)方在臨床應(yīng)用中對心血管疾病具有較好的療效[3-5]。前期研究證實(shí)枳實(shí)薤白桂枝湯在心肌缺血時對心臟具有一定的保護(hù)作用[6]。本實(shí)驗(yàn)在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討枳實(shí)薤白桂枝湯在冠狀動脈痙攣情況下對血管舒張因子的調(diào)控作用及相關(guān)水平的影響,為探究枳實(shí)薤白桂枝湯對心肌缺血的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
1.1 實(shí)驗(yàn)動物選取SPF級成年健康家兔50只,雌雄各半,體質(zhì)量2 500~3 000 g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,生產(chǎn)許可證號:SCXK(黑)2018-003,使用許可證號:SYXK(黑)2018-007。家兔實(shí)驗(yàn)前7 d正常飼養(yǎng)喂食,待適應(yīng)環(huán)境后,本實(shí)驗(yàn)通過BL-420F生物信號機(jī)能采集系統(tǒng)記錄肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖,剔除不合格者。本實(shí)驗(yàn)通過本校醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),無浪費(fèi)動物及虐殺動物情況。
1.2 藥物與試劑枳實(shí)薤白桂枝湯提取液由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院針灸生理實(shí)驗(yàn)室自制;氨基甲酸乙酯(上海山浦化工有限公司,批號:20180110);肝素鈉注射液(江蘇萬邦生物醫(yī)藥股份有限公司,批號:1802102);一氧化氮(NO,天津凱通化學(xué)試劑有限公司,批號:20170401);BigET-1ELISA檢測試劑盒(天津凱通化學(xué)試劑有限公司,批號:20170331)。
1.3 主要儀器BL-420F生物信號機(jī)能采集系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司);LDZ4-1.2臺式離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);超低溫冷凍儲存冰箱(中科美菱低溫科技有限公司);恒溫水浴鍋(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);SP-Max2300A2型光吸收型全波長酶標(biāo)儀(上海閃譜生物科技有限公司)。
1.4 造模與分組將家兔飼養(yǎng)1周后,通過BL-420F生物信號機(jī)能采集系統(tǒng)篩選心電圖(ECG)指標(biāo)合格家兔進(jìn)行隨機(jī)分組,50只家兔隨機(jī)分為模型組、枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組、枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組、枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組、地爾硫卓組,每組10只。通過外源性注射人內(nèi)皮素-1(ET-1)誘導(dǎo)的方法建立家兔冠狀動脈痙攣的模型。首先將預(yù)處理過的家兔稱重后固定,按照體質(zhì)量注射20%氨基甲酸乙酯5 mL/kg。家兔麻醉后進(jìn)行備皮、消毒后,迅速剪開皮膚充分暴露右側(cè)頸動脈,進(jìn)行插管結(jié)扎后備用,以便實(shí)驗(yàn)采血。將調(diào)配好的生物采集系統(tǒng)電極分別連于家兔四肢,記錄家兔Ⅱ?qū)?lián)心電圖的變化,約0.5 h穩(wěn)定后經(jīng)耳緣靜脈注入ET-1(1.4 nmol/kg),建立冠狀動脈痙攣所導(dǎo)致的心肌缺血模型。模型成功標(biāo)準(zhǔn):調(diào)試BL-420F生物信號機(jī)能采集系統(tǒng),進(jìn)行參數(shù)設(shè)定,可見造模后家兔心電圖ST段顯著抬高,T波高尖。
1.5 實(shí)驗(yàn)給藥枳實(shí)薤白桂枝湯提取液的制備根據(jù)《金匱要略》記載,用量換算枳實(shí)12 g,厚樸12 g,桂枝6 g,薤白9 g,瓜蔞12 g[7]。藥材進(jìn)行浸泡,煎煮,濾渣,水提醇沉法后過濾,恒溫水浴濃縮后離心取上清液,根據(jù)文獻(xiàn)[8]參考古代1升相當(dāng)于現(xiàn)代200 mL,所以根據(jù)換算人體服藥100 mL/次,含生藥17 g。參照實(shí)驗(yàn)動物藥量計(jì)算方法[9],家兔與人體配比的等效劑量為0.79 g/kg,可確定枳實(shí)薤白桂枝湯低、中、高劑量組家兔給藥劑量分別為0.395、0.790、1.580 g/kg。
5組家兔在造模前期給予灌胃處理,枳實(shí)薤白桂枝湯低、中、高劑量組分別給予0.395、0.790、1.580 g/kg的枳實(shí)薤白桂枝湯;地爾硫卓組家兔給予5 mg/kg的地爾硫卓懸濁液進(jìn)行適應(yīng)性預(yù)處理;模型組家兔給予等劑量生理鹽水,1次/d,連續(xù)給藥5 d。
1.6 觀察指標(biāo)
1.6.1 T波及ST段的測量 將預(yù)處理造模后家兔四肢分別與BL-420F生物采集系統(tǒng)電極片相連接,調(diào)試生物采集系統(tǒng),待系統(tǒng)曲線穩(wěn)定后記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖的變化,分別記錄注射藥物后5、10、15、30 min的T波與S-T段的變化。T波以QRS為基線標(biāo)準(zhǔn),測量其最高點(diǎn)與基線之間的垂直距離的變化。S-T段則為相鄰的兩個QRS波群起點(diǎn)的連線作為基線,以確定有無ST段移位。(見圖1)
圖1 各組在15 min時心電圖
1.6.2 血管內(nèi)皮源性舒張因子NO及BigET-1 5組家兔在造模前5 min及造模后30、120、360 min分別采血5 mL,靜置后,低溫離心后取上清液于Eppen-dorf管內(nèi),放于超低溫儲存冰箱中備用。采用ELISA法分別檢測NO及BigET-1的水平,嚴(yán)格按照試劑盒的步驟進(jìn)行操作。
1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(±s)表示,采用重復(fù)測量方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 各組家兔T波的變化模型組家兔T波在5、10、15、30 min高尖;與模型組比較,枳實(shí)薤白桂枝湯低、中、高劑量組和地爾硫卓組家兔在各時間點(diǎn)心電圖T波下降(P<0.05);與地爾硫卓組比較,枳實(shí)薤白桂枝湯低、高劑量組家兔心電圖T波抬高(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組與地爾硫卓組各時間點(diǎn)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);其中枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組和地爾硫卓組家兔在5、10、15、30 min時間點(diǎn)T波逐漸下降;結(jié)果表明枳實(shí)薤白桂枝湯能使家兔心電圖T波下降,改善心肌缺血,其中枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組與地爾硫卓組藥效最為接近。(見表1、圖2)
表1 各組家兔T波變化的比較(±s,mV)
表1 各組家兔T波變化的比較(±s,mV)
注:F時間主效應(yīng)=7.040,P時間主效應(yīng)=0.000;F分組主效應(yīng)=34.546,P分組主效應(yīng)=0.000;F交互效應(yīng)=8.372,P交互效應(yīng)=0.000;與模型組比較,aP<0.05;與地爾硫卓組比較,bP<0.05;與5 min比較,cP<0.05;與10 min,dP<0.05
組別 動物數(shù)(只)給藥劑量(g/kg) 5 min 10 min 15 min 30 min F P模型組 10 - 0.346±0.018 0.358±0.015 0.359±0.022 0.365±0.030 1.620 0.269枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組 10 0.395 0.300±0.018a b 0.318±0.016a b 0.320±0.013a b 0.314±0.014a b 3.685 0.024枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組 10 0.790 0.304±0.034a b 0.291±0.029a 0.274±0.036a c d 0.272±0.031a c d 16.671 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組 10 1.580 0.315±0.021a b 0.302±0.025a b 0.294±0.025a b c d 0.291±0.025a b c d 11.820 0.004地爾硫卓組 10 0.005 0.265±0.018a 0.257±0.017a c 0.252±0.015a c 0.240±0.019a c d 13.049 0.003 F 16.655 30.894 31.123 36.298 P 0.000 0.000 0.000 0.000
圖2 各組家兔用藥后T波各時間點(diǎn)變化趨勢圖
2.2 各組家兔S-T段的變化模型組S-T段在5、10、15、30 min明顯抬高,與模型組比較,枳實(shí)薤白桂枝湯低、中、高劑量組與地爾硫卓組各時間點(diǎn)均有改善(P<0.05);與地爾硫卓組比較,枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組各時間點(diǎn)與枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組5、15、30 min時間點(diǎn)S-T段有所抬高(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組與地爾硫卓組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。其中枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組30 min時S-T段顯著降低,枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組和地爾硫卓組各時間點(diǎn)與5 min比較,S-T段均有下降,但10 min時較為明顯,枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組各時間點(diǎn)與5 min比較,10 min時S-T段顯著下降(P<0.05)。結(jié)果表明枳實(shí)薤白桂枝湯可以使ST段下降,有效改善心肌缺血,其中枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組與地爾硫卓組藥效最為接近。(見表2、圖3)
表2 各組家兔S-T段變化的比較(±s,mV)
表2 各組家兔S-T段變化的比較(±s,mV)
注:F時間主效應(yīng)=3.199,P時間主效應(yīng)=0.033;F分組主效應(yīng)=26.631,P分組主效應(yīng)=0.000;F交互效應(yīng)=7.007,P交互效應(yīng)=0.000;與模型組比較,aP<0.05;與地爾硫卓組比較,bP<0.05;與5 min比較,cP<0.05;與10 min,dP<0.05;與15 min比較,eP<0.05
組別 動物數(shù)(只) 給藥劑量(g/kg) 5 min 10 min 15 min 30 min F P模型組 10 - 0.083±0.002 0.085±0.002c 0.087±0.002c d 0.089±0.003c d e 39.111 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組 10 0.395 0.079±0.002a b 0.080±0.002a b 0.083±0.001a b c d 0.081±0.002a b e 9.666 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組 10 0.790 0.075±0.002a 0.073±0.002a c 0.073±0.002a c 0.072±0.001a c d e 15.061 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組 10 1.580 0.081±0.003a b 0.074±0.023a c 0.081±0.004a b 0.081±0.004a b 0.389 0.765地爾硫卓組 10 0.005 0.074±0.002a 0.072±0.002a c 0.072±0.002a 0.071±0.002a c 10.041 0.006 F 37.270 2.698 66.989 78.378 P 0.000 0.042 0.000 0.000
圖3 各組家兔用藥后ST段各時間點(diǎn)變化趨勢圖
2.3 各組家兔血管內(nèi)皮源性舒張因子NO水平變化與模型組比較,枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組和地爾硫卓組注射ET-1后各時間點(diǎn)血清NO水平升高(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組注射ET-1后6 h時血清NO水平低于地爾硫卓組(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組血清NO水平與地爾硫卓組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與地爾硫卓組比較,枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組家兔注射前后各時間點(diǎn)血清NO水平均升高(P<0.05)。各組家兔注射ET-1后的0.5 h其水平以拋物線形式逐漸升高后回落,6 h時降低到原始水平。結(jié)果表明枳實(shí)薤白桂枝湯可有效地升高家兔血清NO水平,其中枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組與地爾硫卓組藥效最為接近。(見表3、圖4)
表3 各組家兔血管內(nèi)皮源性舒張因子NO水平變化的比較(±s)
表3 各組家兔血管內(nèi)皮源性舒張因子NO水平變化的比較(±s)
注:F時間主效應(yīng)=1 107.772,P時間主效應(yīng)=0.000,F(xiàn)分組主效應(yīng)=14.829,P分組主效應(yīng)=0.000;F交互效應(yīng)=13.004,P交互效應(yīng)=0.000;與模型組比較,aP<0.05;與地爾硫卓組比較,bP<0.05;與注射前比較,cP<0.05;與注射后0.5 h比較,dP<0.05;與注射后2 h比較,eP<0.05
組別 動物數(shù)(只) 給藥劑量(g/kg) 注射前 注射后0.5 h 注射后2 h 注射后6 h F P模型組 10 - 25.19±6.49 52.01±10.21c 36.16±8.94c d 26.09±7.14d e 108.456 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組10 0.395 30.1±5.27 53.42±5.6c 31.56±4.51d 22.63±3.2b c d e 285.419 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組10 0.790 24.48±5.63 63.39±9.12a c 40.04±11.15a c d 38.81±7.47a c d 1 344.033 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組10 1.580 43.03±5.37b 84.79±8.19a b 52.27±10.35a b c d 44.36±10.26a b d e 276.036 0.000地爾硫卓組 10 0.005 25.11±9.54 69.99±11.51a c 38.32±9.4c d 31.24±5.64c d e 85.114 0.000 F 12.660 23.645 7.107 15.768 P 0.000 0.000 0.000 0.000
圖4 各組家兔用藥前后NO各時間點(diǎn)變化趨勢圖
2.4 各組家兔BigET-1水平的變化與模型組比較,枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔在注射ET-1后2、6 h時BigET-1水平明顯下降,枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組和地爾硫卓組家兔在各時間點(diǎn)BigET-1水平均下降(P<0.05),其中枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組和地爾硫卓組家兔在注射0.5 h后BigET-1水平明顯下降且枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組最為明顯;枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組與地爾硫卓組比較,注射0.5 h時BigET-1水平有顯著變化;枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組與地爾硫卓相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);注射后0.5 h與注射后6 h,枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量與地爾硫卓組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組在注射ET-1后BigET-1水平有顯著變化,且0.5 h達(dá)到峰值,2 h回落到基線水平。結(jié)果表明枳實(shí)薤白桂枝湯可有效地降低家兔BigET-1水平,其中枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組與地爾硫卓組藥效最為接近。(見表4、圖5)
表4 各組家兔BigET-1水平變化的比較(±s)
表4 各組家兔BigET-1水平變化的比較(±s)
注:F時間主效應(yīng)=3315.399,P時間主效應(yīng)=0.000,F(xiàn)分組主效應(yīng)=17.187,P分組主效應(yīng)=0.000;F交互效應(yīng)=11.958,P交互效應(yīng)=0.000;與模型組比較,aP<0.05;與地爾硫卓組比較,bP<0.05;與注射前比較,cP<0.05;與注射后0.5 h比較,dP<0.05;與注射后2 h比較,eP<0.05
組別 動物數(shù)(只) 給藥劑量(g/kg) 注射前 注射后0.5 h 注射后2 h 注射后6 h F P模型組 10 - 230.64±24.83 685.06±48.39c 291.93±41.39cd 188.01±15.31cde 684.473 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組 10 0.395 196.54±38.16a 657.4±43.35bc 186.5±19.02ad 153.72±19.94acde 1 637.220 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組 10 0.790 183.52±34.41a 545.24±42.99ac 215.46±42.1acd 131.97±21.12acde 1 196.426 0.000枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組 10 1.580 178.15±24.59a 502.81±43.25abc 181.06±23.65ad 118.63±16.02abcd 1 478.367 0.000地爾硫卓組 10 0.005 187.67±23.69a 581.18±54.45ac 201.66±31.1acd 146.5±22.12acd 533.860 0.000 F 4.922 26.559 18.749 18.884 P 0.002 0.000 0.000 0.000
圖5 各組家兔用藥前后BigET-1各時間點(diǎn)變化趨勢圖
冠心病的實(shí)質(zhì)是冠狀動脈發(fā)生狹窄變化導(dǎo)致血流灌注下降引發(fā)的心肌缺血[10],每年全球因心血管疾病死亡的人數(shù)高達(dá)一千余萬人[11]。美國心臟學(xué)會指出,如果能控制心臟疾病事故的發(fā)生,人類的平均壽命將延長約7年[12]。隨著人們生活水平和社會科技水平的不斷發(fā)展和進(jìn)步,中醫(yī)藥在治療心血管疾病的廣泛應(yīng)用得到了高度重視,其具有較穩(wěn)定的藥效,療效可靠。
枳實(shí)薤白桂枝湯主要功效為通陽散結(jié)、祛痰下氣,對心胸滿痛,痛徹胸背,喘息咳唾,氣短氣逆,上攻于心胸等癥有較好的療效。相關(guān)研究報道,枳實(shí)薤白桂枝湯能有效地降低血液黏度,減少血小板的聚集,改善血管的舒張功能[13]。談曉東等[3]發(fā)現(xiàn)冠心病患者連續(xù)服用枳實(shí)薤白桂枝湯4周,其SAQ評分、SF-36評分及血瘀證積分相對4周前均有改善。枳實(shí)薤白桂枝湯在治療心血管疾病方面優(yōu)勢很大,對心肌缺血具有保護(hù)作用值得科研者探索。
冠狀動脈痙攣是導(dǎo)致心肌缺血的主要原因,冠狀動脈痙攣在體模型主要是通過活體動物進(jìn)行局部的血管損傷誘導(dǎo)建立相關(guān)模型。目前冠狀動脈痙攣的相關(guān)動物模型主要有藥物刺激法、外膜纏繞法、內(nèi)皮損傷法等。由于ET-1為血管中重要的舒縮因子,據(jù)報道在冠狀動脈痙攣的同時其可與血管內(nèi)NO成動態(tài)平衡[14],因此采用藥物刺激法外源注射ET-1誘發(fā)家兔冠狀動脈痙攣來探討相關(guān)藥物的作用機(jī)制。
心肌缺血的發(fā)生在ECG中主要是體現(xiàn)在T波、S-T段及QRS波群的改變,在急性冠脈綜合征早期,S-T段的改變是心肌損傷的重要表現(xiàn),當(dāng)心肌受到損傷時,細(xì)胞膜的極化能力發(fā)生改變,導(dǎo)致電位差發(fā)生變化,因此T波、S-T段發(fā)生相應(yīng)的改變,給冠心病提供了相應(yīng)的診斷依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)通過注射外源性藥物誘導(dǎo)的方法使家兔發(fā)生冠狀動脈痙攣,誘發(fā)心肌缺血,心電圖Ⅱ?qū)?lián)T波出現(xiàn)高尖,S-T段持續(xù)抬高。各組家兔在注射ET-1 5 min后T波升高,S-T段不斷抬高,10 min時達(dá)到峰值后逐漸下降。枳實(shí)薤白桂枝湯各劑量組與地爾硫卓組均可降低T波升高與S-T段抬高,與模型組比較,用藥后各時間點(diǎn)枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組有顯著差異,且與地爾硫卓組無顯著差異。枳實(shí)薤白桂枝湯對冠狀動脈痙攣誘發(fā)的心肌缺血具有一定的保護(hù)作用。
1978年,F(xiàn)urchgott在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在Ach的刺激下,血管內(nèi)皮細(xì)胞可釋放一種物質(zhì),此物質(zhì)可以導(dǎo)致血管舒張,他將此物質(zhì)命名為內(nèi)皮細(xì)胞舒張因子NO[15]。研究表明內(nèi)皮細(xì)胞舒張因子NO極易透過細(xì)胞膜,與肌球蛋白、血紅蛋白等具有較強(qiáng)的親和性[16]。BigET-1由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成,有較強(qiáng)的血管收縮能力,對血管可以起到調(diào)節(jié)作用。研究證明,在血管內(nèi)BigET-1與NO可以相互調(diào)節(jié),在維持血管內(nèi)環(huán)境的平衡方面具有一定的作用[17]。二者失調(diào)時,則可誘發(fā)血管痙攣。本實(shí)驗(yàn)通過觀察各組家兔血管內(nèi)皮舒張因子NO及BigET-1表達(dá),發(fā)現(xiàn)在藥物誘導(dǎo)冠狀動脈痙攣前后的各時間點(diǎn)枳實(shí)薤白桂枝湯各劑量組與地爾硫卓組對NO和BigET-1的水平均有不同程度的改善,與模型組比較均有顯著的變化,其中枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組改善效果更明顯,提示枳實(shí)薤白桂枝湯對冠狀動脈痙攣所引起的心肌缺血血管的內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境可能有改善作用。
綜上所述,枳實(shí)薤白桂枝湯可以作用于心肌細(xì)胞使NO水平升高,同時可降低BigET-1,其機(jī)制是通過血管內(nèi)皮源性舒張因子調(diào)節(jié)內(nèi)環(huán)境平衡,減少自由基的產(chǎn)生,改善血流變化,從而改善心肌功能。本實(shí)驗(yàn)為初步探討,其進(jìn)一步機(jī)制還需進(jìn)一步探究。