郁玉文，范曉芳

(江南大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 無(wú)錫 214062)

我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率增速位列全球首位，原位乳腺癌并不致命，但腫瘤細(xì)胞脫落后會(huì)隨血液循環(huán)和淋巴循環(huán)向全身轉(zhuǎn)移，危及患者生命[1]，因此，對(duì)原位乳腺癌的早期診斷與治療具有重要意義.乳腺彩超是目前乳腺癌篩查的常用手段，但對(duì)微小鈣化灶的檢查敏感性低，同時(shí)多普勒血流顯像又受到聲束、血流速等因素影響，在乳腺癌鑒別診斷中的應(yīng)用效果不夠理想.隨著近年來(lái)基因檢測(cè)和分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，為惡性腫瘤的早期診斷提供了新型標(biāo)志物[2].有研究[3]發(fā)現(xiàn)：巨大囊腫病液體蛋白-15(GCDFP-15)、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、原癌基因C-erbB-2和Her2/Neu在乳腺癌組織中均有表達(dá)，可用于乳腺癌的診斷和預(yù)后評(píng)估.本研究探討了乳腺癌組織中GCDFP-15、ER、PR、C-erbB-2、Her2/Neu表達(dá)與超聲征象的關(guān)系，旨為乳腺癌的診斷和預(yù)后評(píng)估提供參考.

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018年5月—2019年8月在江南大學(xué)附屬醫(yī)院就診的100例乳腺癌患者，患者年齡38～64歲，平均(48.22±7.40)歲；腫瘤直徑0.83～8.96 cm，平均(2.27±0.51)cm.腫瘤組織標(biāo)本采集獲得本醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批號(hào)：2018-JSLL-015).

入選標(biāo)準(zhǔn)：符合中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌專業(yè)委員會(huì)2017年頒布的《乳腺癌診治指南與規(guī)范》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；初次診斷為乳腺癌，接受手術(shù)治療，術(shù)前行乳腺彩超檢查；理解和意識(shí)狀態(tài)正常，自愿參與此次研究.

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他類型惡性腫瘤的患者；術(shù)前超聲檢查資料或術(shù)后乳腺癌組織標(biāo)本不完整的患者.

1.2 方 法

1.2.1 乳腺彩超檢查

應(yīng)用LOGIQ 5 Pro彩色超聲診斷儀(GE公司，美國(guó))進(jìn)行檢查，高頻探頭頻率為8～10 MHz.患者取仰臥位，充分暴露雙側(cè)乳房及腋窩，首先常規(guī)掃描病灶大小、邊緣、內(nèi)部微小鈣化、腋窩淋巴結(jié)腫大等；采用彩色多普勒超聲血流顯像技術(shù)分析乳腺癌病灶內(nèi)部和周邊血流情況，并對(duì)血流顯像進(jìn)行分級(jí).

1.2.2 免疫組化檢測(cè)

術(shù)后使用甲醛溶液固定乳腺癌組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋，4 μm切片，應(yīng)用免疫組化SP法(試劑盒為上?？道噬锟萍加邢薰?檢測(cè)GCDFP-15、ER、PR、C-erbB-2、Her2/Neu的表達(dá)情況.操作步驟：將石蠟切片脫蠟至水，3%過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶10 min，應(yīng)用檸檬酸鹽緩沖液修復(fù)抗原，滴加鼠抗人GCDFP-15單克隆抗體(1∶500稀釋)、鼠抗人ER、PR單克隆抗體(1∶300稀釋)、鼠抗人C-erbB-2單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、鼠抗人Her2/Neu單克隆抗體(1∶200稀釋)，4 ℃過(guò)夜，滴加山羊抗鼠IgG(1∶2 000稀釋)，37 ℃反應(yīng)30 min，加入顯色液A、B，37 ℃反應(yīng)10 min，滴加終止液.

1.2.3 觀察指標(biāo)

GCDFP-15蛋白判斷標(biāo)準(zhǔn)：高倍鏡視野下隨機(jī)選取10個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)黃色、棕黃色、棕褐色細(xì)胞數(shù)；陽(yáng)性細(xì)胞比例<10%賦1分，10%～50%賦2分，51%～75%賦3分，>75%賦4分；染色強(qiáng)度評(píng)價(jià)：黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分的乘積≥3分為GCDFP-15蛋白陽(yáng)性(+)，反之為陰性(-).ER、PR判斷標(biāo)準(zhǔn)：高倍鏡視野下觀察細(xì)胞核呈棕色、棕黃色為陽(yáng)性(+)，無(wú)染色為陰性(-).C-erbB-2、Her2/Neu判斷標(biāo)準(zhǔn)：高倍鏡視野下隨機(jī)選取10個(gè)視野，未著色或<10%細(xì)胞著色為陰性(-)，≥10%細(xì)胞著色為陽(yáng)性(+).

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 25.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，本研究中均為計(jì)數(shù)資料，以百分率(%)表示，行χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié) 果

2.1 超聲檢查結(jié)果

乳腺彩超檢查顯示：病灶直徑<2 cm的42例，直徑≥2 cm的58例；邊緣毛刺征68例，周圍高回聲暈象30例，內(nèi)部微小鈣化62例；血流顯像分級(jí)：0～1級(jí)28例，2～3級(jí)72例；病灶內(nèi)部回聲區(qū)82例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例.

2.2 免疫組化檢測(cè)結(jié)果

免疫組化檢測(cè)顯示：100例乳腺癌患者中GCDFP-15蛋白陰性61例(61.00%)，ER蛋白陽(yáng)性50例(50.00%)，PR蛋白陽(yáng)性36例(36.00%)，C-erbB-2蛋白陽(yáng)性62例(62.00%)，Her2/Neu蛋白陽(yáng)性45例(45.00%).

2.3 GCDFP-15、ER、PR表達(dá)情況

有內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)2～3級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者GCDFP-15陰性率明顯高于無(wú)內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)0～1級(jí)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；不同病灶大小、邊緣毛刺征、周圍高回聲暈象、病灶內(nèi)部回聲區(qū)的乳腺癌患者GCDFP-15陰性率之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).有邊緣毛刺征和周圍高回聲暈象的乳腺癌患者ER、PR陽(yáng)性率明顯高于無(wú)邊緣毛刺征和周圍高回聲暈象的患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者ER、PR陽(yáng)性率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；不同病灶大小、內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)、病灶內(nèi)部回聲區(qū)的乳腺癌患者ER、PR陽(yáng)性率之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).見(jiàn)表1.

2.4 C-erbB-2、Her2/Neu表達(dá)情況

內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)2～3級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者C-erbB-2、Her2/Neu陽(yáng)性率明顯高于無(wú)內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)0～1級(jí)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同病灶大小、邊緣毛刺征、周圍高回聲暈象、病灶內(nèi)部回聲區(qū)的乳腺癌患者C-erbB-2、Her2/Neu陽(yáng)性率之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).見(jiàn)表2.

3 討 論

原位乳腺癌不會(huì)直接導(dǎo)致患者死亡，但隨著病情的發(fā)展腫瘤細(xì)胞會(huì)脫落，并通過(guò)血液循環(huán)和淋巴系統(tǒng)向全身轉(zhuǎn)移，威脅患者生命安全，早期診斷和治療原位乳腺癌是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵.超聲檢查是乳腺癌早期篩查的常用手段，超聲血流顯像受儀器調(diào)節(jié)、信號(hào)采集與處理、超聲物理特性等多種因素影響，會(huì)降低檢查的準(zhǔn)確率.近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，細(xì)胞因子、基因檢測(cè)逐漸應(yīng)用于乳腺癌的早期診斷，并取得了良好的臨床效果.相關(guān)研究[5]顯示：細(xì)胞因子和基因的異常表達(dá)會(huì)引發(fā)組織的病理學(xué)改變，具有一定的影像學(xué)特征，因此，通過(guò)乳腺彩超可能反映出乳腺癌的生物學(xué)行為特征.

GCDFP-15是人體大汗腺的標(biāo)志物，表達(dá)于所有的大汗腺、泌乳腺、涎腺[6]，因此，GCDFP-15被認(rèn)為是一種與汗腺分泌明顯相關(guān)的腺體分化標(biāo)志物.多數(shù)乳腺病變與大汗腺異常分化有關(guān)，有研究[7]通過(guò)分子生物學(xué)和免疫組化技術(shù)也發(fā)現(xiàn)了在乳腺癌中有GCDFP-15表達(dá)，且表達(dá)陰性率明顯高于正常乳腺組織，提示GCDFP-15低表達(dá)可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān).本研究中乳腺癌患者GCDFP-15陰性率高達(dá)61.00%.進(jìn)一步分析與超聲征象的相關(guān)性顯示：有內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)2～3級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者GCDFP-15陰性率明顯高于無(wú)內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)0～1級(jí)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者.其原因可能為血流顯像分級(jí)2～3級(jí)的乳腺癌患者病灶周圍血流豐富，更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和侵襲，病灶中壞死組織易發(fā)生鈣化，腫瘤惡性程度更高.

ER、PR是目前研究較多的載體類激素受體，其表達(dá)水平與乳腺癌病變嚴(yán)重程度和臨床預(yù)后明顯相關(guān)[8].有邊緣毛刺征和周圍高回聲暈象提示腫瘤分化程度好，侵襲能力不強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞的增殖和分化仍受到體內(nèi)激素的調(diào)控，此時(shí)進(jìn)行針對(duì)性內(nèi)分泌治療能夠取得較好的效果[9].本研究乳腺癌患者中ER陽(yáng)性表達(dá)率為50.00%，PR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為36.00%，且邊緣毛刺征和周圍高回聲暈象的乳腺癌患者ER、PR陽(yáng)性率明顯高于無(wú)邊緣毛刺征和周圍高回聲暈象的患者，ER、PR高表達(dá)促進(jìn)了病灶周圍細(xì)胞間質(zhì)結(jié)締組織的反應(yīng)性增生，抑制了腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，但具體保護(hù)機(jī)制仍需深入研究.近年來(lái)研究[10]發(fā)現(xiàn)：ER陽(yáng)性的乳腺癌患者病灶分化程度較好，轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較低，且對(duì)內(nèi)分泌治療的敏感性更高.本研究中彩超顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者ER、PR陽(yáng)性率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者.

C-erbB-2、Her2/Neu是腫瘤相關(guān)基因，C-erbB-2是一種原癌基因，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化，Her2/Neu能夠提升人體蛋白水解酶的分泌水平，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、侵襲、轉(zhuǎn)移能力，腫瘤細(xì)胞惡性程度更高[11].本研究顯示：乳腺癌患者中C-erbB-2陽(yáng)性表達(dá)率為62.00%，Her2/Neu陽(yáng)性表達(dá)率為45.00%.內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)2～3級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者C-erbB-2、Her2/Neu陽(yáng)性率明顯高于無(wú)內(nèi)部微小鈣化、血流顯像分級(jí)0～1級(jí)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，血流供應(yīng)充分的乳腺癌細(xì)胞活性更強(qiáng)，增殖、遷移和侵襲的發(fā)生率更高，病灶組織液更易出現(xiàn)微鈣化現(xiàn)象.

綜上所述，乳腺癌超聲征象能夠在一定程度上反映患者病灶組織中GCDFP-15、ER、PR、C-erbB-2、Her2/Neu的表達(dá)情況，有助于臨床評(píng)估乳腺癌患者的預(yù)后.