侯俊芳，唐靜，張海霞

開封市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 開封 475000

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma，EC）是女性中常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，最常見的病理類型為內(nèi)膜樣腺癌，約70%以上病例發(fā)生于絕經(jīng)后的老年女性，常見臨床表現(xiàn)為絕經(jīng)后陰道出血，然而近年來EC發(fā)病呈年輕化及上升趨勢(shì)。手術(shù)是目前治療EC的主要方式之一，早期發(fā)現(xiàn)并及時(shí)治療可以使患者獲得較好的預(yù)后。EC分為激素依賴性和非激素依賴性，其發(fā)病與原癌基因及抑癌基因的異常表達(dá)、凋亡蛋白被抑制等有關(guān)，其中雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）的表達(dá)在EC的發(fā)生發(fā)展、預(yù)后評(píng)價(jià)中起到較重要的作用。本研究通過回顧性分析，探討EC組織中ER、PR的表達(dá)與臨床特征及預(yù)后的關(guān)系，旨在為臨床EC的早期診斷和治療提供參考依據(jù)，提高患者的生存時(shí)間并改善患者的預(yù)后，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年6月至2019年6月開封市人民醫(yī)院收治的EC患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南（第四版）》診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡40～70歲；③行子宮全切術(shù)；④初次接受手術(shù)；⑤術(shù)前未行放化療、生物免疫治療等抗癌治療；⑥臨床及隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有其他惡性腫瘤；②有嚴(yán)重的心、腦、肝、腎或其他疾?。虎垭S訪失訪。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入100例EC患者，選取100例EC患者的手術(shù)后石蠟包埋EC組織標(biāo)本。另取同期100例因子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜息肉、子宮肥大癥、子宮腺肌病行子宮全切術(shù)患者的子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本作為對(duì)照。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化法檢測(cè)ER及PR 術(shù)后切除的病理標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋處理，連續(xù)切片，厚度約4 μm，在室溫下放置1 h，然后在二甲苯中浸泡10 min，接著在95%乙醇中浸泡2次，每次5 min，再在80%乙醇中浸泡3 min，以完成切片脫蠟及水化；利用高壓進(jìn)行2 min抗原熱修復(fù)，pH值為6.0；每張切片上分別加入3%過氧化氫50 μl，室溫下孵育10 min，用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗3次，每次3 min，之后將PBS清除干凈；每張切片上分別加入一抗50 μl，在4℃的環(huán)境下過夜；用PBS沖洗3次，每次3 min，后在每張切片上加入MaxVisionTM2/HRP試劑，室溫下孵育30 min；用PBS沖洗3次，每次3 min，后在每張切片上加入100 μl配置后的二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色液滴，3～5 min后在顯微鏡下觀察；用自來水沖洗終止顯色；用蘇木精、PBS分別復(fù)染、沖洗、返藍(lán)；采用梯度酒精脫水干燥，最后固封、鏡檢。全部操作完成后對(duì)染色圖像進(jìn)行采集，在染色相對(duì)滿意的切片中選取10個(gè)高倍鏡視野清晰區(qū)域進(jìn)行結(jié)果判定，均以PBS代替一抗作為空白對(duì)照。結(jié)果判定：細(xì)胞核呈棕黃色而細(xì)胞質(zhì)不著色為陽性細(xì)胞。每個(gè)區(qū)域計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，其中陽性細(xì)胞＜10%為陰性，反之為陽性。

1.2.2 臨床特征收集及隨訪 收集入組患者病歷資料，逐一核實(shí)原始記錄，經(jīng)由專人統(tǒng)計(jì)整理：患者年齡、絕經(jīng)情況、EC家族史、病理組織學(xué)分類、生物學(xué)特征分型、肌肉浸潤(rùn)程度、國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移信息。入組患者實(shí)施為期1年的隨訪（截至2020年6月31日），每2個(gè)月門診復(fù)查1次，行MRI檢查并按規(guī)定填寫隨訪記錄登記表，隨訪期間死亡患者5例。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均錄入Excel表格，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用

χ

檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，檢驗(yàn)結(jié)果采用對(duì)數(shù)秩；以

P

＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ER、PR 表達(dá)情況的比較

EC組織中ER、PR及雙陽性表達(dá)率均明顯低于子宮內(nèi)膜組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.01）。（表1）

表1 EC和子宮內(nèi)膜組織中ER、PR表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征EC患者的EC組織中ER、PR表達(dá)情況的比較

不同年齡、是否絕經(jīng)、是否有EC家族史、病理組織學(xué)分類、生物學(xué)特征分型EC患者的EC組織中ER、PR及雙陽性表達(dá)情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）；不同肌肉浸潤(rùn)程度、FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移EC患者的EC組織中ER、PR及雙陽性表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征EC患者的EC組織中ER、PR表達(dá)情況的比較（n=100）

2.3 ER、PR 表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性分析

ER、PR及雙陽性表達(dá)均與EC患者肌肉浸潤(rùn)程度、FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（

P

＜0.05）。（表3）

表3 ER、PR表達(dá)與EC患者臨床特征的相關(guān)性分析

2.4 ER、PR表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

100例EC患者隨訪1年期間死亡7例（7.00%）。ER陽性表達(dá)45例，死亡2例（4.44%），ER陰性表達(dá)55例，死亡5例（9.09%），ER陽性表達(dá)與陰性表達(dá)患者的生存情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=0.797，

P

=0.372）（圖1）。PR陽性表達(dá)47例，死亡2例（4.26%），PR陰性表達(dá)53例，死亡5例（9.43%），PR陽性表達(dá)與陰性表達(dá)患者的生存情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=0.968，

P

=0.325）（圖2）。ER、PR雙陽性表達(dá)42例，死亡2例（4.76%），雙陰性表達(dá)51例，死亡5例（9.80%），ER、PR雙陽性表達(dá)與雙陰性表達(dá)患者的生存情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=0.786，

P

=0.375）（圖3）。

圖1 ER陽性表達(dá)（n=45）與陰性表達(dá)（n=55）EC患者的生存曲線

圖2 PR陽性表達(dá)（n=47）與陰性表達(dá)（n=53）EC患者的生存曲線

圖3 ER、PR雙陽性表達(dá)（n=42）與雙陰性表達(dá)（n=51）EC患者的生存曲線

3 討論

EC是危害女性健康的三大常見惡性腫瘤之一，主要發(fā)生于子宮內(nèi)膜腺體，以腺癌最常見。EC好發(fā)于絕經(jīng)后老年女性當(dāng)中，惡性程度較高，由于早期癥狀不足以引起重視，超2/3的患者就診時(shí)已到了晚期，預(yù)后較差。然而目前國內(nèi)外對(duì)EC的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。有研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)生發(fā)展與原癌基因的異常激活、抑癌基因的異常失活、ER及PR等標(biāo)志蛋白的過度表達(dá)等有一定的關(guān)系，還有研究表明EC中的ER、PR等免疫組化因子與不同的病理特征存在一定的關(guān)聯(lián)。因此將有助于判斷EC嚴(yán)重程度、治療方案制訂的分子標(biāo)志物尋找出來，并探索其中的關(guān)系有很重要的臨床意義。

本研究發(fā)現(xiàn)EC組織中ER、PR及雙陽性表達(dá)率均明顯低于子宮內(nèi)膜組織，這一結(jié)果與代艷芬等、Yu等研究有一定相似性，說明ER、PR的陽性表達(dá)越低，子宮內(nèi)膜組織越易癌變，分析原因可能是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，受體的產(chǎn)生受到損傷，當(dāng)腫瘤細(xì)胞惡性達(dá)到一定程度時(shí)，就會(huì)徹底喪失ER、PR，使ER、PR的陽性表達(dá)大大減少。本研究中，ER、PR及雙陽性表達(dá)與EC患者肌肉浸潤(rùn)程度、FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈負(fù)相關(guān)，而與年齡、絕經(jīng)情況、EC家族史、病理組織學(xué)分類和生物學(xué)特征分型無關(guān)，這一結(jié)果與王晨和孔為民、婁雪玲等研究有一定相似性，這說明ER、PR及雙陽性表達(dá)越低，腫瘤惡性程度風(fēng)險(xiǎn)越高。這對(duì)EC的治療也有一定的提示意義，ER、PR及雙陽性表達(dá)低，腫瘤惡性程度高，術(shù)后需進(jìn)一步行放化療；ER、PR及雙陽性表達(dá)高，腫瘤惡性程度低，可考慮術(shù)后輔助內(nèi)分泌治療即可。本研究還發(fā)現(xiàn)了EC患者預(yù)后和ER、PR及雙陽性表達(dá)均無明顯關(guān)系，這一研究與周慧玲等、Athanassiadou等研究存在一定差異，后兩者的研究表明ER、PR陽性表達(dá)越高，EC患者的預(yù)后越好。分析原因可能是本研究納入例數(shù)較少或是隨訪時(shí)間較短，也可能是研究中EC患者的病情較單一，不具備完全充分性，同時(shí)本研究?jī)H使用免疫組化法對(duì)患者進(jìn)行篩查，也存在部分檢查結(jié)果假陽性的情況。

綜上所述，EC組織中ER、PR的表達(dá)與肌肉浸潤(rùn)程度、FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在一定關(guān)系，這提示ER、PR等分子的檢測(cè)對(duì)制訂合理的EC治療方案、判斷疾病嚴(yán)重程度有一定的臨床意義。ER、PR的表達(dá)也可能與預(yù)后存在一定的關(guān)系，還需更多的臨床研究和數(shù)據(jù)加以探索證實(shí)。