遲慶安，林明江，孫明軍，邵衛(wèi)星，王 牌，王 剛，王 璟，孫淑芳，樊曉旭，張皓博，田莉莉，孫翔翔，李慶霞，謝有志 ，范偉興

（1.海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，海南?？?571100；2.白沙黎族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，海南白沙 572800：3.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

布魯氏菌?。ㄒ韵潞?jiǎn)稱布?。┯址Q波浪熱、地中海熱、馬耳他熱，也叫懶漢病，是由布魯氏菌引起的羊、牛、豬、鹿、犬等哺乳動(dòng)物和人類共患的一種慢性傳染病，廣泛流行于世界170 多個(gè)國(guó)家和地區(qū)[1]。布病危害嚴(yán)重，全世界僅農(nóng)業(yè)損失每年近30 億美元[2]。為此，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為乙類傳染病和二類動(dòng)物疫病[3]。海南省2017 年以前僅有零星人畜布病病例報(bào)告[4-6]，為非傳統(tǒng)布病流行區(qū)，在《國(guó)家布魯氏菌病防治計(jì)劃（2016—2020 年）》中，被列于三類地區(qū)（無(wú)本地新發(fā)人間病例和畜間疫情），采取以風(fēng)險(xiǎn)防范為主的防控策略，禁止對(duì)牛羊?qū)嵤┎疾∶庖?。而?017 年起，海南省布病疫情報(bào)告數(shù)逐漸增多。據(jù)海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心監(jiān)測(cè)，畜間布病疫情以東方市為聚集區(qū)，并向臨高、儋州、昌江、白沙、瓊中、萬(wàn)寧、陵水等地輻射，涉及羊、牛、豬等易感動(dòng)物，但以羊?yàn)橹鳌?/p>

2021 年6 月，白沙黎族自治縣一村民確診感染布魯氏菌。為查明畜間疫情狀況，及時(shí)控制疫情，繼而提出有針對(duì)性防控建議，海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心聯(lián)合中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心在當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)等部門協(xié)助下開展了畜間緊急流行病學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 病例定義

1.1.1 可疑病例 被檢動(dòng)物血清經(jīng)白沙黎族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）檢測(cè)為布病陽(yáng)性的病例。

1.1.2 確診病例 經(jīng)海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心采用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（cELISA）檢測(cè)為布病陽(yáng)性的可疑病例。

1.2 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查

用衛(wèi)星地圖標(biāo)記人病例所在村莊（疫點(diǎn)）位置，借助衛(wèi)星地圖了解疫點(diǎn)周邊區(qū)域環(huán)境；與縣疾病預(yù)防控制中心了解布病病例及周邊易感人群排查監(jiān)測(cè)情況，現(xiàn)場(chǎng)實(shí)地調(diào)查陽(yáng)性養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)及周邊環(huán)境情況，與養(yǎng)殖戶座談了解其飼養(yǎng)管理、生產(chǎn)、引種、免疫以及發(fā)病治療情況，特別是流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等情況；與縣畜牧獸醫(yī)局、動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心相關(guān)人員以及鎮(zhèn)村干部、村級(jí)防疫員進(jìn)行訪談或座談，了解轄區(qū)內(nèi)羊、牛、豬等易感動(dòng)物養(yǎng)殖及布病既往史等情況。

1.3 樣品采集與檢測(cè)

在人病例所在村莊的養(yǎng)羊場(chǎng)及流行病學(xué)關(guān)聯(lián)場(chǎng)采集血清樣品，按照動(dòng)物布病診斷技術(shù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 18646—2018），采用RBPT 初篩，對(duì)篩檢陽(yáng)性樣品再用cELISA 復(fù)核。對(duì)血清學(xué)確診為陽(yáng)性的羊，采集脾臟、子宮角等組織樣品送中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心進(jìn)行分離培養(yǎng)和鑒定分析。

2 結(jié)果

2.1 疫點(diǎn)基本情況

白沙黎族自治縣位于海南省西部，東與瓊中黎族苗族自治縣，南與樂東黎族自治縣，西與昌江黎族自治縣，北與儋州市接壤。報(bào)告的人布病病例居住于該縣西北部的榮邦鄉(xiāng)大嶺居社區(qū)某村莊（經(jīng)度109.051 946、緯度19.442 195，圖1）。該村住戶22 戶，常住人口50 余人。村莊周邊植被茂盛，為山區(qū)地形，交通相對(duì)閉塞，距離環(huán)島西線高速公路（G98）不到200 m，但并不直接相通，僅通過(guò)村道與外界相連（圖2）。該村共有羊養(yǎng)殖戶4 戶，調(diào)查時(shí)共計(jì)存欄120 只。羊圈多建于自家居住房屋前后，設(shè)施簡(jiǎn)易，無(wú)任何生物安全防護(hù)設(shè)施及措施。村內(nèi)無(wú)豬、牛等其他易感動(dòng)物養(yǎng)殖，周邊3 km 范圍內(nèi)無(wú)活羊定點(diǎn)屠宰場(chǎng)點(diǎn)及交易市場(chǎng)。

圖1 疫點(diǎn)所在位置

2.2 人病例情況

該確診病例為男性，職業(yè)為看守所輔警，2021 年3 月7 日出現(xiàn)乏力、發(fā)熱（不規(guī)則），關(guān)節(jié)疼痛，于2021 年6 月7 日到海口市某醫(yī)院就診，2021 年6 月16 日經(jīng)?？谑旋埲A區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢測(cè)為布病抗體陽(yáng)性。據(jù)回憶，其在年前及年后多次到離家50 m 的鐘某羊圈（檢測(cè)為陽(yáng)性）共取走病殘羊羔3 只、羊胚胎4 個(gè)，在未采取任何防護(hù)措施情況下，自行加工處理（如拔毛、切割），通過(guò)火鍋方式食用。

2.3 人病例關(guān)聯(lián)養(yǎng)殖場(chǎng)情況

對(duì)與該病例有直接關(guān)聯(lián)的鐘某養(yǎng)殖場(chǎng)采集12份羊血清，經(jīng)白沙黎族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心檢測(cè)，均為陽(yáng)性，經(jīng)海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心復(fù)檢，全部為陽(yáng)性。鐘某羊養(yǎng)殖場(chǎng)位于村莊邊緣，北邊為水塘和橡膠林，東邊和西邊為荒地，南邊緊鄰村居民區(qū)（圖3）。羊圈設(shè)施簡(jiǎn)陋，場(chǎng)地內(nèi)無(wú)消毒等生物安全防護(hù)設(shè)施，外來(lái)人員可直接進(jìn)入圈內(nèi)；場(chǎng)內(nèi)無(wú)隔離舍，引進(jìn)羊時(shí)直接混群飼養(yǎng)；場(chǎng)內(nèi)沒有無(wú)害化處理設(shè)施，圈舍旁邊緊挨場(chǎng)主居室，人畜生活區(qū)未有效隔離；場(chǎng)內(nèi)有鴨等其他動(dòng)物混養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件較差（圖4）。鐘某從2015年開始養(yǎng)殖，養(yǎng)殖品種為本地黑山羊和雜交褐色山羊（圖5），調(diào)查時(shí)存欄44 只；飼養(yǎng)方式以放養(yǎng)為主，白天趕往村外的灌木林地、草場(chǎng)等放牧，晚上趕回羊圈，與村內(nèi)其他養(yǎng)殖戶羊群經(jīng)常輪流進(jìn)入放牧地交叉放羊。鐘某養(yǎng)殖羊群平時(shí)主要由該村防疫員負(fù)責(zé)免疫工作，免疫了口蹄疫和小反芻獸疫疫苗，未免疫布病疫苗，銷售羊只主要通過(guò)羊販運(yùn)人員上門收購(gòu)；養(yǎng)殖模式為自繁自養(yǎng)與引種相結(jié)合，2021 年3 月曾與本鄉(xiāng)相鄰的邦溪鎮(zhèn)一養(yǎng)殖戶交換種公羊。2021年以來(lái)，鐘某養(yǎng)殖羊群中個(gè)別羊只出現(xiàn)流產(chǎn)，但無(wú)死亡。鐘某對(duì)流產(chǎn)的羊仔或死胎未進(jìn)行無(wú)害化處理，均隨意丟棄。

圖3 鐘某羊圈位置及周邊環(huán)境

圖4 鐘某羊圈現(xiàn)狀

圖5 鐘某所養(yǎng)羊品種

2.4 疫情排查監(jiān)測(cè)情況

對(duì)疫點(diǎn)所在村的其余3 戶養(yǎng)殖戶（A、B、C）采集羊血清55 份，經(jīng)白沙黎族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心初檢，檢出陽(yáng)性29 份，經(jīng)海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心復(fù)核，全部為陽(yáng)性；對(duì)與鐘某交換種公羊的邦溪鎮(zhèn)流行病學(xué)關(guān)聯(lián)養(yǎng)羊場(chǎng)（D）采集血清樣品25 份，經(jīng)白沙黎族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心初檢，檢出陽(yáng)性1 份，經(jīng)海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心復(fù)檢，仍為陽(yáng)性（表1）。轄區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)政府組織人員對(duì)上述確診存在布病陽(yáng)性的5 個(gè)養(yǎng)殖戶的同群所有羊只進(jìn)行撲殺并無(wú)害化處理。

表1 疫點(diǎn)所在村及流行病學(xué)關(guān)聯(lián)場(chǎng)排查監(jiān)測(cè)情況 單位：份

白沙黎族自治縣疾病預(yù)防控制中心對(duì)疫點(diǎn)所在村養(yǎng)羊戶及密切接觸者采集血清20 人份，經(jīng)RBPT 初篩，試管凝集試驗(yàn)復(fù)核，結(jié)果9 人確診為布病抗體陽(yáng)性。

2.5 病原分離鑒定

對(duì)采集的羊脾臟、子宮角等組織樣品進(jìn)行布魯氏菌分離培養(yǎng)，結(jié)果從鐘某羊場(chǎng)樣品中分離到布魯氏菌。經(jīng)生物型鑒定，分離菌株為羊種布魯氏菌3 型，與之前海南省東方市分離菌株類型一致[4]。多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（MLVA）分析顯示，該菌株基因型為1-5-3-13-2-2-3-2-4-41-8-4-4-9-4-4（表2）。與布魯氏菌MLVA 國(guó)際數(shù)據(jù)庫(kù)（https://microbesgenotyping.i2bc.paris-saclay.fr/）的菌株信息比對(duì)發(fā)現(xiàn)：該菌株的MLVA8 基因型（前8 個(gè)位點(diǎn)）的編號(hào)為42，MLVA11 基因型編號(hào)為116，為我國(guó)北方地區(qū)和中亞地區(qū)羊種布魯氏菌常見基因型；但是該菌的MLVA16 基因型（包括所有16 個(gè)位點(diǎn)）在數(shù)據(jù)庫(kù)中沒有匹配的菌株信息，說(shuō)明該基因型為新發(fā)現(xiàn)的基因型。

表2 海南省羊種布魯氏菌3 型菌株信息

3 討論

3.1 病原來(lái)源推測(cè)

本次疫情因養(yǎng)殖戶引進(jìn)羊只未申報(bào)檢疫且沒有詳細(xì)生產(chǎn)管理臺(tái)賬，缺乏真實(shí)詳細(xì)的羊只引進(jìn)信息，無(wú)法開展疫情溯源調(diào)查，確定病原來(lái)源，但結(jié)合調(diào)查結(jié)果，推測(cè)此次疫情的病原通過(guò)引種傳入的可能性較大。（1）本次疫情發(fā)生地與2019 年發(fā)生布病疫情的白沙縣元門鄉(xiāng)相距不遠(yuǎn)（約70 km），疫點(diǎn)所在的榮邦鄉(xiāng)近年來(lái)無(wú)布病疫情發(fā)生。（2）疫點(diǎn)養(yǎng)羊戶羊圈設(shè)施簡(jiǎn)陋，無(wú)隔離圈舍；場(chǎng)地內(nèi)無(wú)消毒設(shè)施，且未采取生物安全防護(hù)措施；引進(jìn)羊只時(shí)從不申報(bào)檢疫，且引進(jìn)后直接混群飼養(yǎng)。（3）疫點(diǎn)飼養(yǎng)的褐色山羊并非本地傳統(tǒng)養(yǎng)殖品種，與之前東方市發(fā)生布病疫情的山羊品種一致[5]；疫點(diǎn)處于白沙、儋州、昌江等市縣交界地區(qū)，養(yǎng)殖戶跨市縣引進(jìn)羊只現(xiàn)象較普遍；海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，相鄰的昌江、儋州以及周邊的東方等市縣之前均有布病疫情報(bào)告。（4）病原學(xué)鑒定結(jié)果顯示，分離的菌株與之前東方市疫情菌株生物型一致，均為羊種布魯氏菌3 型，基因型也相似。

3.2 疫情擴(kuò)散途徑

從人病例感染情況及布病潛伏期特點(diǎn)推測(cè)，該地布病病原傳入時(shí)間至少在2021 年3 月以前。該村羊飼養(yǎng)方式以放養(yǎng)為主，白天趕往村外的灌木林地、草場(chǎng)等放牧，晚上趕回羊圈，各家羊群經(jīng)常輪流進(jìn)入放牧地交叉放羊，同時(shí)流產(chǎn)胎兒隨意丟棄野外，非常容易使布病病原在本村內(nèi)羊群內(nèi)傳播擴(kuò)散。加上銷售羊只未申報(bào)檢疫，使感染羊只銷往外地，導(dǎo)致邦溪鎮(zhèn)流行病學(xué)關(guān)聯(lián)場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性。由于養(yǎng)殖戶無(wú)詳細(xì)的羊只銷售信息，無(wú)法準(zhǔn)確追蹤銷售羊只去向，因此需要繼續(xù)擴(kuò)大監(jiān)測(cè)范圍，加大疫情排查監(jiān)測(cè)力度，評(píng)估疫情擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)。

4 啟示

從2016 年起，海南省加大脫貧攻堅(jiān)力度，發(fā)展鄉(xiāng)村特色產(chǎn)業(yè)，山羊養(yǎng)殖作為當(dāng)?shù)貍鹘y(tǒng)優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)，具有良好的銷售市場(chǎng)，經(jīng)濟(jì)效益可觀，因此被作為特色扶貧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)之一予以重點(diǎn)扶持，但本地山羊種源缺乏，無(wú)法滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展需要，島內(nèi)外山羊價(jià)格差異較大，一些不法商販趁機(jī)從島外違規(guī)引進(jìn)未檢疫羊問題層出不窮，造成布病輸入性風(fēng)險(xiǎn)加大。研究[5]發(fā)現(xiàn)，違規(guī)引進(jìn)未檢疫羊?yàn)楹Ｄ鲜“l(fā)生輸入性布病的主要原因，從而形成布病傳播“點(diǎn)”。海南省畜牧業(yè)養(yǎng)殖以散養(yǎng)為主，特別是羊養(yǎng)殖規(guī)?；潭容^低，以放養(yǎng)為主，農(nóng)村不同養(yǎng)殖戶羊群共用荒坡草地放牧，容易使布病在村內(nèi)養(yǎng)殖戶羊群間傳播，形成布病傳播“線”。海南省內(nèi)動(dòng)物跨市縣調(diào)運(yùn)產(chǎn)地檢疫落實(shí)力度不足，一些養(yǎng)殖戶不熟悉動(dòng)物調(diào)運(yùn)有關(guān)法律法規(guī)，同時(shí)隨著綜合執(zhí)法改革的推進(jìn)，動(dòng)物檢疫與監(jiān)督執(zhí)法分離后，動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)制未理順，使得不申報(bào)檢疫現(xiàn)象突出。另外，產(chǎn)地檢疫方法傳統(tǒng)，仍停留在眼觀方式，而布病臨床癥狀并不明顯，僅憑眼觀難以判斷動(dòng)物是否感染布病病原，造成一些未檢疫或雖經(jīng)檢疫合格但實(shí)際已感染的羊在海南省部分市縣間流通而傳播，形成布病傳播“面”。

病原學(xué)鑒定分析結(jié)果也初步證明了布病在海南省畜間流行傳播的路徑。2017 年，中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心從東方市羊群中分離到羊種布魯氏菌的4 個(gè)基因型（HN-1、2、3、5）。這些基因型在黑龍江、內(nèi)蒙古、青海、浙江、廣東等省份都有報(bào)道，還有1 個(gè)基因型（HN-6）與地中海國(guó)家土耳其發(fā)現(xiàn)的基因型完全一致[7-9]，表明2017 年?yáng)|方市布病疫情由外地傳入病原所致。從MLVA16基因型看，導(dǎo)致本次白沙縣疫情的病原比較獨(dú)特，未見任何資料報(bào)道過(guò)。但是，在其16 個(gè)位點(diǎn)中，前11 個(gè)較為保守的位點(diǎn)（MLVA11：116）與我國(guó)北方的流行菌株及東方市分離的部分菌株完全一致，僅有后面5 個(gè)變異率較高的位點(diǎn)呈現(xiàn)出特異性。根據(jù)布魯氏菌基因型的這些特點(diǎn)，可以得出初步結(jié)論，海南省的畜間布病疫情主要由外地動(dòng)物輸入引起，并已呈現(xiàn)出本地定殖的趨勢(shì)，且經(jīng)不斷演化變異形成了地方特有基因型。

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，本地大部分養(yǎng)殖戶不了解布病防控知識(shí)，更不知道其為人獸共患病，經(jīng)常不采取防護(hù)措施而直接徒手接產(chǎn)，隨意丟棄流產(chǎn)胎兒及流產(chǎn)物，長(zhǎng)時(shí)間密切接觸患病羊及其排泄物，羊圈多靠近居住區(qū)，人畜混居現(xiàn)象普遍，衛(wèi)生環(huán)境條件較差，因而導(dǎo)致人感染[4]。布病臨床癥狀不明顯，多為隱性感染。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該村多個(gè)養(yǎng)殖戶和羊群檢測(cè)為血清學(xué)陽(yáng)性，但其并未表現(xiàn)出臨床癥狀，使得布病不易及時(shí)發(fā)現(xiàn)，造成布病在一定區(qū)域內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間傳播擴(kuò)散，這也是布病防控的一個(gè)難點(diǎn)。隨著海南自由貿(mào)易港建設(shè)的推進(jìn)，海南省的布病防控形勢(shì)將會(huì)更加嚴(yán)峻，這需要引起政府部門的高度重視。而布病防控涉及社會(huì)的方方面面，應(yīng)以政府主導(dǎo)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村、衛(wèi)生健康、市場(chǎng)監(jiān)管、綜合執(zhí)法、公安等多部門參與，各司其職，加大“人、財(cái)、物”投入。強(qiáng)化布病防控知識(shí)宣傳培訓(xùn)干預(yù)，對(duì)養(yǎng)殖人員、屠宰人員以及獸醫(yī)等高風(fēng)險(xiǎn)人群及易感動(dòng)物開展主動(dòng)排查監(jiān)測(cè)，摸清流行本底，加強(qiáng)動(dòng)物移動(dòng)控制監(jiān)管，筑牢防控屏障，健全基層防疫機(jī)構(gòu)體系建設(shè)，提升基層防疫人員技術(shù)水平，推進(jìn)農(nóng)村環(huán)境衛(wèi)生整治和社會(huì)治安綜合治理，多措并舉，才能保障海南自由貿(mào)易港的公共衛(wèi)生安全。