周佳琪 魏 杰 王 洪 劉甦蘇 光姣娜 熊 芮 王辰飛 范昌發(fā) 岳秉飛

(中國食品藥品檢定研究院，北京 102629)

清道夫受體B2蛋白(SCARB2)又稱為2型溶酶體整合膜蛋白(lysosomal integral membrane protein type 2，LIMP2)，是一種溶酶體膜糖蛋白，屬于B族清道夫受體家族，分布于人體大多數(shù)組織，主要參與膜泡運輸及溶酶體成熟過程，也可作為EV71和CVA16的受體導致兒童患手足口病[1-3]。近年來，手足口病作為小兒急性傳染病嚴重威脅兒童的健康，腸道病毒中的 EV71 和 CVA16為手足口主要的病毒型別，感染者嚴重可以危害生命[4]。由于hSCARB2基因可以在小鼠的肌肉和腦組織中高表達，促進病毒對小鼠的感染和復制能力[5]。因此，對R26-hSCARB2小鼠的研究是認識與研究兒童手足口病的模型基礎。

在一定范圍內波動的血液生理生化指標是每種實驗動物特有的生物學指標，這些指標可以反映動物的生理狀態(tài)和健康狀態(tài)，可以為病理學、毒理學、探討發(fā)病機理等研究選擇合格的實驗動物提供參考[6-8]。

目前，對于R26-hSCARB2小鼠的生理生化等部分生物學特性未有相關報道，本研究通過對不同周齡和性別的R26-hSCARB2小鼠的生理生化指標進行測定，為深入研究該小鼠提供了基礎材料。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及處理

取4周齡和8周齡的R26-hSCARB2小鼠各20只，雌雄各半，SPF級，體質量分別為：4周齡(15.14±0.93)g，8周齡(20.43±0.85)g，均來自本單位實驗動物資源研究所，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SYXK(京)2017-0005。利用電轉染技術將同源重組產(chǎn)生的靶向載體導入C57BL/6小鼠胚胎干細胞的rosa26位點，在屏障環(huán)境中完成囊胚顯微注射、胚胎移植等操作，PCR檢測陽性即為陽性轉基因鼠。4周齡和8周齡R26-hSCARB2小鼠均飼養(yǎng)于屏障環(huán)境，環(huán)境設施合格證：SYXK(京)2017-0013。

空腹12 h后的小鼠，采集靜脈血加入稀釋液后用來測定生理指標，取全血分離血清后用來測定生化指標。

實驗動物的飼養(yǎng)和相關操作均按照實驗動物福利倫理“3R”原則規(guī)程進行，并由中國食品藥品檢定研究院實驗動物福利倫理審查委員會審批[中檢動(福)第(B)021號]。

1.2 主要儀器

日本光電Mek7222血細胞分析儀；奧林巴斯AU400全自動生化分析儀。

1.3 試劑

檢測生理指標所用的試劑、稀釋液和溶血劑購自上海東湖生物醫(yī)學有限公司；檢測生化指標所用的試劑購自中生北控生物科技股份有限公司。

1.4 測定項目及方法

采用日本光電Mek-7222血球分析儀測定嗜堿性粒細胞絕對值(BAS)、嗜堿性粒細胞百分率(BAS%)、嗜酸性粒細胞絕對值(EOS)、嗜酸性粒細胞百分率(EOS%)、紅細胞壓積(HCT)、血紅蛋白濃度(HGB)、淋巴細胞絕對值(LYM)、淋巴細胞百分率(LYM%)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、平均紅細胞體積(MCV)、單核細胞絕對值(MON)、單核細胞百分率(MON%)、平均血小板體積(MPV)、中性粒細胞絕對值(NEUT)、中性粒細胞百分率(NEUT%)、血小板壓積(PCT)、血小板分布寬度(PDW)、血小板計數(shù)(PLT)、紅細胞計數(shù)(RBC)、紅細胞分布寬度(RDW)和白細胞計數(shù)(WBC)，共計22項血液生理指標。

采用奧林巴斯AU400全自動生化分析儀測定白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、尿素(BUN)、鈣(Ca)、總膽固醇(CHO)、肌酐(CREA)、葡萄糖(GLU)、磷(P)、甘油三酯(TG)和總蛋白(TP)，共計12項血液生化指標。

1.5 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 比較不同性別的4周齡R26-hSCARB2小鼠血液生理生化指標

在測定的22項生理學指標中，不同性別的4周齡R26-hSCARB2小鼠WBC具有極顯著差異(P<0.01)，LYM和NEUT%指標具有顯著差異(P<0.05)，其余生理指標無統(tǒng)計學意義,見表1所列。

表1 不同性別的4周齡R26-hSCARB2小鼠的血液生理指標Table 1 Blood physiological values of 4-week-old R26-hSCARB2 mice in different genders

在測定的12項生化指標中，CHO和TG具有極顯著差異(P<0.01)，BUN具有顯著差異(P<0.05)，其余生化指標差異不具統(tǒng)計學意義，見表2所列。

表2 不同性別的4周齡R26-hSCARB2小鼠的血清生化指標Table 2 Serum biochemical values of 4-week-old R26-hSCARB2 mice in different genders

2.2 比較不同性別的 8 周齡R26-hSCARB2小鼠血液生理生化指標

在測定的22項生理學指標中，不同性別的8周齡R26-hSCARB2小鼠有BAS%、LYM、MON%及WBC指標,具有極顯著差異(P<0.01)，EOS%、NEUT、PDW及PLT指標具有顯著差異(P<0.05)，其余指標無統(tǒng)計學意義，見表3所列。在測定的12項生化指標中，CHO、P及TP 指標具有極顯著差異(P<0.01)，ALB、ALP、GLU及TG指標具有顯著差異(P<0.05)，其余指標無統(tǒng)計學意義，見表4所列。

表3 不同性別的8周齡R26-hSCARB2小鼠的血液生理指標Table 3 Blood physiological values of 8-week-old R26-hSCARB2 mice in different genders

表4 不同性別的8周齡R26-hSCARB2小鼠的血清生化指標Table 4 Serum biochemical values of 8-week-old R26-hSCARB2 mice in different genders

2.3 比較不同周齡的R26-hSCARB2小鼠之間的生理生化指標

在測定的4周和8周齡R26-hSCARB2小鼠的22項生理學指標中，LYM、LYM%、MON、MON%、PLT、RDW及WBC具有極顯著差異(P<0.01)，MPV、NEUT、NEUT%及PCT共4項指標具有顯著差異(P<0.05)，其余指標無統(tǒng)計學意義，見表5所列。

表5 不同周齡的R26-hSCARB2小鼠的血液生理指標Table 5 Blood physiological values of R26-hSCARB2 mice in different ages

在測定的4周和8周齡R26-hSCARB2小鼠的12項生化指標中， ALB、ALP、ALT、AST、BUN、Ca、CHO、CREA、GLU、P、TG及TP共 12項生化指標均具有極顯著差異(P<0.01)，見表6所列。

表6 不同周齡的R26-hSCARB2小鼠的血清生化指標Table 6 Serum biochemical values of R26-hSCARB2 mice in different ages

3 討論

3.1 性別對于R26-hSCARB2小鼠的影響

在測定的4周齡R26-hSCARB2小鼠，22項生理指標中，LYM、NEUT%及WBC指標上存在顯著差異，且均為雌性指標高于雄性；8周齡R26-hSCARB2小鼠BAS%、EOS%、LYM、MON%、NEUT、PDW、PLT及WBC共計8項指標上存在顯著差異，其中EOS%、LYM、NEUT、PDW及WBC這5項指標為雌性高于雄性，BAS%和MON%指標為雄性高于雌性。

在測定的12項生化指標中，4周齡R26-hSCARB2小鼠BUN、CHO及TG指標上存在顯著差異，且CHO和TG指標均為雄性含量高于雌性，BUN含量則是雌性高于雄性； 8周齡R26-hSCARB2小鼠ALB、ALP、CHO、GLU、P、TG及TP共計7項指標存在顯著差異，其中ALP為雌性高于雄性，TP、ALB、GLU、P、CHO及TG均為雄性高于雌性。4周齡和8周齡的R26-hSCARB2小鼠的CHO和TG水平均為雄性高于雌性，在未進行基因改造的C57BL/6小鼠與中青年男女中也有同樣的結果[9-10]，說明性別可能會影響生物的激素水平。

3.2 年齡對與R26-hSCARB2小鼠的影響

4周齡和8周齡R26-hSCARB2小鼠在測定的22項生理指標中， LYM、LYM%、MON、MON%、MPV、NEUT、NEUT%、PLT、PCT、RDW及WBC共計11項指標存在顯著或極顯著差異。由此可見，不同周齡的R26-hSCARB2小鼠在血小板、白細胞等白細胞亞群方面具有顯著差異，除嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞外，其他白細胞亞群均具有顯著差異，說明隨著周齡的增加，R26-hSCARB2小鼠的免疫水平有相應的改變。

測定的12項生化指標在不同周齡小鼠間全部具有極顯著差異，均為8周齡含量高于4周齡的含量，反映出周齡對R26-hSCARB2小鼠的肝功能、脂代謝和內分泌功能上有較大影響。

3.3 對于R26-hSCARB2小鼠的選擇

小鼠為生物醫(yī)學研究做出了十分突出的貢獻，因為它們是目前培育品系最多、用量最大且標準化程度較高的實驗動物[11]。血液生理生化指標可以反映動物的新陳代謝及生理功能狀況，能夠衡量動物是否健康以及遺傳是否穩(wěn)定，也可以作為臨床疾病診斷的依據(jù)，對科學研究具有重要的參考價值[12]。在進行相關動物實驗的時候，要充分考慮品種、品系、性別、周齡等因素對實驗動物基礎生物學指標的影響，同時也要考慮到這些因素所產(chǎn)生的影響的大小[13-14]。

本研究檢測了R26-hSCARB2小鼠的血液生理生化指標，分析了性別和周齡對于該小鼠的影響，發(fā)現(xiàn)性別和周齡都會影響該小鼠的血液生理生化指標，小鼠周齡對血液生理生化指標存在較大影響，可以為R26-hSCARB2小鼠的應用研究提供一定的參考。