曹春然 劉洪艷 李雪梅 吳 偉 朱春玥 王佳帥

(北京市藥品檢驗(yàn)所,國(guó)家藥品監(jiān)督管理局仿制藥研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中藥成分分析與生物評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102206)

乙型肝炎疫苗是我國(guó)的計(jì)劃免疫疫苗，新生兒出生當(dāng)日需要按規(guī)定注射的一類疫苗?！吨袊?guó)藥典》2015年版中共收載有三種重組乙型肝炎疫苗:重組乙型肝炎疫苗(漢遜酵母Hansenulaploymorpha)、重組乙型肝炎疫苗(釀酒酵母Saccharomycescerevisiae)和重組乙型肝炎疫苗(CHO細(xì)胞)。除藥典收載的標(biāo)準(zhǔn)外，疫苗的生產(chǎn)企業(yè)也向國(guó)家藥監(jiān)部門(mén)申請(qǐng)各自的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)用于控制疫苗的質(zhì)量。異常毒性檢查是疫苗的安全性質(zhì)量控制指標(biāo)，目前已批準(zhǔn)上市的國(guó)產(chǎn)疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均設(shè)有該檢查項(xiàng)。《英國(guó)藥典》2020年版和《歐洲藥典》10.0已經(jīng)取消了異常毒性檢查實(shí)驗(yàn)，但作為疫苗的安全性考察指標(biāo)，《中國(guó)藥典》2020年版四部還繼續(xù)保留該檢查項(xiàng)[1]。本文通過(guò)比較三種重組乙型肝炎疫苗對(duì)異常毒性檢查用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體質(zhì)量增長(zhǎng)的影響，匯總注射疫苗后動(dòng)物的狀態(tài)，考察分別由重組漢遜酵母、重組釀酒酵母和重組CHO細(xì)胞表達(dá)的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)經(jīng)純化，加入鋁佐劑制成的疫苗對(duì)異常毒性檢查用動(dòng)物的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠(以下簡(jiǎn)稱小鼠)，雄性，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001，SCXK(京)2016-0011；Hartley豚鼠(以下簡(jiǎn)稱豚鼠)，雄性，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0011；Hartley豚鼠，雄性，購(gòu)自北京科宇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2015-0007。

1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境

北京市藥品檢驗(yàn)所(北京市保健食品化妝品檢測(cè)中心)動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(京)2015-0033。

1.3 儀器

電子天平(TE2101-L)，購(gòu)自德國(guó)賽多利斯有限公司。

1.4 藥物

重組乙型肝炎疫苗(漢遜酵母)，由A公司生產(chǎn)，含HBsAg 20 μg/mL，用法用量為基礎(chǔ)免疫每劑10 μg；重組乙型肝炎疫苗(釀酒酵母)，由B公司生產(chǎn)，含HBsAg 20 μg/mL，用法用量為基礎(chǔ)免疫每劑10 μg；重組乙型肝炎疫苗(CHO細(xì)胞)，由C公司生產(chǎn)，含HBsAg 20 μg/mL，用法用量為基礎(chǔ)免疫每劑10 μg，三種乙型肝炎疫苗均為液體。本研究匯總了2016年3月—2018年2月，三種重組乙型肝炎疫苗的異常毒性檢查中的體質(zhì)量數(shù)據(jù)，其中包含重組乙型肝疫苗(H.ploymorpha)28 批次、重組乙型肝疫苗(S.cerevisiae)45 批次、重組乙型肝炎疫苗(CHO細(xì)胞)102批次及空白對(duì)照組61批次的小鼠體質(zhì)量變化情況，以及重組乙型肝疫苗(漢遜酵母)30批次、重組乙型肝疫苗(釀酒酵母)45批次、重組乙型肝炎疫苗(CHO細(xì)胞)101批次及空白對(duì)照組38批次的豚鼠體質(zhì)量變化情況。因本研究的主要目的是對(duì)每種疫苗用動(dòng)物的體質(zhì)量變化值進(jìn)行分析，每批次疫苗的批號(hào)不是分組的因素，故不分別列出。

1.5 給藥和觀察

按照《中國(guó)藥典》2015年版四部附錄1141中的要求，每批次疫苗均取體質(zhì)量為18～22 g的小鼠5只和體質(zhì)量為250 ～350 g的豚鼠2只，腹腔注射疫苗，給藥體積為0.5 mL/只(小鼠)和5 mL/只(豚鼠)，同時(shí)取同批5只小鼠和2只豚鼠作為空白對(duì)照組動(dòng)物，不做處理，給藥后連續(xù)觀察7 d[2]。動(dòng)物給藥前后的狀態(tài)觀察包括給藥后的呼吸、自主活動(dòng)、口鼻顏色、運(yùn)動(dòng)、排泄、死亡等，并測(cè)定給藥前和給藥7 d后的動(dòng)物體質(zhì)量。在實(shí)驗(yàn)中采用健康成年的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，考慮到雌性的性周期對(duì)體質(zhì)量的增長(zhǎng)速度有影響，在檢查中多選擇雄性動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，本研究討論對(duì)雄性動(dòng)物體質(zhì)量的影響。

1.6 結(jié)果分析

三種重組乙型肝炎疫苗的異常毒性檢查實(shí)驗(yàn)均在同一時(shí)間段內(nèi)完成，所以將該時(shí)間段內(nèi)的空白對(duì)照組動(dòng)物進(jìn)行合并，作為空白對(duì)照組參與統(tǒng)計(jì)比較，數(shù)據(jù)采用IBM SPSS Statistics 23分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析：①計(jì)算體質(zhì)量增長(zhǎng)值(體質(zhì)量增長(zhǎng)值=給藥7 d后體質(zhì)量-給藥前體質(zhì)量)；②對(duì)給藥前及給藥7 d后的體質(zhì)量及增長(zhǎng)值進(jìn)行數(shù)據(jù)分布情況的Kolmogorov-Smirnov(n>50)檢驗(yàn)，根據(jù)結(jié)果確定統(tǒng)計(jì)分析的方法[3]；③將三種疫苗的動(dòng)物體質(zhì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。給藥前動(dòng)物的體質(zhì)量有規(guī)定的范圍，體質(zhì)量在范圍內(nèi)即可分為一組，分組未按隨機(jī)分組原則執(zhí)行，給藥7 d后動(dòng)物的體質(zhì)量可作為異常毒性中動(dòng)物體質(zhì)量的背景數(shù)據(jù)。本研究著重考察給藥7 d后動(dòng)物體質(zhì)量的增長(zhǎng)情況，并匯總給藥后動(dòng)物的狀態(tài)。以下內(nèi)容，采用漢遜酵母、釀酒酵母和CHO細(xì)胞分別代指重組乙型肝炎疫苗(漢遜酵母)、重組乙型肝疫苗(釀酒酵母)和重組乙型肝炎疫苗(CHO細(xì)胞)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

三種疫苗的異常毒性檢查結(jié)果均符合規(guī)定，說(shuō)明成品中不存在不可控制的有毒物質(zhì)。

2.1 三種重組乙型肝炎疫苗對(duì)雄性小鼠的影響

2.1.1對(duì)雄性小鼠狀態(tài)的影響：實(shí)驗(yàn)用小鼠為同一種屬和同一來(lái)源。三種重組乙型肝炎疫苗的異常毒性檢查結(jié)果均符合規(guī)定，有1批疫苗(釀酒酵母給藥組)初試時(shí)，5只小鼠中有1只小鼠體質(zhì)量減輕，經(jīng)復(fù)試10只動(dòng)物均健康存活，體質(zhì)量增長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物未見(jiàn)異常狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)均健康存活，體質(zhì)量增加。經(jīng)分析認(rèn)為，可能因?qū)嶒?yàn)操作的原因?qū)е聞?dòng)物體質(zhì)量減輕，故在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)時(shí)將體質(zhì)量減輕動(dòng)物的給藥前、后及增長(zhǎng)值去除。

2.1.2各組雄性小鼠的體質(zhì)量數(shù)據(jù)分布情況：采用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)對(duì)各組雄性小鼠的體質(zhì)量和體質(zhì)量及增長(zhǎng)值進(jìn)行數(shù)據(jù)分布情況的分析，結(jié)果顯示：給藥前各組動(dòng)物的體質(zhì)量值分布均不服從正態(tài)分布(P<0.05)；給藥7 d后，體質(zhì)量數(shù)據(jù)分布檢驗(yàn)結(jié)果顯示含漢遜酵母組動(dòng)物的體質(zhì)量值服從正態(tài)分布(P>0.05)，其他各組動(dòng)物的體質(zhì)量值分布均不服從正態(tài)分布(P<0.05)；體質(zhì)量增長(zhǎng)值的數(shù)據(jù)分布檢驗(yàn)結(jié)果顯示漢遜酵母給藥和釀酒酵母給藥組的體質(zhì)量增長(zhǎng)值分布均服從正態(tài)分布(P>0.05)，其他各組動(dòng)物的體質(zhì)量增長(zhǎng)值均不服從正態(tài)分布(P<0.05)。各組雄性小鼠體質(zhì)量的描述見(jiàn)圖1和表1。

表1 注射7 d后雄性小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值數(shù)據(jù)分布情況Table 1 Distribution of weight gain data of male mice 7 days after injection

圖1 雄性小鼠給藥前和給藥7 d后體質(zhì)量數(shù)據(jù)分布Fig.1 Distribution of body weight data of male mice before administration and 7 days after administration

2.1.3對(duì)小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值的影響：采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)中Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析三種乙型肝炎疫苗給藥組和空白對(duì)照組雄性小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值變化，采用多個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)中Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析三種乙型肝炎疫苗給藥組動(dòng)物的體質(zhì)量增長(zhǎng)值變化情況，結(jié)果顯示：比較空白對(duì)照組和三種乙型肝炎疫苗給藥組動(dòng)物的體質(zhì)量增長(zhǎng)值，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；釀酒酵母給藥組動(dòng)物的體質(zhì)量增長(zhǎng)值與漢遜酵母和CHO細(xì)胞給藥組動(dòng)物的體質(zhì)量增長(zhǎng)值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 三種乙型肝炎疫苗的給藥組雄性小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值比較Table 2 Comparison of the weight gain of male mice in the 3 hepatitis B vaccine administration groups

2.2 三種重組乙型肝炎疫苗對(duì)雄性豚鼠的影響

2.2.1對(duì)豚鼠狀態(tài)的影響：在初試中，CHO細(xì)胞給藥組有1只豚鼠死亡，1只豚鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值為6.4 g，漢遜酵母和釀酒酵母組各有1只豚鼠的7 d體質(zhì)量增長(zhǎng)值分別為4.4 g和5.5 g，經(jīng)復(fù)試均符合規(guī)定，分析認(rèn)為豚鼠可能在給藥過(guò)程中受傷，導(dǎo)致死亡或體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢。除此以外，各給藥組其他豚鼠狀態(tài)均未見(jiàn)異常。

2.2.2各組中的不同來(lái)源的豚鼠數(shù)：2016年3月—2018年2月，本實(shí)驗(yàn)室使用的豚鼠購(gòu)自兩個(gè)生產(chǎn)廠家，因動(dòng)物入室后均在同一環(huán)境中飼養(yǎng)和觀察，注射三種疫苗時(shí)未區(qū)分豚鼠來(lái)源，所以按照疫苗的種類分組。分別處理各組豚鼠的體質(zhì)量數(shù)據(jù)，將空白對(duì)照組數(shù)據(jù)合并。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為減少雌性豚鼠因激素水平的波動(dòng)而影響實(shí)驗(yàn)，故常選用雄性豚鼠進(jìn)行異常毒性實(shí)驗(yàn)，文中所有的體質(zhì)量數(shù)據(jù)均來(lái)源于雄性豚鼠。統(tǒng)計(jì)兩種來(lái)源的豚鼠在各組中所占動(dòng)物數(shù)和比重，分別用維通利華和科宇代指不同的來(lái)源。統(tǒng)計(jì)時(shí)剔除上述的異常動(dòng)物的體質(zhì)量數(shù)據(jù)。不同來(lái)源豚鼠在各組的分布見(jiàn)表3。

表3 兩種來(lái)源雄性豚鼠在各組中的分布情況Table 3 Distribution of guinea pigs from 2 sources in each group

2.2.3各組雄性豚鼠的體質(zhì)量數(shù)據(jù)分布情況:采用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)對(duì)各組豚鼠的體質(zhì)量和體質(zhì)量增長(zhǎng)值進(jìn)行數(shù)據(jù)分布情況的分析。結(jié)果顯示：給藥前，各組豚鼠的體質(zhì)量分布均不服從正態(tài)分布(P<0.05)；給藥7 d后體質(zhì)量數(shù)據(jù)分布檢驗(yàn)結(jié)果顯示各組豚鼠的體質(zhì)量均服從正態(tài)分布(P>0.05)；體質(zhì)量增長(zhǎng)值的數(shù)據(jù)分布檢驗(yàn)結(jié)果顯示：漢遜酵母給藥組和釀酒酵母給藥組豚鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)值分布不服從正態(tài)分布(P<0.05)，其他各組豚鼠的體質(zhì)量值服從正態(tài)分布(P>0.05)。各組雄性豚鼠體質(zhì)量的描述見(jiàn)圖2和表4。

圖2 雄性豚鼠給藥前和給藥7 d后體質(zhì)量數(shù)據(jù)分布Fig.2 Distribution of body weight data of male guinea pigs before administration and 7 days after administration

表4 雄性豚鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值數(shù)據(jù)分布情況Table 4 Distribution of weight gain data of male guines pigs

2.2.4對(duì)豚鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值的影響:采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)中Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析三種乙型肝炎疫苗的給藥組和空白對(duì)照組豚鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值變化情況，采用多個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)中Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析三種乙型肝炎疫苗給藥組豚鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)值變化情況。結(jié)果顯示：比較空白對(duì)照組和三種乙型肝炎疫苗給藥組豚鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)值，CHO細(xì)胞給藥組豚鼠與空白對(duì)照組豚鼠的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他兩組豚鼠與空白對(duì)照組豚鼠的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表5。比較三種疫苗的給藥組豚鼠，各組豚鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)值差異沒(méi)有顯著性意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表6。

表5 空白對(duì)照組和給藥組雄性豚鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值比較Table 5 Comparison of the weight gain of male guinea pigs in the blank group and the administration group

表6 給藥組雄性豚鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值比較Table 6 Comparison of weight gain of male guinea pigs in administration groups

3 討論

3.1三種疫苗在注射后7 d內(nèi)均未見(jiàn)明顯的異常反應(yīng)，注射過(guò)程中造成的動(dòng)物不適能夠在注射完成后1 min內(nèi)恢復(fù)。注射時(shí)，由于動(dòng)物的掙扎造成對(duì)動(dòng)物的傷害例如出血等，可能影響動(dòng)物體質(zhì)量的正常增長(zhǎng)，日常行為學(xué)觀察未見(jiàn)異常表現(xiàn)。

3.2三種重組乙型肝炎疫苗分別由重組漢遜酵母、重組釀酒酵母和重組CHO細(xì)胞表達(dá)的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)經(jīng)純化，加入鋁佐劑制成。在《中國(guó)藥典》2015年版中，重組漢遜酵母和重組釀酒酵母表達(dá)的HBsAg均是將酵母菌破碎后，除去細(xì)胞碎片，通過(guò)硅膠吸附，柱色譜等適宜的方法純化，經(jīng)過(guò)除菌過(guò)濾獲得原液，原液由甲醛滅活處理后，將蛋白質(zhì)和鋁劑以一定比例混合，在一定條件下形成鋁吸附產(chǎn)物，然后用生理氯化鈉溶液配制為半成品，分裝后即為成品。原液的檢定合格標(biāo)準(zhǔn)為HBsAg純度為99.0%，雜蛋白含量不超過(guò)總蛋白含量的1%，宿主殘留DNA小于10 ng/劑，半成品或成品中游離甲醛含量分別不超過(guò)15 μg/mL和20 μg/mL，鋁含量分別為0.45～0.60 mg/mL和0.35～0.62 mg/mL；重組CHO細(xì)胞表達(dá)的HBsAg來(lái)源于細(xì)胞培養(yǎng)上清液，合并收獲物經(jīng)過(guò)澄清過(guò)濾、柱色譜純化、甲醛滅活、超濾、濃縮及除菌過(guò)濾后，獲得原液。原液加入氫氧化鋁佐劑吸附后，即為半成品，然后分裝為成品。原液檢定合格標(biāo)準(zhǔn)為HBsAg純度不低于95.0%，支原體檢查合格，CHO細(xì)胞DNA殘留量應(yīng)不高于10 pg/劑，CHO細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量應(yīng)不高于總蛋白含量的0.05%，成品中游離甲醛含量不高于50 μg/mL，鋁應(yīng)不高于0.43 mg/mL。企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的控制要求應(yīng)與《中國(guó)藥典》相同或嚴(yán)于藥典標(biāo)準(zhǔn)，三種疫苗的生產(chǎn)過(guò)程中均使用鋁佐劑為蛋白吸附劑，且含量遠(yuǎn)高于其它雜質(zhì)和HBsAg，鋁佐劑是疫苗中的主要成分和主要輔料。根據(jù)楊赟昀等[4]報(bào)道，鋁佐劑有可能導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)腹部刺激癥狀。本研究中涉及的三種疫苗均未見(jiàn)明顯的腹部刺激反應(yīng)，說(shuō)明鋁佐劑作為疫苗制劑中主要的輔料，不同廠家的鋁佐劑，質(zhì)量控制要求和使用要求各不相同?！吨袊?guó)藥典》2020年版四部中新增了氫氧化鋁佐劑的質(zhì)量控制通則(通則3650)[1]，對(duì)制備方法和檢定項(xiàng)目進(jìn)行了說(shuō)明，該通則可以為疫苗生產(chǎn)用鋁佐劑提供質(zhì)量控制參考和安全保障。

3.3乙型肝炎疫苗為新生兒基礎(chǔ)免疫疫苗，疫苗說(shuō)明書(shū)中描述為一般情況下每次免疫劑量為HBsAg10 μg。正常新生兒體質(zhì)量一般為2 500～4 000 g[5]，按新生兒體質(zhì)量2 500 g計(jì)算臨床HBsAg給藥劑量為4 μg/kg，動(dòng)物體質(zhì)量按22 g/只(小鼠)和350 g/只(豚鼠)計(jì)算給藥劑量為454.5 μg/kg(小鼠)和285.7 μg/kg(豚鼠)，分別相當(dāng)于新生兒臨床給藥劑量的113倍和71倍，小鼠的給藥劑量大于豚鼠的給藥劑量。從給藥7 d后動(dòng)物體質(zhì)量增長(zhǎng)值的數(shù)據(jù)分析可以發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)用小鼠在給藥后7 d內(nèi)的體質(zhì)量增長(zhǎng)值疫苗組動(dòng)物和空白對(duì)照組動(dòng)物無(wú)顯著性差異，但三種疫苗中釀酒酵母組動(dòng)物的體質(zhì)量增加均值大于另外兩種疫苗；豚鼠注射7 d后，CHO細(xì)胞給藥組動(dòng)物的體質(zhì)量增加均值小于空白組動(dòng)物，與另外兩種疫苗組動(dòng)物比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)顯示不同生產(chǎn)工藝的疫苗對(duì)異常毒性實(shí)驗(yàn)中小鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)有影響，但對(duì)豚鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)未見(jiàn)明顯影響。

3.4由于疫苗的生產(chǎn)工藝不斷改進(jìn)，生產(chǎn)過(guò)程和所用物料的質(zhì)量控制日趨完善，部分國(guó)家取消了異常毒性檢查項(xiàng)，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)異常毒性檢查項(xiàng)的適用性產(chǎn)生了不同的意見(jiàn)[6-7]。小鼠具有體型小、飼養(yǎng)管理易于控制、生產(chǎn)繁殖快、有明確的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)、對(duì)各種毒素、病原體和化學(xué)物質(zhì)等敏感的特點(diǎn)[8]。小鼠實(shí)驗(yàn)最早作為安全性檢查實(shí)驗(yàn)也是由于它對(duì)制劑中防腐劑苯酚的濃度有高度敏感性[9]。在異常毒性檢查實(shí)驗(yàn)中，小鼠體質(zhì)量要求在18～22 g之間，復(fù)試時(shí)的體質(zhì)量應(yīng)為19～21 g。體質(zhì)量范圍控制嚴(yán)格，同批動(dòng)物的體質(zhì)量和日齡差異較小，給藥劑量較大，通過(guò)實(shí)驗(yàn)容易表現(xiàn)受試物間的差別。豚鼠有固有特性可用于實(shí)驗(yàn)研究，它對(duì)很多致病菌和病毒十分敏感[8]。德國(guó)從1901年開(kāi)始采用豚鼠實(shí)驗(yàn)進(jìn)行白喉抗血清的特異性毒性和安全性控制，德國(guó)將小鼠的安全性檢查實(shí)驗(yàn)和豚鼠的特異性毒性檢查實(shí)驗(yàn)整合，建立生物制品的異常毒性檢查[9]。豚鼠體型較大，生產(chǎn)繁殖周期較長(zhǎng)，在異常毒性檢查實(shí)驗(yàn)中豚鼠的體質(zhì)量要求在250～350 g之間。受試豚鼠的同批動(dòng)物之間的體質(zhì)量和日齡存在較大差異，與小鼠相比，給藥劑量較小，動(dòng)物反應(yīng)不易觀察。金先梅[10]和袁文琳等[11]報(bào)道，臨床有患者接種乙型肝炎疫苗后出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)，疫苗的變態(tài)反應(yīng)與個(gè)人的體質(zhì)相關(guān)，雖然豚鼠適用于藥物的變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，但異常毒性檢查實(shí)驗(yàn)并不是檢測(cè)抗原的檢查方法。

因此，由重組漢遜酵母、重組釀酒酵母和重組CHO細(xì)胞表達(dá)乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)經(jīng)純化，加入鋁佐劑制成的重組乙型肝炎疫苗，在工藝和輔料使用方面均有差異。通過(guò)對(duì)三種疫苗成品的異常毒性檢查所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，動(dòng)物的一般狀態(tài)觀察未見(jiàn)明顯差別，均沒(méi)有觀察到文獻(xiàn)記載的因鋁佐劑導(dǎo)致的小鼠腹膜刺激癥狀。三種重組乙型肝炎疫苗對(duì)小鼠給藥后7 d內(nèi)的體質(zhì)量增長(zhǎng)值的影響不同，對(duì)豚鼠給藥后7 d內(nèi)的體質(zhì)量增長(zhǎng)值未見(jiàn)明顯影響。