唐川君 龔 慧 黃志寅 馮 哲 高錦航 譚慶華 趙旭東 呂龍寶 劉 超 呂維敏 王 蕓 胡 兵 唐承薇 張瓊英

(1.四川大學(xué)華西護(hù)理學(xué)院/四川大學(xué)華西醫(yī)院消化內(nèi)鏡中心， 成都 610041)(2. 四川大學(xué)華西醫(yī)院消化內(nèi)科， 成都 610041)(3. 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心， 昆明 650201)

獼猴為非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，其生理結(jié)構(gòu)與人類(lèi)非常相似，在人類(lèi)學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、毒理學(xué)等研究中具有重要的作用，因此獼猴是非常重要的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[1]。獼猴價(jià)格昂貴及物種的珍貴性，制約其在研究中的應(yīng)用。目前在獼猴腸道病變研究中，大多數(shù)結(jié)腸病變資料來(lái)源于獼猴尸檢，而獼猴全結(jié)腸內(nèi)鏡檢查可在不處死獼猴的情況下對(duì)獼猴腸道病變反復(fù)觀察研究及活檢取材。那么，安全、有效、方便、經(jīng)濟(jì)且快速的腸道準(zhǔn)備，可以縮短完成全結(jié)腸內(nèi)鏡檢查時(shí)間，方便檢查時(shí)對(duì)全結(jié)腸的觀察，減少檢查并發(fā)癥及局部感染率[2]。因此，結(jié)腸鏡檢查能否順利和安全的完成，檢查前腸道準(zhǔn)備起著至關(guān)重要的作用。

1 材料和方法

1.1 受試動(dòng)物

成年獼猴30只，雄性18只，雌性12只，體質(zhì)量為4～5 kg，營(yíng)養(yǎng)狀況均中等。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所靈長(zhǎng)類(lèi)研究中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK(滇)K2017-0003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證：SYXK(滇)K2017-0008。

1.2 試劑和設(shè)備

芒硝(硫酸鈉，Na2SO4·10H2O，四川川眉芒硝有限責(zé)任公司)，用5%的葡萄糖生理鹽水配置成濃度為60 g/L的芒硝洗腸液；胃鏡GIF-Q260J和全自動(dòng)內(nèi)鏡消毒機(jī)(OLYMPUS)。胃鏡及全自動(dòng)內(nèi)鏡消毒機(jī)專(zhuān)用于動(dòng)物檢查。復(fù)方氯胺酮(100 mg/支，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)。

1.3 腸道準(zhǔn)備方法

控制擬行結(jié)腸鏡檢查的獼猴在檢查前一晚進(jìn)食少量低纖維少渣食物，并于檢查當(dāng)日禁食早餐。將3 g芒硝加至50 mL的5%的葡萄糖生理鹽水中，配置成濃度為60 g/L的芒硝洗腸溶液。根據(jù)獼猴體型及鼻咽通道情況選擇Fr8～Fr10胃管。甲操作者一手將獼猴雙上肢反向固定其后背，另一手握緊獼猴雙下肢，對(duì)獼猴行動(dòng)進(jìn)行限制及固定。乙操作者一手固定獼猴頭部，另一只手持胃管通過(guò)獼猴鼻腔送入胃管至胃內(nèi)，安置好后將胃管前端放入盛滿(mǎn)水的碗內(nèi)，觀察無(wú)氣泡冒出且獼猴無(wú)咳嗽反應(yīng)，以確認(rèn)胃管正確安置在胃內(nèi)。結(jié)腸鏡檢查前3 h，通過(guò)上訴方法給獼猴安置鼻胃管，從鼻胃管注入已配好的芒硝溶液。之后，每間隔0.5 h通過(guò)鼻管喂50 mL芒硝溶液一次，總共喂4次。完成第4次芒硝溶液管喂后，間隔0.5 h管喂一次50 mL的5%葡萄糖生理鹽水，總洗腸溶液量為250 mL。

1.4 腸道清潔度判斷

將鏡下觀察腸道糞水情況分為三個(gè)等級(jí)：Ⅰ級(jí)，全腸道無(wú)糞渣，只有少量清澈的液體；Ⅱ級(jí)，腸腔內(nèi)有少量糞渣及或大量黃色糞水，經(jīng)吸引器能吸盡，不影響鏡下黏膜觀察及治療；Ⅲ級(jí)，腸腔內(nèi)有大量糞渣或塊狀大便，經(jīng)吸引器不能吸盡，不能完成全結(jié)腸檢查[3]。Ⅰ～Ⅱ級(jí)視為腸道準(zhǔn)備清潔，Ⅲ級(jí)視為不潔。

2 結(jié)果

2.1 獼猴腸道準(zhǔn)備清潔度

30只獼猴行腸道準(zhǔn)備后，未發(fā)生嘔吐、窒息、脫水及死亡。芒硝管喂后，獼猴首次排大便時(shí)間為(40±10)min；3 h后，絕大部分獼猴大便均呈清水樣。內(nèi)鏡下觀察腸道清潔度，18只I級(jí)、9只Ⅱ級(jí)以及3只Ⅲ級(jí)，見(jiàn)表1。

表1 獼猴腸道清潔度Table 1 Colon cleanliness of macaques

2.2 腸鏡檢查情況

30只獼猴中，27只順利完成全結(jié)腸檢查，檢查過(guò)程中分別在升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸及直腸采集活體組織標(biāo)本。每只獼猴全結(jié)腸鏡操作時(shí)間10～20 min；腸道清潔度為Ⅱ級(jí)及體質(zhì)量較輕的獼猴，操作時(shí)間較長(zhǎng)。在進(jìn)鏡及退鏡過(guò)程中，可有少許黏膜擦傷及出血，但無(wú)穿孔及大量出血。結(jié)腸鏡檢查后，無(wú)獼猴因腸道感染而死亡。獼猴正常解剖圖，見(jiàn)圖1～圖6。

圖1 回盲部Fig.1 Ileocecum

圖2 升結(jié)腸Fig.2 Ascending colon

圖3 橫結(jié)腸Fig.3 Transverse colon

圖4 降結(jié)腸Fig.4 Descending colon

圖5 乙狀結(jié)腸Fig.5 Sigmoid colon

圖6 直腸Fig.6 Rectum

3 討論

獼猴與人同屬靈長(zhǎng)類(lèi)，因此在生理結(jié)構(gòu)、遺傳物質(zhì)等具有高度的相似性。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外應(yīng)用獼猴建立了多種疾病模型，進(jìn)行各種病毒、基因、腫瘤等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)。然而，對(duì)于獼猴腸道疾病研究，迄今為止，多數(shù)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)來(lái)自獼猴死后尸體解剖，難以適應(yīng)對(duì)疾病的及時(shí)診治、前瞻性科學(xué)研究等需求[4]。腸鏡的出現(xiàn)在人類(lèi)腸道疾病的研究中具有里程碑式的作用，因此利用腸鏡檢查對(duì)獼猴腸道疾病進(jìn)行研究，也應(yīng)是一種行之有效的方法。張虹雨等[5]報(bào)道獼猴腸鏡檢查的方法及效果，但因沒(méi)有成功洗腸，且觀察困難，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均在腸鏡后死亡，因此進(jìn)行獼猴腸鏡檢查前，優(yōu)化洗腸方法具有重要意義。

理想的結(jié)腸鏡檢查前腸道準(zhǔn)備應(yīng)是排空結(jié)腸內(nèi)全部有形成分和大部分液體，對(duì)結(jié)腸的大體和組織學(xué)外觀無(wú)影響。在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)攝入足量的液體及洗腸液引起腹瀉，且不會(huì)引起受試者的嘔吐、嚴(yán)重脫水、電解質(zhì)紊亂、死亡等不良反應(yīng)。聚乙二醇是目前國(guó)內(nèi)外結(jié)腸鏡檢查受試者應(yīng)用最為廣泛的一類(lèi)腸道清潔劑,分次劑量方案可提供高質(zhì)量的腸道清潔[6]。張獻(xiàn)文等[7]和佘世鋒等[8]對(duì)比了芒硝與聚乙二醇在腸道準(zhǔn)備中清潔效果與其耐受性，芒硝和聚乙二醇的清潔腸道的效果均滿(mǎn)意，而芒硝有更良好的耐受性、安全性且價(jià)格低廉。芒硝作為純天然礦物，有瀉下、清熱、潤(rùn)燥及軟堅(jiān)的作用。芒硝溶解內(nèi)服后，其硫酸鈉的硫酸根離子不易被腸黏膜吸收，在腸道內(nèi)形成高滲鹽溶液，吸附大量水分，使腸道擴(kuò)張，引起機(jī)械刺激，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，從而發(fā)生排便反應(yīng)[9]，其不良反應(yīng)輕，對(duì)機(jī)體損傷小且不損傷腸黏膜。本研究采用芒硝管喂洗腸，操作簡(jiǎn)便易行，所有受試動(dòng)物無(wú)不良反應(yīng)發(fā)生。

本研究根據(jù)馬永輝[9]的方法，即：將芒硝與葡萄糖氯化鈉溶液配比成濃度為60 g/L的洗腸溶液用于患者清洗腸道，分次給患者用藥，其總洗腸溶液量為2 500 mL。根據(jù)獼猴與人的體質(zhì)量比，將獼猴洗腸液總?cè)萘空{(diào)整為250 mL，分5次管喂。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：30只獼猴中，有27只獼猴完成了結(jié)腸鏡檢查，其腸道清潔有效率為90%；有3只獼猴腸道準(zhǔn)備為Ⅲ級(jí)，未能完成腸鏡檢查，其原因?yàn)橛?只獼猴腸道狹窄，芒硝清腸液不能順利到達(dá)結(jié)腸達(dá)到清腸目的；還有1只獼猴平時(shí)大便干結(jié)難解，這次清腸未能達(dá)到目的，下次可以提前2 d通過(guò)藥物保持大便通暢再行腸道準(zhǔn)備，或增加當(dāng)日管喂清腸液次數(shù)來(lái)達(dá)到清腸目的。

將芒硝作為清腸液用于獼猴結(jié)腸鏡檢查前的腸道準(zhǔn)備，成功的為結(jié)腸鏡檢查提供了良好的腸道檢查條件，幫助結(jié)腸鏡檢查安全順利的完成。在不處死獼猴的情況下，能反復(fù)利用腸鏡觀察獼猴全結(jié)腸起到了至關(guān)重要的作用。