王 恒 李建喜 郭志廷 岳 聰 張 康 仇正英 張 凱 王 磊 王貴波 王學(xué)智 楊孝樸 張景艷*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅省中獸藥工程技術(shù)研究中心，蘭州 730050；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070)

巨噬細(xì)胞在特異性免疫系統(tǒng)和非特異性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，具有“多面性”，與多種疾病的產(chǎn)生及防御有關(guān)。在外源性刺激時，巨噬細(xì)胞最先作出反應(yīng)，對異源性物質(zhì)進(jìn)行吞噬、處理、加工以及遞呈，此過程伴隨電子的轉(zhuǎn)移，是氧化脅迫的主要來源，巨噬細(xì)胞是機(jī)體抗氧化與免疫調(diào)控相關(guān)機(jī)制研究中的一個重要工具細(xì)胞。

嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)是革蘭氏陽性菌，主要存在小腸中。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.42%嗜酸乳桿菌(0.72×108CFU/g)可顯著促進(jìn)斜帶石斑魚幼魚的生長，并提高其抗病力和腸道消化酶活性[7]。嗜酸乳桿菌S-層蛋白還可以提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬活性，促進(jìn)免疫信號分子NO的釋放，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、白細(xì)胞介素-8(interleukin-8，IL-8)的表達(dá)水平[8]。嗜酸乳桿菌能使抗生素誘導(dǎo)的腸道菌群明顯恢復(fù)，可降低雛雞白痢的發(fā)病率并提高治愈率，增強(qiáng)雛雞對致病性大腸桿菌侵染的抵抗能力等[9-10]。然而有關(guān)嗜酸乳桿菌的抗氧化方面的研究尚未見報道。鑒于此，本研究通過比較嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物不同組分的抗氧化能力，評價其上清液對小鼠單核巨噬細(xì)胞(RAW 264.7細(xì)胞)NO含量、ROS水平和SOD、GSH-Px活性的影響以及對LPS誘導(dǎo)的氧化損傷的保護(hù)作用，旨在尋找嗜酸乳桿菌中抗氧化活性組分，并明確嗜酸乳桿菌抗氧化活性組分對巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株與細(xì)胞

嗜酸乳桿菌BNCC 185342購自北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)有限公司，RAW 264.7細(xì)胞購自上海晅科生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)試劑

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、丁基化羥基甲苯(BHT)購自上海源葉生物科技有限公司；1,10-鄰二氮菲(1,10-phenanthroline)、吐溫20(Tween 20)、亞油酸、硫代巴比妥酸(TBA)購自北京索萊寶科技有限公司，DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)購自美國Gicbo公司，GSH-Px、SOD、ROS試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，Griess試劑購自美國ThermoFisher公司，LPS(大腸桿菌O55∶B5)購自美國Sigma公司，CCK-8試劑盒購自上海澤塔生物科技有限公司。其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 嗜酸乳桿菌復(fù)蘇及嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物不同組分制備

在37 ℃水浴鍋中迅速融解-80 ℃保存的嗜酸乳桿菌，接種于MRS營養(yǎng)肉湯，37 ℃培養(yǎng)24 h，傳至2～3代，用于后續(xù)試驗(yàn)。

參考Ragul等[4]的方法，并略作改動。將培養(yǎng)好的嗜酸乳桿菌調(diào)整細(xì)菌濃度為1×108CFU/mL，4 500×g離心10 min，收集上清液，用0.22 μm濾器過濾，得到無細(xì)胞的上清液；離心后的細(xì)胞顆粒用0.01 mmol/L磷酸鹽緩沖液(PBS，pH 7.4)洗滌3次，再懸浮在PBS中，調(diào)整細(xì)菌濃度為1×108CFU/mL，得到完整細(xì)胞；將細(xì)菌濃度為1×108CFU/mL的完整細(xì)胞置于超聲細(xì)胞破碎機(jī)中，并在冰浴條件下超聲(50%功率工作5 s、停頓5 s，共處理40 min，12 000×g離心10 min)除去細(xì)胞碎片，得到無細(xì)胞的胞內(nèi)提取物。

1.4 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物不同組分清除自由基的效果比較

1.4.1 DPPH清除率

參考Lin等[11]的方法，并略作改動。取500 μL樣品與500 μL 0.1 mmol/L DPPH在1.5 mL離心管中混勻，放入30 ℃溫箱避光30 min，用抗壞血酸作陽性對照，各樣品組在517 nm吸光度值記為A樣品；對照組以500 μL無水乙醇代替DPPH溶液，在517 nm吸光度值記為A對照；空白組以500 μL PBS或MRS肉湯代替樣品溶液，在517 nm吸光度值記為A空白。用下式計算DPPH清除率：

DPPH清除率(%)=[1-(A樣品-A對照)/
A空白]×100。

1.4.2 羥自由基清除率

參考Zhang等[12]的方法，并略作改動。取0.5 mL 1,10-鄰二氮菲(1.875 mmol/L)、1 mL PBS(0.01 mmol/L，pH 7.4)和0.5 mL硫酸亞鐵(FeSO4，1.875 mmol/L)混勻，分別添加0.5 mL樣品和0.5 mL H2O2(0.1%)，混合后置37 ℃溫育1.5 h，測定536 nm吸光度值。用下式計算羥自由基清除率：

羥自由基清除率(%)=(As-An)/(Ab-An)×100。

式中：As為樣品和H2O2吸光度值；An為PBS/MRS肉湯和H2O2吸光度值；Ab為PBS/MRS肉湯和水吸光度值。

1.4.3 亞油酸清除率

參考Lin等[11]的方法，并略作改動。取0.1 mL亞油酸、0.2 mL Tween 20和19.7 mL去離子水混合，制備亞油酸乳液(20 mL)。將1 mL亞油酸乳液、0.5 mL PBS(0.01 mmol/L，pH 7.4)、0.2 mL FeSO4(0.01%)、0.2 mL H2O2(0.01%)和0.5 mL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物不同組分樣品混合，空白組用PBS或MRS肉湯代替樣品，37 ℃孵育12 h后。取2 mL反應(yīng)溶液與0.2 mL三氯乙酸(TCA；4%)、2 mL TBA(0.8%)和0.2 mL丁基化羥基甲苯(BHT，0.4%)混合，100 ℃孵育30 min，冷卻后加入2 mL氯仿萃取。取200 μL上清液加入96孔板，測定532 nm吸光度值。用下式計算亞油酸清除率：

亞油酸清除率(%)=(1-A樣品/A空白)×100。

式中：A樣品為試驗(yàn)樣品吸光度值；A空白為空白樣品吸光度值。

1.5 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞增殖、釋放NO及氧化水平的影響

1.5.1 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞增殖的影響

將消化后的RAW 264.7細(xì)胞離心，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105CFU/mL，接種于96孔板，靜置12 h，棄上清液。對照組加入100 μL完全培養(yǎng)液(只含10% FBS)，試驗(yàn)組每孔加入5、25、50、125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清(將原液用完全培養(yǎng)基稀釋10倍)，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，用PBS清洗2遍，加入100 μL完全培養(yǎng)液和10 μL CCK-8溶液，37 ℃孵育1.5 h，測定450 nm吸光度值，計算細(xì)胞活力。

1.5.2 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞釋放NO的影響

將消化后的RAW 264.7細(xì)胞離心，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106CFU/mL，接于6孔板，靜置12 h。對照組加入1 mL完全培養(yǎng)液，試驗(yàn)組每孔加入5、25、50、125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液，并用完全培養(yǎng)液補(bǔ)足1 mL，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，收集上清液，根據(jù)Griess試劑說明書測定上清液中NO含量。

1.5.3 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞氧化水平的影響

細(xì)胞處理同1.5.2，收集上清液，ROS水平及SOD、GSH-Px活性采用試劑盒測定，根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.6 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響

1.6.1 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞釋放NO的影響

將RAW 264.7細(xì)胞以1×106CFU/mL接于6孔板后，靜置12 h。對照組加入1 mL完全培養(yǎng)液，試驗(yàn)組每孔加入25、125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液，用完全培養(yǎng)液補(bǔ)足1 mL，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育12 h，棄上清液，加入0.5 μg/mL LPS孵育24 h，以0.5 μg/mL LPS孵育24 h作為陽性對照(LPS組)，收集上清液，根據(jù)Griess試劑說明書測定上清液中NO含量。

1.6.2 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞SOD和GSH-Px活性的影響

細(xì)胞處理同1.6.1，收集上清液，SOD和GSH-Px活性采用試劑盒測定，根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.7 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010整理后，采用GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著時采用Tukey氏法進(jìn)行多重比較，差異顯著性水平設(shè)為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液、完整細(xì)胞及胞內(nèi)提取物對DPPH、羥自由基和亞油酸清除率的影響

分別制備嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液、完整細(xì)胞及胞內(nèi)提取物，比較它們對DPPH、羥自由基和亞油酸清除率的影響，結(jié)果見圖1?？箟难嵋约笆人崛闂U菌培養(yǎng)物上清液、完整細(xì)胞和胞內(nèi)提取物的DPPH清除率(圖1-A)分別為96.63%、86.98%、16.24%和68.03%，羥自由基清除率(圖1-B)分別為54.03%、68.93%、33.61%和12.65%；嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液、完整細(xì)胞和胞內(nèi)提取物的亞油酸清除率(圖1-C)分別為15.21%、4.82%和6.75%。嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液的DPPH、羥自由基和亞油酸清除率均顯著高于嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物完整細(xì)胞和胞內(nèi)提取物(P<0.05)。因此，選用嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液作用于RAW 264.7細(xì)胞，探究嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞抗氧化的調(diào)節(jié)作用。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下圖同。

2.2 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞增殖的影響

由圖2可知，隨著嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液劑量增大，RAW 264.7細(xì)胞的細(xì)胞活力呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，與對照組相比，25、50和125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液顯著提高了RAW 264.7細(xì)胞的細(xì)胞活力(P<0.05)。

圖2 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞增殖的影響 Fig.2 Effects of Lactobacillus acidophilus culturesupernatant on proliferation of RAW 264.7 cells

2.3 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中NO含量的影響

由圖3可知，隨著嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液劑量增大，RAW 264.7細(xì)胞中NO含量逐漸升高。與對照組相比，5、25和50 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液提高了RAW 264.7細(xì)胞中NO含量，但無顯著差異(P>0.05)；125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液顯著提高了RAW 264.7細(xì)胞中NO含量(P<0.05)。

圖3 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中NO含量的影響 Fig.3 Effects of Lactobacillus acidophilus culture supernatant on NO content of RAW 264.7 cells

2.4 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中ROS水平的影響

由圖4可知，與對照組相比，5、25、50和125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中ROS水平均無顯著影響(P<0.05)。與5、25 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液相比，125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液顯著提高了RAW 264.7細(xì)胞中ROS水平(P<0.05)。

2.5 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中SOD和GSH-Px活性的影響

由圖5-A可知，與對照組相比，25和50 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液顯著提高了RAW 264.7細(xì)胞中SOD活性(P<0.05)，5和125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中SOD活性無顯著影響(P>0.05)。

由圖5-B可知，與對照組相比，5、25和50 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中GSH-Px活性無顯著影響(P>0.05)，125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液顯著降低了RAW 264.7細(xì)胞中GSH-Px活性(P<0.05)。

圖5 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中SOD、GSH-Px活性影響Fig.5 Effects of Lactobacillus acidophilus culture supernatant on SOD and GSH-Px activities of RAW 264.7 cells

2.6 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞中NO含量的影響

由圖6可知，與對照組相比，0.5 μg/mL LPS顯著提高了RAW 264.7細(xì)胞中NO含量(P<0.05)。與LPS組相比，25、125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液顯著降低了LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞中NO含量(P<0.05)。其中，125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液組RAW 264.7細(xì)胞中NO含量量顯著低于25 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液組(P<0.05)。

2.7 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞中SOD、GSH-Px活性的影響

由圖7-A可知，與對照組相比，0.5 μg/mL LPS降低了RAW 264.7細(xì)胞中SOD活性，但差異不顯著(P>0.05)。與LPS組相比，25、125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液顯著提高了LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞中SOD活性(P<0.05)。其中，125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液組RAW 264.7細(xì)胞中SOD活性顯著低于25 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液組(P<0.05)，但25、125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物組均顯著高于對照組和LPS組(P<0.05)。

由圖7-B可知，與對照組相比，0.5 μg/mL LPS顯著降低了RAW 264.7細(xì)胞中GSH-Px活性(P<0.05)。與LPS組相比，25 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液顯著提高了LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞中GSH-Px活性(P<0.05)。

-：未添加 not added；+：添加 added。下圖同 The same as below.

圖7 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞中SOD、GSH-Px活性的影響Fig.7 Effects of Lactobacillus acidophilus culture supernatant on SOD and GSH-Px activities of RAW 264.7 cells induced by LPS

3 討 論

3.1 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物不同組分清除自由基的效果比較

氧化應(yīng)激是自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種負(fù)面作用，被認(rèn)為是導(dǎo)致衰老和疾病的一個重要因素。益生菌的抗氧化功能可通過清除自由基的方式來減緩氧化應(yīng)激反應(yīng)，也可通過酶防御系統(tǒng)和非酶防御系統(tǒng)抵御ROS引起的氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)機(jī)體氧化損傷[13]。據(jù)報道，植物乳桿菌[5]、干酪乳桿菌亞種casei SY13和保加利亞乳桿菌LJJ[12]對DPPH和羥自由基具有清除能力，長雙歧桿菌ATCC 15708和嗜酸乳桿菌ATCC 4356[11]對DPPH和亞油酸具有清除能力，嗜熱鏈球菌821和長雙歧桿菌15708[14]、干酪乳桿菌KCTC 3260[15]的完整細(xì)胞和胞內(nèi)提取物均對羥自由基和亞油酸具有清除能力，鼠李糖乳桿菌[16]上清液也對DPPH具有清除能力。本研究也發(fā)現(xiàn)，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液、完整細(xì)胞和胞內(nèi)提取物對DPPH、羥自由基和亞油酸均具有清除能力，但清除能力不同；嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對DPPH、羥自由基和亞油酸清除能力高于嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物完整細(xì)胞和胞內(nèi)提取物，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物完整細(xì)胞對羥自由基清除能力高于嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物胞內(nèi)提取物，而嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物胞內(nèi)提取物對DPPH和亞油酸的清除能力高于嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物完整細(xì)胞，這種差異性與菌株的特定性質(zhì)有關(guān)。

3.2 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞增殖、釋放NO及氧化水平的影響

巨噬細(xì)胞是機(jī)體天然免疫系統(tǒng)重要的免疫細(xì)胞，在外來物質(zhì)刺激下，巨噬細(xì)胞活化、吞噬、溶解異物，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，是天然免疫和后天免疫的重要橋梁。研究表明，LPS通過激活誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)刺激巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)氧化應(yīng)激。維生素C可通過提高四氫生物喋呤的穩(wěn)定性來維持iNOS活性，從而保護(hù)巨噬細(xì)胞免受LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激[17]。

本研究分別將5、25、50和125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液作用于RAW 264.7細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5、25、50和125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞無毒性作用。而RAW 264.7細(xì)胞中NO含量與嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液具有劑量依賴性關(guān)系。研究表明，NO是脂溶性的，在生物膜中迅速擴(kuò)散，可以調(diào)節(jié)自然殺傷細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的功能活動，并影響幾種細(xì)胞因子的產(chǎn)生，增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能[18-19]。本研究中，RAW 264.7細(xì)胞中NO含量上升可能與免疫系統(tǒng)有關(guān)，但還需進(jìn)一步驗(yàn)證。

ROS是各種自由基的總稱，其在體內(nèi)積聚會導(dǎo)致炎癥等各種病理變化。本研究發(fā)現(xiàn)，5、25和50 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞中ROS水平無顯著影響，說明5、25和50 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液不會引起細(xì)胞內(nèi)ROS紊亂。

SOD和GSH-Px是細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶，可以防止氧化應(yīng)激[20]。植物乳桿菌C88能提高D-半乳糖處理小鼠機(jī)體的SOD和GSH-Px活性[21]。發(fā)酵乳桿菌可通過提高抗氧化酶，包括肝臟SOD、GSH-Px和過氧化氫酶(CAT)活性來保持正常豬的健康生長[22]。丹參酮ⅡA明顯逆轉(zhuǎn)了顱腦外傷誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡，MDA含量減少，SOD和GSH-Px活性增加[23]。本研究也發(fā)現(xiàn)，25和50 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液可引起RAW 264.7細(xì)胞SOD活性升高，但對GSH-Px活性無顯著影響；當(dāng)嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液劑量升高至125 μL時，可以顯著降低RAW 264.7細(xì)胞中SOD和GSH-Px活性。

綜上所述，與對照組相比，25和50 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液可促進(jìn)RAW 264.7細(xì)胞增殖，升高RAW 264.7細(xì)胞中NO含量和SOD活性；與25 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液相比，50 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液有提高NO含量、ROS水平和SOD、GSH-Px活性趨勢，但無顯著差異，而125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液抑制了SOD和GSH-Px活性。因此，選用25和125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液作用于后續(xù)試驗(yàn)。

3.3 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響

乳酸桿菌是一種益生菌，在自然界中分布廣泛，具有物種多樣性。一些乳酸桿菌及其代謝產(chǎn)物對機(jī)體氧化應(yīng)激具有較好的保護(hù)作用，是發(fā)揮其益生性的一個重要方面。研究表明，植物乳桿菌KSFY 06在體內(nèi)外通過提高SOD和GSH-Px活性，降低NO含量保護(hù)LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷[24]。原花青素通過抑制氧化應(yīng)激，下調(diào)放射性心臟損傷小鼠的MDA含量，上調(diào)SOD、GSH-Px活性，抑制心臟損傷[25]。Wang等[26]使用大腸桿菌(Escherichiacoli)O141∶K99誘導(dǎo)斷奶犢牛氧化應(yīng)激，β-葡聚糖能提高28日齡斷奶犢牛的抗氧化功能，降低EscherichiacoliO141∶K99感染后氧化應(yīng)激的發(fā)生率。本研究利用0.5 μg/mL LPS 37 ℃處理RAW 264.7細(xì)胞24 h后，可成功引起RAW 264.7細(xì)胞中NO含量顯著升高。選用25和125 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液處理12 h后，再以LPS刺激RAW 264.7細(xì)胞24 h的作用方式，評價嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液對RAW 264.7細(xì)胞氧化應(yīng)激的預(yù)防和保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，25 μL嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液可顯著升高RAW 264.7細(xì)胞中SOD和GSH-Px活性，降低NO含量。該結(jié)果表明嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液可同通過干預(yù)細(xì)胞SOD、GSH-Px活性，發(fā)揮對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用。

4 結(jié) 論

① 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液、完整細(xì)胞和胞內(nèi)提取物均具有清除DPPH、羥自由基和亞油酸的能力，其中嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物上清液的清除能力較強(qiáng)。

② 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液對RAW 264.7細(xì)胞具有抗氧化作用，可通過降低NO含量，提高SOD、GSH-Px活性調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞的氧化應(yīng)激。