吳 東，計(jì) 徐，周 芬，楊家軍，吳義景，夏倫志，朱洪龍，陳麗園，于 政，汪興生，謝繼奎

(1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031；2.申亞生物科技股份有限公司，安徽 阜陽(yáng) 236065)

益生菌發(fā)酵飼料是飼料原料接種益生菌菌種進(jìn)行發(fā)酵后獲得包含飼料原料、菌體及其代謝產(chǎn)物的混合物。發(fā)酵飼料不僅提高了飼料的營(yíng)養(yǎng)質(zhì)量和利用率，還為動(dòng)物提供了益生元、健康的微生物及代謝產(chǎn)物，發(fā)揮了促進(jìn)生長(zhǎng)的作用[1]。Yuan等(2017)[2]研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕對(duì)哺乳仔豬的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和糞便微生物群有積極作用。Zhu等(2018)[3]發(fā)現(xiàn)斷奶仔豬飼喂發(fā)酵豆粕可改善腸道菌群，進(jìn)而提升動(dòng)物機(jī)體的整體免疫水平和健康狀態(tài)。藍(lán)海恩等(2020)[4]研究表明，復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能、腸道微生物菌群、血清生化指標(biāo)、血清免疫指標(biāo)。益生菌發(fā)酵飼料具有豐富的脂肪酶、蛋白酶，同時(shí)能產(chǎn)生其特有的發(fā)酵酸香味以改善動(dòng)物對(duì)飼料的適口性，增加采食量，并提高飼料的消化率和增加動(dòng)物對(duì)飼料的消化能力，進(jìn)而提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能[5-6]。本試驗(yàn)研究益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能、血清免疫指標(biāo)及腸道菌群的影響，為選擇適宜的飼用抗生素替代飼料提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

益生菌發(fā)酵飼料：安徽省重點(diǎn)研究和開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“生豬無(wú)抗生素生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)集成與示范”項(xiàng)目組研制。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)于2020年7—8月在安徽省阜陽(yáng)市某豬場(chǎng)進(jìn)行。選擇體重15 kg左右、日齡相近的健康杜長(zhǎng)大三元雜種仔豬80頭(公母比1∶1)，隨機(jī)分為抗生素組和益生菌發(fā)酵飼料組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭，公母各半，單圈飼養(yǎng)。預(yù)試期6 d，正試期33 d?？股亟M在基礎(chǔ)飼糧中添加15%金霉素500 g/t、20%土霉素鈣預(yù)混1 000 g/t，益生菌發(fā)酵飼料組是90%基礎(chǔ)飼糧+10%益生菌發(fā)酵飼料。

1.3 試驗(yàn)飼糧及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)期間所有豬自由采食和飲水，每天清掃圈舍，以保持圈內(nèi)清潔，采取自由通風(fēng)，所有圈舍定期消毒，免疫消毒程序按照豬場(chǎng)常規(guī)方法進(jìn)行。

注：仔豬預(yù)混料可為每千克飼料提供維生素A 9 800 IU，維生素D3 2 500 IU，維生素E 35.0 IU，維生素K3 3.0 IU，煙酸60 mg，泛酸30.0 mg，吡哆醇 3.5 mg，核黃素4.5 mg，生物素0.08 mg，葉酸1.0 mg，硫胺素3.0 mg，鈷胺素0.05 mg，銅25 mg，鐵100 mg，錳40 mg，鋅80 mg，硒0.35 mg，碘0.6 mg。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)豬禁食(自由飲水)12 h后稱重，以重復(fù)為單位記錄始重和末重，統(tǒng)計(jì)耗料量，并計(jì)算各組的日增重、日采食量和料重比。

1.4.2 血清生化指標(biāo)和總抗氧化能力測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食12 h，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭豬進(jìn)行頸下靜脈采血，每頭采血10 mL，3 000 r/min離心15 min，于-20 ℃保存，待測(cè)；測(cè)定血糖(GLU)、總蛋白(TP)、尿素氮(UREA)含量，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，血清中總抗氧化能力(T-AOC)。采用南京建成公司試劑盒在酶標(biāo)儀上進(jìn)行分析檢測(cè)。

1.4.3 血清免疫指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食12 h，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭豬進(jìn)行頸下靜脈采血，每頭采血10 mL，3 000 r/min離心15 min，于-20 ℃保存，待測(cè)。測(cè)定血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量。采用南京建成公司試劑盒在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上進(jìn)行分析檢測(cè)。

1.4.4 腸道菌群的測(cè)定 盲腸糞便采集與處理：每個(gè)重復(fù)選取1頭豬，早晨飼喂1 h后，現(xiàn)場(chǎng)及時(shí)采集直腸糞便，直接在肛門(mén)采集(用已滅菌的棉簽伸入肛門(mén)取樣，無(wú)菌采集直腸末端新鮮糞球2～5 g滅菌離心管封裝，置于冰盒，直到完成整個(gè)采樣過(guò)程，整個(gè)過(guò)程保證在1 h以內(nèi)完成。低溫條件下帶回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。無(wú)菌操作臺(tái)中取盲腸糞便0.5 g于10 mL的滅菌離心管中，加入無(wú)菌生理鹽水4.5 mL，用漩渦混合儀混勻后進(jìn)行10-5～10-9倍比稀釋，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，乳酸菌和大腸桿菌分別在MRS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最終以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)lg(CFU/g)表示。

1.5 數(shù)據(jù)分析處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，抗生素組和益生菌發(fā)酵飼料組仔豬始重差異不顯著(P>0.05)；與抗生素組相比，益生菌發(fā)酵飼料組末重提高8.98%(P<0.01)，平均日增重提高18.20%(P<0.01)，平均日采食量提高0.88%(P>0.05)，料重比下降14.89%(P<0.01)。

表2 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)和總抗氧化能力的影響

由表3可知，與抗生素組相比，益生菌發(fā)酵飼料組中總抗氧化能力提高141.44%(P<0.01)；血糖下降10.47%(P>0.05)，總蛋白提高6.38%(P>0.05)，尿素氮提高2.23%(P>0.05)，谷草轉(zhuǎn)氨酶下降27.08%(P>0.05)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶下降37.34%(P<0.05)。

表3 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)和總抗氧化能力的影響

2.3 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，與抗生素組相比，益生菌發(fā)酵飼料組中IgA提高118.28%(P<0.01)，IgG下降35.60%(P>0.05)，免疫球蛋白M(IgM)提高37.31%(P>0.05)。

表4 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

2.4 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬腸道菌群的影響

由表5可知，與抗生素組相比，益生菌發(fā)酵飼料組中乳酸菌含量提高5.13%(P>0.05)，大腸桿菌含量下降15.48%(P<0.05)。

表5 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬腸道菌群的影響

3 討論

3.1 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

藍(lán)海恩等(2020)[4]研究表明，復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料組與對(duì)照組相比較，日均采食量提高0.66%(P＜0.05)，日均增重提高1.19%(P＜0.05)，說(shuō)明復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能。李志云等(2014)[7]用發(fā)酵配合飼料飼喂仔豬，同比用常規(guī)飼料飼喂，仔豬平均日增重增加18.06%。李泳寧等(2015)[8]研究了微生物發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響，發(fā)現(xiàn)分別添加0.5%、1.0%微生物發(fā)酵飼料的試驗(yàn)組日增重分別比對(duì)照組顯著提高13.32%、15.69%；1.0%微生物發(fā)酵飼料的料重比最低，比對(duì)照組顯著降低了12.89%。胡新旭等(2013)[9]發(fā)現(xiàn)斷奶仔豬20%無(wú)抗發(fā)酵飼料組平均日增重提高了6.37%，料重比降低了5.54%。本試驗(yàn)結(jié)果與上述報(bào)道基本一致，益生菌發(fā)酵飼料組平均日增重極顯著提高，料重比極顯著下降。

3.2 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)和總抗氧化能力的影響

藍(lán)海恩等(2020)[4]研究表明，復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料組與對(duì)照組相比較，血清中總蛋白含量和白蛋白含量分別提高7.44%(P＜0.05)和7.61%(P＜0.05)，血清中堿性磷酸酶含量降低5.75%(P＜0.05)。說(shuō)明復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的血清生化指標(biāo)。本試驗(yàn)中與抗生素組相比，益生菌發(fā)酵飼料組中總抗氧化能力提高141.44%(P<0.01)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶下降37.34%(P<0.05)；血糖、總蛋白、尿素氮、谷草轉(zhuǎn)氨酶兩組差異都不顯著(P>0.05)；本試驗(yàn)中益生菌發(fā)酵飼料組中總抗氧化能力和谷丙轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)極顯著改善，益生菌發(fā)酵飼料導(dǎo)致仔豬總抗氧化能力提升少見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，谷丙轉(zhuǎn)氨酶參與氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用，谷丙轉(zhuǎn)氨酶主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，當(dāng)肝細(xì)胞膜損傷時(shí)谷丙轉(zhuǎn)氨酶釋放到血液中(李忠榮等，2013)[10]；但總蛋白等指標(biāo)差異都不顯著，與上述報(bào)道不太一致，這其中的機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

3.3 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

藍(lán)海恩等(2020)[4]研究表明，復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料組與對(duì)照組相比較，血清中IgG、IgA、IgM含量分別提高18.90%(P＜0.05)、9.89%(P＜0.05)、1.19%(P＞0.05)，說(shuō)明復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的血清免疫指標(biāo)。Jiang等[11]對(duì)早期斷奶仔豬膳食補(bǔ)充活酵母(LY)或超細(xì)粉體酵母(SFY)，可提高飼料轉(zhuǎn)化率，增加仔豬十二指腸和仔豬空腸絨毛高度，提高了斷奶豬的免疫力。本試驗(yàn)中益生菌發(fā)酵飼料組中IgA極顯著提高，改善了仔豬血清免疫指標(biāo)，與上述報(bào)道的結(jié)果一致。

3.4 益生菌發(fā)酵飼料對(duì)仔豬腸道菌群的影響

藍(lán)海恩等(2020)[4]研究表明，復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料組與對(duì)照組相比較，盲腸、結(jié)腸、直腸中的大腸桿菌數(shù)分別降低2.39%(P＜0.05)、2.01%(P＜0.05)、1.64%(P＜0.05)，盲腸、結(jié)腸、直腸中的雙歧桿菌數(shù)分別提高1.20%(P＜0.05)、1.34%(P＜0.05)、1.20%(P＜0.05)，盲腸、結(jié)腸、直腸中的乳酸桿菌數(shù)分別提高2.14%(P＜0.05)、1.66%(P＜0.05)、2.05%(P＜0.05)，說(shuō)明復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的腸道微生物菌群。Yuan等(2017)[2]研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕對(duì)哺乳仔豬的糞便微生物群有積極作用。本試驗(yàn)中益生菌發(fā)酵飼料組中大腸桿菌含量顯著下降，乳酸菌含量有一定程度的提高，這與上述報(bào)道的結(jié)果一致。

4 結(jié)論

綜上所述，在仔豬飼糧中添加益生菌發(fā)酵飼料替代抗生素，豬的生長(zhǎng)性能、總抗氧化能力及免疫指標(biāo)顯著提高，腸道菌群結(jié)構(gòu)顯著改善。