王巍東，王晶晶，申家輝， 李志強(qiáng)

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院 輸血科，河南 新鄉(xiāng) 453003；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 腫瘤科，河南 衛(wèi)輝 453100；3.上海市第六人民醫(yī)院 輸血科，上海 200233)

ABO同型血液制劑供應(yīng)缺乏，無法確定患者血型的情況下，患者因大出血致失血性休克病情危重急，且不立即輸血會(huì)危及患者生命時(shí)，應(yīng)本著搶救生命為第一原則，可以實(shí)施相容性血液制劑輸注[1-3]。然而，不同劑量ABO血型相容性輸注后再次進(jìn)行紅細(xì)胞ABO血型鑒定及血液交叉匹配試驗(yàn)等血型血清學(xué)試驗(yàn)的研究國內(nèi)外報(bào)道甚少。因此，為了進(jìn)一步了解不同劑量ABO血型相容性輸注后再次進(jìn)行紅細(xì)胞ABO血型鑒定及血液交叉匹配試驗(yàn)的安全性，本研究進(jìn)行了不同劑量ABO血型相容性輸注后體外實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 血標(biāo)本采集患者血標(biāo)本由上海市第六人民醫(yī)院提供抗凝全血A、B、AB型血各100份。獻(xiàn)血者血標(biāo)本由上海市血液中心提供A、B、O、AB型懸浮紅細(xì)胞及全血各6單位。

1.2 試劑和儀器抗-A、抗-B血型定型試劑(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)20180611)，ABO血型反定型細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)20181126)，聚凝胺介質(zhì)試劑(珠海貝索生物技術(shù)有限公司，批號(hào)113101)，ABO血型/正反定型和RhD血型檢測(cè)卡(BIO-RAD Card，批號(hào)50093.49.05)。日本久保田公司的KUBOTA KA-2200紅細(xì)胞洗滌離心機(jī)，37 ℃空氣孵育箱和專用離心機(jī)。

1.3 分組按50 kg的個(gè)體，血容量8%的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算，共4 000 mL，血標(biāo)本等比例縮減為4 mL(1 000∶1)。體外模擬患者血容量4 000 mL，失血量為1 000 mL，殘留血容量3 000 mL。補(bǔ)充1 000 mL O型懸浮紅細(xì)胞，設(shè)定為3∶1紅細(xì)胞組；補(bǔ)充1 000 mL O型全血，設(shè)定為3∶1全血組。體外模擬患者血容量4 000 mL，失血量為2 000 mL，殘留血容量2 000 mL，補(bǔ)充2 000 mL O型懸浮紅細(xì)胞設(shè)定為1∶1紅細(xì)胞組；補(bǔ)充2 000 mL O型全血設(shè)定為1∶1全血組。體外模擬患者血容量4 000 mL，失血量為3 000 mL，殘留血容量1 000 mL，補(bǔ)充3 000 mL O型懸浮紅細(xì)胞設(shè)定為1∶3紅細(xì)胞組；補(bǔ)充3 000 mL O型全血設(shè)定為1∶3全血組。

1.4 方法分別將混合血液置于37 ℃孵箱1 h，每15 min混勻1次。應(yīng)用試管法及卡式法進(jìn)行紅細(xì)胞ABO血型正反定型，與輸注血液進(jìn)行聚凝胺法血液交叉匹配試驗(yàn)，按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程與判讀結(jié)果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[3]。

1.5 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)按照凝集強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：陰性為0分，±為1分，1+為2分，2+為3分，3+為4分，4+為5分。

2 結(jié)果

2.1 A、B、AB型患者輸注O型紅細(xì)胞后卡式法正定型抗A或抗B混合凝集A、B、AB型患者輸注O型懸浮紅細(xì)胞及全血后微柱凝膠卡式法正定型會(huì)出現(xiàn)混合型凝集現(xiàn)象，隨O型懸浮紅細(xì)胞及全血輸注比例增加其微柱凝膠卡式法正定型混合凝集強(qiáng)度逐漸減弱(P<0.05)。見表1。

表1 A、B、AB型患者輸注O型紅細(xì)胞后卡式法正定型抗A或抗B混合凝集情況

2.2 模擬輸注O型全血后進(jìn)行ABO血型卡式法反定型鑒定試驗(yàn)A、B、AB型血液與O型全血混合后，再次進(jìn)行ABO血型微柱凝膠法反定型會(huì)出現(xiàn)與血型不一致的凝集現(xiàn)象；且隨O型全血混合比例增加，其微柱凝膠法反定型凝集強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，二者呈正相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 A、B、AB型患者輸注O型全血后卡式法反定型A細(xì)胞或B細(xì)胞凝集情況

2.3 模擬輸注O型全血后與ABO同型全血交叉匹配試驗(yàn)A型血液與O型全血混合后，再與A型全血、B型血液與O型全血混合后再與B型全血進(jìn)行交叉匹配試驗(yàn)時(shí)，主次側(cè)均出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，且隨混合比例增加，凝集強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 全血組A、B、AB型患者輸注O型全血后再輸注同型全血聚凝胺法交叉匹配試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道，影響O型紅細(xì)胞輸注安全性主要涉及紅細(xì)胞中殘留血漿量和ABO抗體效價(jià)兩個(gè)方面，二者是決定O型紅細(xì)胞相容性輸注是否會(huì)引起溶血性輸血反應(yīng)的主要因素[5]。1例O型紅細(xì)胞輸注給A型患者而導(dǎo)致的急性溶血性輸血反應(yīng)，其原因是紅細(xì)胞中殘留血漿較多(55 mL)，且其血清抗-A抗體效價(jià)高達(dá)1 024[6]。我國國家標(biāo)準(zhǔn)《全血及成分血質(zhì)量要求》和《全血及成分血質(zhì)量檢測(cè)指南》中沒有明確規(guī)定懸浮紅細(xì)胞中血漿殘留量，但要求血細(xì)胞比容應(yīng)為0.50～0.65[7-8]，推測(cè)其血漿殘留量應(yīng)控制在10～15 mL。Lefebre等[9]發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞中殘留血漿輸入患者體內(nèi)后，可導(dǎo)致患者血液出現(xiàn)短暫的直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性，以及輕微溶血。

本文研究結(jié)果顯示，A、B、AB型患者輸注O型懸浮紅細(xì)胞及全血后微柱凝膠卡式法正定型會(huì)出現(xiàn)混合型凝集現(xiàn)象，隨O型懸浮紅細(xì)胞及全血輸注比例增加其微柱凝膠卡式法正定型混合凝集強(qiáng)度逐漸減弱。表明O型懸浮紅細(xì)胞及全血輸注量越大，對(duì)患者ABO血型正定型影響也越大。在使用微柱凝膠卡式法進(jìn)行血型鑒定時(shí)，倘若正定型出現(xiàn)混合凝集現(xiàn)象應(yīng)可詢問患者或/和家屬排除患者輸注過O型紅細(xì)胞及全血情況后，再考慮患者抗原減弱。通常情況下，可將患者血液通過毛細(xì)管離心法將自身紅細(xì)胞和輸入紅細(xì)胞分離后，再進(jìn)行紅細(xì)胞定型。本文研究結(jié)果顯示，A、B、AB型患者輸注O型全血后微柱凝膠卡式法反定型會(huì)出現(xiàn)與患者血型不一致的凝集現(xiàn)象，隨O型全血輸注比例增加其微柱凝膠卡式法反定型凝集強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，說明不同比例輸注全血有顯著性差異，即輸注量越大，凝集強(qiáng)度越強(qiáng)，對(duì)患者血型反定型影響越大。另外，A型患者再輸注A型全血、B型患者再輸注B型全血后進(jìn)行血液交叉匹配試驗(yàn)主次側(cè)均可出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，且隨輸注比例增加凝集強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。AB型患者再輸注AB型全血時(shí)進(jìn)行血液交叉匹配試驗(yàn)，主側(cè)出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，且隨輸注比例增加凝集強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，次側(cè)在3∶1組未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，隨輸注比例增加到1∶1甚至1∶3時(shí)凝集強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，究其原因，AB型血漿內(nèi)不含抗A抗B無法與A、B抗原結(jié)合，所以在輸入量<1 000 mL時(shí)未出現(xiàn)凝集，但是當(dāng)輸入量>1 000 mL時(shí)次側(cè)聚凝胺法交叉配血出現(xiàn)部分AB型供血者血漿與患者紅細(xì)胞凝集，這可能為患者輸注大量O型血漿引起直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性所致[9]。

A、B、AB型患者輸注O型懸浮紅細(xì)胞后鑒定患者血型正定型難度增加，但臨床主要通過觀察血液交叉匹配實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定供患血液是否匹配，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)未對(duì)其產(chǎn)生影響，所以理論上輸注O型懸浮紅細(xì)胞是安全的。然而作者在2019版血站技術(shù)操作規(guī)范[10]中并未找到有關(guān)紅細(xì)胞殘余血漿量的規(guī)定，所以在臨床緊急輸血時(shí)，應(yīng)輸注O型洗滌紅細(xì)胞以減少血漿的輸入[11]?；颊咻斪型全血對(duì)患者ABO血型正反定型及血液交叉匹配均產(chǎn)生影響，所以不推薦對(duì)非O型患者輸注O型全血。值得關(guān)注的是，當(dāng)O型全血輸入量<1 000 mL時(shí)，部分患者的血液交叉匹配實(shí)驗(yàn)為陰性，部分為弱陽性(可能為抗球蛋白陽性影響實(shí)驗(yàn)所致)，因本實(shí)驗(yàn)條件所限，不能實(shí)際觀察患者真正輸入全血后體內(nèi)所產(chǎn)生的一系列變化，所以是否可以對(duì)所有非O型患者輸注≤1 000 mL的O型全血有待進(jìn)一步研究。