邵長年

【摘要】目的：探析熒光定量PCR檢測(cè)HBV核酸診斷的臨床價(jià)值。方法：選取2020年1月至12月期間本站就診的200例體檢者，均需要采集HBV血清樣本，并進(jìn)行熒光定量PCR核酸檢測(cè)及免疫標(biāo)志物檢測(cè)。觀察熒光定量PCR檢測(cè)及免疫標(biāo)志物檢測(cè)相關(guān)結(jié)果結(jié)果：200例HBV血清樣本中，102例HBV-DNA樣本呈陰性，98例為陽性，陽性最低定量為1.87*103/mL，陽性最高定量為9.47*103/mL，HBV免疫標(biāo)志物檢出陽性率104例（52.00%）；其中大三陽（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）組樣本48例（46.15%），小三陽（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）樣本56例（53.85%）；采用HBV-DNA定量檢測(cè)，大三陽陽性檢出率（46.08%）；小三陽性檢出率（53.92%）；兩組樣本陽性檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。結(jié)論：熒光定量PCR檢測(cè)HBV核酸診斷臨床效果顯著，可診斷結(jié)果較為精準(zhǔn)，可有效反映出HBV在體內(nèi)的復(fù)制結(jié)果，相較于免疫標(biāo)志物檢測(cè)具有更好的靈敏度及特異性，值得臨床推廣。

【關(guān)鍵詞】熒光定量PCR；HBV；核酸診斷；臨床價(jià)值

[中圖分類號(hào)]R450 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2096-5249（2021）07-0151-02

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）是通過肝細(xì)胞膜上鈉離子-牛磺膽酸一協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白受體侵入肝細(xì)胞，引起病毒性免疫應(yīng)答，導(dǎo)致肝細(xì)胞出現(xiàn)炎癥、損害或壞死。主要經(jīng)由母嬰、血液、性接觸途徑進(jìn)行傳播，傳播率較廣，若不及時(shí)干預(yù)控制將可能導(dǎo)致病毒感染率明顯增加，感染者近戰(zhàn)位肝硬化或肝癌。因此為了降低HBV感染風(fēng)險(xiǎn)，保證我國國民安全，我們有必要采取積極預(yù)防措施[1]。目前臨床采用保護(hù)易感人群、管理傳染源、切斷傳播途徑方法，而精確檢測(cè)HBV確診患者及潛在高危人群可以有利于疫情防控人員管理的高效率及高質(zhì)量。HBV核酸診斷檢測(cè)可以直接反映機(jī)體內(nèi)HBV復(fù)制情況，進(jìn)而獲得更為精確的診斷結(jié)果，更適用于臨床診斷[2]。隨著乙型肝炎流行病學(xué)的變化，臨床對(duì)HBV核酸診斷提出了更高標(biāo)準(zhǔn)，而熒光定量PCR具有較高的靈敏度、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)，在HBV核酸檢測(cè)中應(yīng)用越來越廣泛?；诖耍狙芯繉?duì)熒光定量PCR檢測(cè)HBV核酸診斷的臨床價(jià)值進(jìn)行分析，試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至12月期間本站就診的200體檢者，采集HBV血清樣本并進(jìn)行熒光定量PCR核酸檢測(cè)及免疫標(biāo)志物檢測(cè)。體檢者資料如下：男123例、女77例，年齡21～57歲，平均年齡（39.45±2.73）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡為18-75歲；體檢者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝硬化、肝功能不全等相關(guān)疾病者；存在精神意識(shí)障礙或認(rèn)知障礙者。

1.2方法 所有體檢者均需要采集HBV血液樣本，并進(jìn)行熒光定量PCR核酸檢測(cè)及免疫標(biāo)志物檢測(cè)。免疫標(biāo)志物檢測(cè)操作如下：采用FAME全自動(dòng)酶分析儀（來源：瑞士HAMILTON）及HBV-M試劑盒（ELISA）（來源：廈門新創(chuàng)科技有限公司）進(jìn)行檢測(cè)，按照說明書進(jìn)行嚴(yán)格操作，依據(jù)檢測(cè)結(jié)果將乙肝患者分為四類：大三陽（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、小三陽（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）、HBsAg單獨(dú)+、HBsAb單獨(dú)+（注：+表明為陽性）。

熒光定量PCR檢測(cè)方法操作如下：采用熒光定量 PCR儀（來源：羅氏Cobas-z480）及HBV DNA熒光定量PCR試劑盒（來源：上?？迫A生物工程股份有限公司），提取HBV-DNA，直接在PCR反應(yīng)管中加入5 μL 核酸釋放劑，并加入同等劑量標(biāo)本（血清、血漿、標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品及質(zhì)控品），運(yùn)用移液槍反復(fù)吹打混勻后，靜置10 min再加入40 μL 配置好的反應(yīng)液，再放置于熒光定量 PCR 儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增及核酸檢測(cè)，熱循環(huán)條件為：93℃預(yù)變性2 min，94℃5 s，60℃35 s，循環(huán)40次，再60℃時(shí)收集熒光信號(hào)，再進(jìn)行自動(dòng)分析計(jì)算定量結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo) 觀察HBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果情況。分析HBV免疫標(biāo)志物及DNA定量陽性結(jié)果之間的關(guān)系：熒光定量PCR檢測(cè)陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)為：與陽性模板進(jìn)行對(duì)照，另取10μLPCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，與紫外燈下觀察，該擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)與陽性模板位置相同的特異性條帶，HBV-DNA定量拷貝數(shù)<1*103/ mL判讀為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將HBV檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)納入SPSS23.0軟件中分析，計(jì)數(shù)資料（檢測(cè)結(jié)果）采用c2檢驗(yàn)，并以率（%）表示件處理，P<0.05為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1觀察HBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果情況 200例HBV血清樣本中，102例HBV-DNA樣本呈陰性，98例為陽性，陽性最低定量為1.87*103，陽性最高定量為9.47*103，詳見表1。

2.2分析HBV免疫標(biāo)志物及DNA定量陽性結(jié)果之間的關(guān)系 HBV免疫標(biāo)志物檢出陽性率104例（52.00%）；其中大三陽（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）組樣本48例（46.15%），小三陽（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）樣本56例（53.85%）；采用HBV-DNA定量檢測(cè)，大三陽陽性檢出率（46.08%）；小三陽性檢出率（53.92%）；兩組樣本陽性檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。詳見表2。

3 討論

HBV感染呈現(xiàn)世界性流行趨勢(shì)，各地區(qū)HBV感染流行強(qiáng)度差異較大，據(jù)我國疾控預(yù)防控制中心（Centers for Disease Control， CDC）研究調(diào)查顯示，慢性HBV感染者約7000萬例，因此我國防治HBV形勢(shì)嚴(yán)峻，需要加強(qiáng)HBV診斷、預(yù)防工作，積極檢測(cè)HBV感染標(biāo)志物，做到早診斷早治療，降低疾病危害，進(jìn)而推動(dòng)世界衛(wèi)生組織（World Health Organization， WHO）提出的消除病毒性肝炎目標(biāo)實(shí)現(xiàn)。臨床主要采用HBV血清標(biāo)志物進(jìn)行診斷，通過了解機(jī)體免疫狀態(tài)，間接性反映出病毒復(fù)制情況，但該檢查手段存在一定局限性，當(dāng)病毒處于變異狀態(tài)或窗口期時(shí)，出現(xiàn)假陰性結(jié)果的概率極高[3]。因此有必要尋找診斷更精確，適用范圍更廣的診斷技術(shù)。

本研究結(jié)果顯示，HBV免疫標(biāo)志物檢出陽性率與采用HBV-DNA定量檢測(cè)陽性檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。熒光定量PCR屬于有效定量檢測(cè)方法，其工作原理是通過，操作較為簡(jiǎn)便，可以降低核酸交叉感染風(fēng)險(xiǎn)，且檢測(cè)性能較高可以滿足臨床檢測(cè)需求[4]。且HBV-DNA定量檢測(cè)可以準(zhǔn)確反映出HBV復(fù)制具體情況[5]。血清標(biāo)志物檢測(cè)（HBV-M）主要是通過反映人體對(duì)HBV的免疫反映狀態(tài)，間接反映出HBV復(fù)制情況；而HBV核酸診斷可以直接定量檢測(cè)，對(duì)于臨床診斷感染情況及療效評(píng)估有著更好的指導(dǎo)意義。熒光定量PCR檢測(cè)可以縮短HBV感染后的窗口期，同時(shí)對(duì)于突變株來說，DNA診斷為監(jiān)測(cè)的唯一可靠指標(biāo)，同時(shí)該技術(shù)具有較好的靈敏度及重復(fù)性，可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)目的基因擴(kuò)增數(shù)量，定量評(píng)估并區(qū)分乙肝病毒。

綜上所述，熒光定量PCR檢測(cè)HBV核酸診斷臨床效果顯著，可診斷結(jié)果較為精準(zhǔn)，可有效反映出HBV在體內(nèi)的復(fù)制結(jié)果，相較于免疫標(biāo)志物檢測(cè)具有更好的靈敏度及特異性，值得臨床推廣。

參考文獻(xiàn)

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