龔翠蘭 周德生 楊仁義 傅馨瑩

摘要 目的：采用GEO芯片數(shù)據(jù)及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，分析腦梗死疾病基因，并對化痰通絡(luò)湯治療腦梗死風(fēng)痰阻絡(luò)證的作用機制進行探討，為腦梗死的中醫(yī)藥防治提供理論依據(jù)。方法：采用多學(xué)科交叉方法對化痰通絡(luò)湯治療腦梗死風(fēng)痰阻絡(luò)證進行研究，整合GEO、GeneCards、TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction、String、WebGestalt數(shù)據(jù)庫資源，利用Cytoscape、R語言軟件，對腦梗死差異基因、疾病靶點、化痰通絡(luò)湯的中藥有效成分、中藥靶點進行篩選，從蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）共表達網(wǎng)絡(luò)、GO及KEGG富集分析角度，探討化痰通絡(luò)湯治療腦梗死風(fēng)痰阻絡(luò)證的所用機制。結(jié)果：獲取3 110個腦梗死疾病靶點，其中203個差異基因，198個在腦梗死疾病中表達上調(diào)，5個在腦梗死疾病中表達下調(diào)，可作為診斷及治療的潛在靶點。PPI網(wǎng)絡(luò)及Degree、Betweenness、Closeness算法拓撲分析結(jié)果顯示，PI3KCA、MAPK1、EGFR等48個靶點相互作用最強，可作為后續(xù)基礎(chǔ)研究驗證方向。GO、KEGG富集分析結(jié)果顯示，BP共富集354個生物進程，CC共富集16個細胞組分，MF共富集29個分子功能，KEGG共富集137個信號通路，結(jié)合FDR、ratio與P值結(jié)果對富集分析結(jié)果進行權(quán)重分析，進一步聚焦其富集結(jié)果。結(jié)論：化痰通絡(luò)湯可針對性上調(diào)GFAP、CD14、STAT3、H19、CXCL16等，下調(diào)NAT8F3、OLR59、GPR88等，以多組分、多功能、多途徑的形式介導(dǎo)鞘脂信號通路、VEGF通路、HIF-1通路等多通路在腦梗死風(fēng)痰阻絡(luò)證中發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞 基因表達綜合;差異基因;化痰通絡(luò)湯;腦梗死;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);風(fēng)痰阻絡(luò)證;KEGG富集分析;靶點

Abstract Objective：To analyze the disease genes of cerebral infarction by GEO chip data and network pharmacology methods，and to explore the mechanism of Huatan Tongluo Decoction in the treatment of cerebral infarction with the syndrome of wind-phlegm obstructing collaterals，so as to provide theoretical basis for the prevention and treatment of cerebral infarction with traditional Chinese medicine（TCM）.Methods：Interdisciplinary methods were used to study the treatment of Huatan Tongluo Decoction for syndrome of wind-phlegm obstructing collaterals of cerebral infarction.The database resources of GEO，GeneCards，TCMSP，PubChem，Swiss Target Prediction，String and WebGestalt were integrated，and the differential genes of cerebral infarction，disease targets，effective components and targets of Huatan Tongluo Decoction were screened by Cytoscape and R language software.From the point of view of PPI co-expression network，GO and KEGG enrichment analysis，the mechanism of Huatan Tongluo Decoction in treating cerebral infarction with syndrome of wind-phlegm obstructing collaterals was explored tentatively.Results：A total of 3 110 targets of for cerebral infarction diseases were obtained， of which there were 203 differential genes. There were 198 up-regulated in cerebral infarction diseases， and there were 5 down-regulated in cerebral infarction diseases， which can be used as potential targets for diagnosis and treatment.The topology analysis results of PPI network，Degree，Betweenness，and Closeness algorithms showed that 48 targets such as PI3KCA，MAPK1 and EGFR interacted most strongly，which can be used as the direction of follow-up basic research.The results of GO and KEGG enrichment analysis showed that BP enriched 354 life processes，CC enriched 16 cell components，MF enriched 29 Molecular functions，and KEGG enriched 137 signal pathways.Combined with the results of FDR，ratio and P value，the weight analysis results were analyzed to further focus on the enrichment results.Conclusion：Huatan Tongluo Decoction could up-regulate/down-regulate target genes（up-regulated GFAP，CD14，STAT3，H19，CXCL16，etc. and down-regulate NAT8F3，OLR59，GPR88，etc.）in the form of multi-component，multi-function and multi-pathway，mediate sphingolipid signal pathway，VEGF pathway，HIF-1 pathway and other pathways were playing a roles in the syndrome of wind-phlegm obstructing collaterals in cerebral infarction.

Keywords Gene Expression Omnibus; Differential gene; Huatan Tongluo Decoction; Cerebral infarction; Network pharmacology; Syndrome of wind phlegm obstructing collaterals; KEGG enrichment analysis; Target

中圖分類號：R255.2;R743.3文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.09.010

腦梗死屬中醫(yī)“缺血中風(fēng)”范疇，是臨床常見病、多發(fā)病，具有高致殘率、致死率的特點，嚴重危害人類健康，因此腦梗死的中醫(yī)藥防治具有重要意義[1]?！吨袊X梗死中西醫(yī)結(jié)合診治指南（2017）》指出[2]，腦梗死中經(jīng)絡(luò)期風(fēng)痰阻絡(luò)證者，以突發(fā)半身不遂、偏身麻木、痰多而黏，脈弦等癥狀為主要表現(xiàn)，以熄風(fēng)化痰、活血通絡(luò)之法，方用化痰通絡(luò)湯治之。本研究整合GEO芯片數(shù)據(jù)，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)模式，探討腦梗死疾病潛在靶點，并對治療缺血中風(fēng)風(fēng)痰阻絡(luò)證的化痰通絡(luò)湯進行初步的機制分析，為中醫(yī)藥防治腦梗死提供理論和實踐依據(jù)[3]。

1 材料與方法

1.1 腦梗死疾病靶點篩選 利用基因表達綜合（Gene Expression Omnibus，GEO）數(shù)據(jù)庫（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/），以“Cerebral infarction”為檢索詞，獲取GSE97537數(shù)據(jù)集，下載MCAO與Sham組芯片數(shù)據(jù)，即MCAO組（GSM2571735、GSM2571736、GSM2571737、GSM2571738、GSM2571739、GSM2571740、GSM2571741）共7組;Sham組（GSM2571742、GSM2571743、GSM2571744、GSM2571745、GSM2571746）共5組。

采用R語言對下載的GSE97537數(shù)據(jù)集表達矩陣進行質(zhì)量控制，繪制箱式圖及主成分分析圖;采用limma包對表達矩陣進行差異性分析，logFC≥1與adj.P.Val<0.05為差異基因篩選條件，以篩選出腦梗死疾病差異基因，并繪制火山圖與前50位熱圖。同時整合通過GeneCards（https：//www.genecards.org/）數(shù)據(jù)庫中“Cerebral infarction”為檢索詞的腦梗死疾病相關(guān)靶點，與腦梗死疾病差異基因取并集，得到腦梗死疾病靶點。

1.2 化痰通絡(luò)湯潛在藥物靶點篩選 化痰通絡(luò)湯有效成分及結(jié)構(gòu)式收集：1）采用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）（http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）數(shù)據(jù)庫[4]，以藥代動力學(xué)ADMT參數(shù)中，口服生物利用度（Oral Bioavailability，OB）≥30%，藥物類藥性（Drug Likeness，DL）≥0.18為條件[5]，獲取茯苓、半夏、白術(shù)、天麻、天南星、天竺黃、丹參、香附、大黃、三七10味中藥有效成分。2）采用PubChem[6]（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫收集各有效成分SDF結(jié)構(gòu)式。

化痰通絡(luò)湯潛在藥物靶點收集：采用Swiss Target Prediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/）數(shù)據(jù)庫[7]，將有效成分結(jié)構(gòu)式導(dǎo)入數(shù)據(jù)庫，獲取化痰通絡(luò)湯潛在藥物靶點。

1.3 共同靶點篩選及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（Protein Protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將1.1中的腦梗死疾病靶點（簡稱：疾病靶點）與1.2中化痰通絡(luò)湯潛在藥物靶點（簡稱：藥物靶點）利用EXCEL取交集，并繪制韋恩圖，獲取化痰通絡(luò)湯治療腦梗死的共同靶點。

利用String[8]（https：//string-db.org/）數(shù)據(jù)庫，將共同靶點導(dǎo)入數(shù)據(jù)庫，獲取PPI相關(guān)信息。利用Cytoscape軟件對PPI信息進行網(wǎng)絡(luò)可視化，并對PPI網(wǎng)絡(luò)進行Degree、Betweenness、Closeness算法拓撲分析。對PPI網(wǎng)絡(luò)Degree、Betweenness、Closeness算法拓撲分析的靶點進行整合，采用EXCEL去除重復(fù)值保留唯一值，以獲取拓撲分析靶點。

1.4 拓撲分析靶點GO和KEGG富集分析 利用WebGestalt[9]（http：//www.webgestalt.org/#）數(shù)據(jù)庫，采用ORA算法，將拓撲分析靶點導(dǎo)入，進行GO、KEGG富集分析，收集生物進程（Biological Process，BP）、細胞組分（Cellular Component，CC）、分子功能（Molecular Function，MF）及KEGG富集分析數(shù)據(jù)，同時進行權(quán)重分析，并繪制火山圖。

2 結(jié)果

2.1 腦梗死疾病靶點篩選結(jié)果 利用GEO數(shù)據(jù)庫，獲取GSE97537數(shù)據(jù)集，采用R語言affyPLM與limma包對GSE97537進行歸一化與差異分析，并繪制數(shù)據(jù)歸一化箱數(shù)圖（圖1A）、GSE97537各組主成分分析圖（PCA，圖1B）、差異基因火山圖（圖1C）及前50位差異基因熱圖（圖1D）。歸一化及PCA結(jié)果顯示GSE97537數(shù)據(jù)集中各數(shù)據(jù)處于同一數(shù)量級，可進行綜合分析。火山圖及熱圖結(jié)果中，篩選出腦梗死疾病差異基因共203個，其中198個差異基因在腦梗死疾病中表達上調(diào)（如CCL2、HSPB1、HSPA1A等）;5個差異基因在腦梗死疾病中表達下調(diào)（如NAT8F3、GPR88、SYNDIG1L等）。

為進一步補充腦梗死疾病靶點，檢索并整合GeneCards數(shù)據(jù)庫中腦梗死疾病相關(guān)靶點，共檢索出腦梗死疾病相關(guān)靶點3 110個，并與腦梗死疾病差異基因取并集，去除重復(fù)值保留唯一值后，最終獲得腦梗死疾病靶點3 218個，其中有95個（圖2A）為GEO數(shù)據(jù)挖掘的腦梗死差異基因與GeneCards數(shù)據(jù)庫中腦梗死疾病相關(guān)靶點的重復(fù)靶點（如IL6、IL1B、FGF2等）。

2.2 化痰通絡(luò)湯潛在藥物靶點篩選結(jié)果 利用TCMSP數(shù)據(jù)庫，根據(jù)OB≥30%，DL≥0.18為初篩條件，獲取10味中藥有效成分，其中茯苓15個（如pachymic acid、trametenolic acid、ergosta-7，22E-dien-3beta-ol等）;半夏13個（如24-Ethylcholest-4-en-3-one、Cavidine、baicalein等）;白術(shù)7個（如12-senecioyl-2E，8E，10E-atractylentriol、α-Amyrin、3β-acetoxyatractylone等）;天麻21個（如Vanillin、Succinic Acid、Gastrodamine等）;天南星7個（如8，11，14-Docosatrienoic acid，methyl ester、24-epicampesterol、beta-sitosterol等）;天竺黃無;丹參65個（如6-o-syringyl-8-o-acetyl shanzhiside methyl ester、Baicalin、digallate等）;香附18個（如Chryseriol、isorhamnetin、8-Isopentenyl-kaempferol等）;大黃16個[如：Toralactone、aloe-emodin、（-）-catechin等];三七8個（如Mandenol、Stigmasterol、ginsenoside f2等）。采用PubChem數(shù)據(jù)庫收集上述有效成分SDF結(jié)構(gòu)式。

利用Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫預(yù)測化痰通絡(luò)湯潛在藥物靶點，去除重復(fù)值保留唯一值后，共獲取824個化痰通絡(luò)湯藥物潛在靶點（如PTGES、VEGFA、STAT1等）。

2.3 共同靶點篩選結(jié)果及PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將3 218個腦梗死疾病靶點與824個化痰通絡(luò)湯藥物靶點利用EXCEL取交集，并繪制韋恩圖（圖2A），獲取化痰通絡(luò)湯治療腦梗死的共同靶點共463個（如STAT3、IL6、JUN等）。

將463個共同靶點導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫，獲取PPI相關(guān)信息，利用Cytoscape軟件對PPI信息進行網(wǎng)絡(luò)可視化（圖2B），并對PPI網(wǎng)絡(luò)進行Degree、Betweenness、Closeness算法拓撲分析，并進行可視化（圖2C、D、E）。PPI網(wǎng)絡(luò)中，有463個節(jié)點，4 322條邊，P<1.0e-16，其中大紅色為50≤Degree≤84;藍色為30≤Degree值<50;粉紅色為1≤Degree值<30，選取PPI網(wǎng)絡(luò)中前30位的Degree、Betweenness、Closeness算法拓撲分析結(jié)果。見表1。將PPI網(wǎng)絡(luò)Degree、Betweenness、Closeness算法拓撲分析的前30位靶點進行整合，獲得拓撲分析靶點共48個（如PI3KCA、MAPK1、EGFR等），可作為后續(xù)重點實驗驗證對象。

2.4 拓撲分析靶點GO和KEGG富集分析 BP共富集354個生物進程，結(jié)合FDR、ratio與P值結(jié)果權(quán)重分析，并繪制火山圖（圖3A），主要富集于促進細胞運動、循環(huán)系統(tǒng)過程、免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)途徑、二價無機陽離子穩(wěn)態(tài)、肽蘇氨酸修飾與脂質(zhì)代謝過程的調(diào)節(jié)等生物進程。

CC共富集16個細胞組分，結(jié)合FDR、ratio與P值結(jié)果權(quán)重分析，并繪制火山圖（圖3B），主要富集于膜區(qū)、囊泡腔、谷氨酸能突觸、富含ficolin-1的顆粒、膜面、軸突部分、膜的外在成分等細胞組分。

MF共富集29個細胞功能，結(jié)合FDR、ratio與P值結(jié)果權(quán)重分析，并繪制火山圖（圖3C），主要富集于G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合、磷脂酰肌醇雙磷酸激酶活性、蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合等細胞功能。

KEGG共富集137個信號通路，結(jié)合FDR、ratio與P值結(jié)果權(quán)重分析，并繪制火山圖（圖3D），主要富集于鞘脂信號通路、VEGF信號通路、C型凝集素受體信號通路、神經(jīng)營養(yǎng)蛋白信號通路、cAMP信號通路、HIF-1信號通路、TRP通道的炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)通路。

3 討論

腦梗死具有高致殘率、高死亡率的特點，是常見病、多發(fā)病。腦梗死屬“缺血中風(fēng)”，病因不外乎風(fēng)、火、痰、瘀、虛、氣、血六端，病機總屬本虛標實，以氣血虧虛、肝腎陰虛為本，風(fēng)火痰瘀為標[10]。中風(fēng)風(fēng)痰阻絡(luò)之證，肝脾腎虛，精微氣血不足或運化無力，聚濕成痰，痰濕內(nèi)停，瘀血內(nèi)生，痰瘀阻滯腦絡(luò)，發(fā)為中風(fēng)，治療上當以熄風(fēng)化痰、活血通絡(luò)之化痰通絡(luò)湯治之。隨著高通量測序及計算機算法的發(fā)展，基于芯片數(shù)據(jù)及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，初步探討化痰通絡(luò)湯治療腦梗死風(fēng)痰阻絡(luò)證的作用機制，為實驗研究提供方向，為臨床研究提供理論基礎(chǔ)，為中醫(yī)藥防治腦梗死提供實踐依據(jù)。

本研究利用GEO、GeneCards數(shù)據(jù)庫篩選出腦梗死差異基因與疾病基因，為腦梗死的診斷及防治提供了精準靶點;同時利用TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫篩選出化痰通絡(luò)湯有效成分及其治療靶點，為化痰通絡(luò)湯治療腦梗死風(fēng)痰阻絡(luò)證提供了靶點依據(jù);最后對疾病靶點與中藥靶點綜合分析，篩選出化痰通絡(luò)湯治療腦梗死風(fēng)痰阻絡(luò)證的可能靶點，并采用String、WebGestalt數(shù)據(jù)庫對靶點進行PPI網(wǎng)絡(luò)分析和GO、KEGG富集分析，為進一步明確作用機制提供了理論方向。

本研究通過GEO數(shù)據(jù)庫共篩選出203個腦梗死差異基因，其中CCL2、HSPB1、GSPB1、GFAP、CD14、STAT3、H19、CXCL16等198個基因表達上調(diào);NAT8F3、OLR59、GPR88、PAMR1、SYNDIG1L 5個基因表達下調(diào);GeneCards數(shù)據(jù)庫共篩選3 110個腦梗死相關(guān)靶點，涵蓋IL6[11]、GFAP[12]、TNF[13]、IL1B[14]、JUN[15]等95個差異基因，其中有大部分被文獻報道，在腦梗死疾病中異常表達，可作為腦梗死診斷治療的潛在靶點。Li等[11]研究發(fā)現(xiàn)鳶尾素可降低腦梗死小鼠TNF-1α、IL-6水平，抑制IL-1β的活化，激活A(yù)kt/ERK1信號通路，減少缺血區(qū)神經(jīng)元損傷;團隊前期發(fā)現(xiàn)活血榮絡(luò)方下調(diào)JAK2、STAT3表達，減輕大鼠腦缺血再灌注損傷炎癥反應(yīng)，對神經(jīng)元起到保護作用[16]。因此基于GEO、GeneCards數(shù)據(jù)庫篩選的腦梗死疾病基因，可作為腦梗死診斷、精準治療的靶點基因，為臨床及機制研究提供了理論依據(jù)。

中風(fēng)之風(fēng)痰阻絡(luò)證者，偏食肥甘醇酒之類，脾失鍵運，濕痰內(nèi)生;或逸多勞少，形體肥重，痰濕氣虛，痰濕聚集，肝陽化風(fēng)，風(fēng)痰夾濕，阻滯脈絡(luò)，上擾清竅，則見眩暈頭疼、手足麻木、半身不遂、口角歪斜等癥，當以化痰通絡(luò)湯加減治之?；低ńj(luò)湯[17]以化痰逐瘀、祛風(fēng)通絡(luò)為治法，由茯苓、半夏、生白術(shù)、天麻、天南星、天竺黃、丹參、香附、大黃、三七等組成，其中，半夏燥濕化痰，香附理氣和中，二者為君藥合用，增強燥濕化痰之力，體現(xiàn)治痰先理氣，氣順則痰消之意;天南星、天竺黃清熱化痰，既助半夏化痰，又熄風(fēng)定驚;大黃通腑瀉熱、涼血逐瘀，使腑氣暢通而痰火得以清化;丹參、三七行氣、活血化瘀，此四味共為臣藥;天麻熄風(fēng)定眩，為佐藥;生白術(shù)、茯苓健脾利濕，健脾以杜生痰之源，利濕以助化痰之力，為使藥。綜合全方，溫涼兼進，共奏化痰祛瘀、熄風(fēng)通絡(luò)之良效。為進一步探討化痰通絡(luò)湯在腦梗死中醫(yī)藥防治中的作用機制，本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，利用TCMSP、Pubchem、Swiss Target Prediction、String、WebGestalt數(shù)據(jù)庫，獲取化痰通絡(luò)湯各中藥有效成分、結(jié)構(gòu)式及824個藥物潛在靶點;同時對化痰通絡(luò)湯治療腦梗死的共同靶點進行PPI共表達網(wǎng)絡(luò)分析，其中PIK3CA、PIK3R1、APP、MAPK1、STAT3、VEGFA、MMP、AKT等PPI效果顯著，在化痰通絡(luò)湯治療腦梗死中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)化痰通絡(luò)湯能上調(diào)腦梗死患者血清VEGF水平，改善神經(jīng)功能[18];也能抑制腦梗死大鼠MMP9的表達[19]，明顯改善大鼠神經(jīng)功能。研究證實，有效成分黃芩素（Baicalein）能通過降低核因子κB的IκBα磷酸化與p65的核轉(zhuǎn)位，減少炎癥介質(zhì)IL-6、IL-18釋放;還能降低LC3-Ⅱ/LC3-1比值，促進PI3K/Akt/mTOR通路磷酸化，抑制自噬，從而減輕缺血再灌注大鼠神經(jīng)炎癥、細胞自噬，對腦梗死損傷發(fā)揮神經(jīng)保護作用[20]。因此化痰通絡(luò)湯及其有效成分可能主要通過PPI方式，以共表達網(wǎng)絡(luò)形式影響腦梗死疾病蛋白（如PI3K、VEGF、STAT3、MMP等）表達，從而發(fā)揮腦保護作用。

WebGestalt數(shù)據(jù)庫拓撲分析靶點GO、KEGG富集分析結(jié)果顯示，化痰通絡(luò)湯能多靶點、多成分、多途徑、多通路治療腦梗死疾病，主要在膜區(qū)、囊泡腔區(qū)，通過G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合、DNA轉(zhuǎn)錄因子模式，促進細胞運動、促進循環(huán)、促進免疫應(yīng)答進程，介導(dǎo)鞘脂信號通路、VEGF通路、HIF-1通路發(fā)揮抗腦梗死疾病的作用。研究發(fā)現(xiàn)化痰通絡(luò)湯可激活VEGF通路，上調(diào)VEGF、CD31表達，從而促腦梗死后血管新生[21];香草醛（Vanillin）是化痰通絡(luò)湯有效成分，可通過G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合方式，在血腦屏障區(qū)，上調(diào)ZO-1、occludin、Claudin-5表達，阻斷MMP-9活化，減輕氧化應(yīng)激和保持血腦屏障完整性，從而發(fā)揮腦保護作用[22]。

綜上所述，本研究整合多個數(shù)據(jù)庫資源，初步篩選出上調(diào)/下調(diào)差異基因，同時篩選出化痰通絡(luò)湯藥物的有效成分及治療靶點，最后通過共表達網(wǎng)絡(luò)及富集分析得出，化痰通絡(luò)湯可針對性上調(diào)/下調(diào)靶點基因（上調(diào)GFAP、CD14、STAT3、H19、CXCL16等，下調(diào)NAT8F3、OLR59、GPR88等），以多組分、多功能、多途徑的形式，介導(dǎo)鞘脂信號通路、VEGF通路、HIF-1通路等多通路在腦梗死風(fēng)痰阻絡(luò)證中發(fā)揮作用，為該方的臨床進一步推廣應(yīng)用及深入研究奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。

參考文獻

[1]周仲瑛.中醫(yī)內(nèi)科學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007：304-315.

[2]中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會神經(jīng)科專業(yè)委員會.中國腦梗死中西醫(yī)結(jié)合診治指南（2017）[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2018，38（2）：136-144.

[3]閆小妮，田國祥，郭曉娟，等.GEO數(shù)據(jù)庫架構(gòu)、申請及數(shù)據(jù)提取方法與流程[J].中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2019，11（2）：134-137.

[4]Ru J，Li P，Wang J，et al.TCMSP： a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines[J].J Cheminform，2014，6（4）：13.

[5]張彧，吳東升，徐寅，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析半夏-黃芩-黃連治療幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎的作用機制[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2020，4（18）：1-12.

[6]Kim S，Chen J，Cheng T，et al.PubChem 2019 update： improved access to chemical data[J].Nucleic Acids Res，2019，47（D1）：D1102-D1109.

[7]Gfeller D，Michielin O，Zoete V.Shaping the interaction landscape of bioactive molecules[J].Bioinformatics，2013，29（23）：3073-3079.

[8]Szklarczyk D，Gable AL，Lyon D，et al.STRING v11：protein-protein association networks with increased coverage，supporting functional discovery in genome-wide experimental datasets[J].Nucleic Acids Res，2019，47（D1）：D607-D613.

[9]Liao Y，Wang J，Jaehnig EJ，et al.WebGestalt 2019：gene set analysis toolkit with revamped UIs and APIs[J].Nucleic Acids Res，2019，47（W1）：W199-W205.

[10]王順治，賈春華.基于中西醫(yī)對比的中醫(yī)中風(fēng)內(nèi)風(fēng)說研究[J].世界中醫(yī)藥，2016，11（4）：614-617.

[11]Li DJ，Li YH，Yuan HB，et al.The novel exercise-induced hormone irisin protects against neuronal injury via activation of the Akt and ERK1/2 signaling pathways and contributes to the neuroprotection of physical exercise in cerebral ischemia[J].Metabolism，2017，68（3）：31-42.

[12]Wang SL，Duan L，Xia B，et al.Dexmedetomidine preconditioning plays a neuroprotective role and suppresses TLR4/NF-κB pathways model of cerebral ischemia reperfusion[J].Biomed Pharmacother，2017，93（9）：1337-1342.

[13]Wang X，An F，Wang S，et al.Orientin Attenuates Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury in Rat Model through the AQP-4 and TLR4/NF-κB/TNF-α Signaling Pathway[J].J Stroke Cerebrovasc Dis，2017，26（10）：2199-2214.

[14]Orsini F，F(xiàn)umagalli S，Császár E，et al.Mannose-Binding Lectin Drives Platelet Inflammatory Phenotype and Vascular Damage After Cerebral Ischemia in Mice via IL（Interleukin）-1α[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2018，38（11）：2678-2690.

[15]Liu J，Wang Q，Yang S，et al.Electroacupuncture Inhibits Apoptosis of Peri-Ischemic Regions via Modulating p38，Extracellular Signal-Regulated Kinase（ERK1/2），and c-Jun N Terminal Kinases（JNK）in Cerebral Ischemia-Reperfusion-Injured Rats[J].Med Sci Monit，2018，26（6）：4395-4404.

[16]周穎璨，王洪海，周德生，等.活血榮絡(luò)方對大鼠腦缺血再灌注損傷JAK2、STAT3表達的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2017，28（9）：2111-2114.

[17]呂歡歡，賈亞泉，宋軍營，等.化痰通絡(luò)湯治療痰瘀阻絡(luò)型急性腦梗死[J].中醫(yī)學(xué)報，2019，34（1）：136-140.

[18]王世彬，程麗平，李沖，等.自擬化痰通絡(luò)湯治療急性腦梗死的臨床療效及對血清VEGF、Ang-2水平的影響[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2015，21（6）：100-103.

[19]吳相春，王少卿，唐璐，等.化痰通絡(luò)湯對MCAO大鼠腦組織ICAM-1、MMP9表達的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2014，29（9）：2964-2966.

[20]Yang S，Wang H，Yang Y，et al.Baicalein administered in the subacute phase ameliorates ischemia-reperfusion-induced brain injury by reducing neuroinflammation and neuronal damage[J].Biomed Pharmacother，2019，117（9）：109102.

[21]張振強，賈亞泉，王自闖，等.化痰通絡(luò)湯預(yù)先灌胃的合并高脂血癥腦缺血大鼠神經(jīng)系統(tǒng)功能、腦組織病理變化觀察[J].山東醫(yī)藥，2018，58（43）：47-50.

[22]Lan XB，Wang Q，Yang JM，et al.Neuroprotective effect of Vanillin on hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rats[J].Biomed Pharmacother，2019，118（10）：109196.

（2020-04-10收稿 責(zé)任編輯：芮莉莉）