宋琪玲，何勇均，黃思月，劉青松

1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心，四川南充 637000；2.四川賽爾醫(yī)學(xué)檢驗有限公司，四川南充 637131；3.四川省成都市婦女兒童中心醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心，四川成都 610032

珠蛋白生成障礙性貧血是目前世界范圍內(nèi)最常見且發(fā)病率較高的遺傳學(xué)溶血性疾病，主要是由珠蛋白基因缺失或突變等原因?qū)е碌闹榈鞍缀铣烧系K的單基因遺傳病。珠蛋白生成障礙性貧血具有明顯的地域性，在我國呈現(xiàn)出南高北低的發(fā)病特點，主要以廣東、廣西、海南、四川等地區(qū)發(fā)病率較高，珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率為1.92%～14.96%[1]。四川地域廣闊，地形多樣，兼具平原和丘陵，民族多樣。近年來，有研究報道四川地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)病率呈上升趨勢[2]，但目前對川東北地區(qū)，包括南充、遂寧等，較大數(shù)據(jù)的珠蛋白生成障礙性貧血基因結(jié)果分析較少，為更加準確地了解南充及遂寧等地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血的發(fā)病特點，準確預(yù)防和診斷本地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血，減少出生缺陷，本研究對川東北地區(qū)16 249例珠蛋白生成障礙性貧血患者進行篩查并分析其基因型，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2019年12月在川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院及四川賽爾醫(yī)學(xué)檢驗有限公司接受珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測的患者共16 249例。其中男1 845例，女14 404例，年齡0個月至63歲。本研究經(jīng)川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會審查通過。

1.2方法

1.2.1DNA分離提取 采用乙二胺四乙酸二鉀無菌真空抗凝管采集研究對象外周血標本2 mL，采用全自動DNA提取儀磁珠法提取DNA，所用儀器和試劑購自中山大學(xué)達安基因股份有限公司。

1.2.2PCR擴增 將α、β-珠蛋白生成障礙性貧血PCR mix與Taq酶按要求混勻后，取45 μL分裝到0.2 mL PCR管中；向已分裝反應(yīng)液的PCR管中加入5 μL DNA 模板，瞬時離心后，上機擴增。

1.2.3擴增產(chǎn)物的導(dǎo)流雜交 嚴格按照雜交試劑盒說明書(購自廣東凱普生物科技股份有限公司)進行檢測。

1.2.4結(jié)果判斷 根據(jù)試劑盒提供的珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結(jié)果分析圖比較分析判斷結(jié)果。

1.2.5室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)控 室內(nèi)質(zhì)控:雜交膜條上有3個α和6個β正常對照點，每次試驗所有正常對照點均應(yīng)顯色，突變純合子及缺失純合子除外，否則需重新提取DNA、PCR擴增、雜交。同時，為排除試驗過程出現(xiàn)污染，防止假陽性結(jié)果出現(xiàn)，使用蒸餾水作陰性質(zhì)控，全程參與提取、擴增、雜交，陰性質(zhì)控結(jié)果無任何雜交顯色點，視為試驗過程無污染。此外，將已知珠蛋白生成障礙性貧血型別的陽性標本按照檢測標本量分裝保存于-70 ℃，試驗時已知珠蛋白生成障礙性貧血型別的陽性標本與檢測標本同步處理，全程參與提取、擴增、雜交，得到已知相同的珠蛋白生成障礙性貧血型別，視為該批珠蛋白生成障礙性貧血結(jié)果在控、可靠。室間質(zhì)控：實驗室每年均參加了中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會組織的2次珠蛋白生成障礙性貧血基因分型檢測的室間質(zhì)控，成績均為100% 。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 使用 Excel2016建立數(shù)據(jù)庫，采SPSS22.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行處理和分析，計數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示。

2 結(jié) 果

2.1α-珠蛋白生成障礙性貧血患者的基因型和構(gòu)成比 16 249例患者中共檢出2 467例珠蛋白生成障礙性貧血患者，在2 467例珠蛋白生成障礙性貧血患者中α-珠蛋白生成障礙性貧血1 318例，構(gòu)成比為53.43%(1 318/2 467)，包含13種亞型。其中，靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血以αα/αα3.7為主，占37.10%(489/1 318)；標準型α-珠蛋白生成障礙性貧血以--SEA/αα為主，占50.53%(666/1 318)；血紅蛋白H病以--SEA/αα3.7為主，占2.43%(32/1 318)。α-珠蛋白生成障礙性貧血的基因診斷結(jié)果及臨床分型的詳細情況見表1。

表1 α-珠蛋白生成障礙性貧血患者基因型和構(gòu)成比

2.2β-珠蛋白生成障礙性貧血患者基因型和構(gòu)成比 在2 467例珠蛋白生成障礙性貧血患者中β-珠蛋白生成障礙性貧血1 086例，構(gòu)成比為44.02%(1 086/2 467)，但全為輕型β-珠蛋白生成障礙性貧血。共檢出11種突變基因型，包括CD17(A→T)、CD41/42(TCTT)、IVSII654(C→T)、NT-28(A→G)、29(A→G)、CD43(G→T)、CD14-15(+G)、CD71-72(+A)CD27-28(+C)、βE3(G→A)、CAP(A→C或-AAAC)。其中，輕型β-珠蛋白生成障礙性貧血以β17/βN為主，占37.20%(347/1 086)；其次為β41-42/βN，占29.28%(318/1 086)；β-珠蛋白生成障礙性貧血的基因診斷結(jié)果及臨床分型的詳細情況見表2。

表2 β-珠蛋白生成障礙性貧血患者基因型和構(gòu)成比

2.3α合并β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型和構(gòu)成比 在2 467例珠蛋白生成障礙性貧血患者中α合并β-珠蛋白生成障礙性貧血共63例，構(gòu)成比為2.55%(63/2 467)，包含9種亞型。其中以--SEA/β41-42占比最高，占33.33%(21/63)；其次為αα3.7/β17，占15.87%(10/63)；α合并β-珠蛋白生成障礙性貧血的基因診斷結(jié)果及臨床分型的詳細情況見表3。

表3 α合并β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型和構(gòu)成比

3 討 論

本研究基因診斷陽性率為15.18%(2 467/16 249)，明顯高于已報道的四川地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測平均陽性率[1]。本次研究樣本較大，基本覆蓋南充地區(qū)，遂寧地區(qū)部分覆蓋，且均采用基因檢測進行診斷，更能準確反映川東北地區(qū)人員珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶情況。在2 467例基因診斷陽性患者中，α-珠蛋白生成障礙性貧血有1 318例，占53.43%(1 318/2 467)；β-珠蛋白生成障礙性貧血有1 086例，占44.02 %(1 086/2 467)；α合并β-珠蛋白生成障礙性貧血63例，占2.55%(63/2 467)?？傮w依然是以α-珠蛋白生成障礙性貧血為主，與其他研究一致[2-4]。

在1 318例α-珠蛋白生成障礙性貧血中，最常見的是SEA雜合缺失，共666例，占50.53%(666/1 318)；其次是3.7位點雜合缺失，共489例，占37.10%(489/1 318)。本研究中α-珠蛋白生成障礙性貧血以--SEA/αα、αα/αα3.7為主，該結(jié)果與部分研究報道的α-珠蛋白生成障礙性貧血基因常見基因型一致[3-6]。當SEA雜合缺失患者進行婚配時，對其配偶進行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測，可預(yù)防血紅蛋白H病患兒及重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒的出生。本研究共檢出血紅蛋白H病65例，占4.93%(65/1 318)。血紅蛋白H病的臨床表現(xiàn)個體化差異較大，及早的采用珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測確診有利于疾病治療，尤其是兒童患者的血紅蛋白H病[7]。

1 086例β-珠蛋白生成障礙性貧血中最常見的是17位點雜合突變，共347例，占31.95%(347/1 086)；其次是41～41位點雜合突變，共318例，占29.28%(318/1 086)。與研究報道的珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布基本一致[7-8]。本研究中1 086例患者全為輕型β-珠蛋白生成障礙性貧血，原因一方面是樣本數(shù)有限，另一方面中間型和重型β-珠蛋白生成障礙性貧血臨床表現(xiàn)較重，大部分可能已經(jīng)前往其他醫(yī)院進行治療，無法收集資料。中間型β-珠蛋白生成障礙性貧血臨床表現(xiàn)差異大，且很難根據(jù)其基因型預(yù)測臨床表現(xiàn)；重型β-珠蛋白生成障礙性貧血患兒多在出生后數(shù)月患病，目前尚無理想的治療方法[9]。

在2 467例珠蛋白生成障礙性貧血患者中α合并β-珠蛋白生成障礙性貧血共63例，構(gòu)成比為2.55%(63/2 467)，包含9種亞型。α合并β-珠蛋白生成障礙性貧血又稱復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血，與其他疾病不同，是由α-珠蛋白和β-珠蛋白同時發(fā)生生成障礙，反而一定程度上緩解了α/β鏈的不平衡，使血紅蛋白組成趨于正常，臨床表現(xiàn)也相對較輕[10]。盡管α合并β-珠蛋白生成障礙性貧血患者在臨床表現(xiàn)上不一定比單純α-珠蛋白生成障礙性貧血或β-珠蛋白生成障礙性貧血嚴重，但遺傳給下一代的概率更高[11]。

綜上所述，川東北地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血基因陽性率高于四川平均水平。α-珠蛋白生成障礙性貧血患者較β-珠蛋白生成障礙性貧血患者多見，α-珠蛋白生成障礙性貧血主要基因型為--SEA/αα、αα/αα3.7；β-珠蛋白生成障礙性貧血主要基因型為β17/βN、β41-42/βN。在四川東北部地區(qū)廣泛開展珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測，有助于預(yù)防珠蛋白生成障礙性貧血患兒的出生。