孫可微,徐陽榮,宋 佳,王洪波,趙風(fēng)蘭,孟慶國

(1.煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院,新型制劑與生物技術(shù)藥物研究山東省高校協(xié)同創(chuàng)新中心、分子藥理和藥物評價(jià)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(煙臺(tái)大學(xué)),山東煙臺(tái)264005; 2.軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院,毒物藥物研究所,北京 100850)

齊墩果酸(Oleanolic acid,OA,圖1),又名慶四素、土當(dāng)歸酸,是一種廣泛存在于各種水果和可食用植物中的五環(huán)三萜類化合物[1],大多以糖苷或游離形式存在于女貞子、青龍衣、夏枯草、白花蛇舌草等植物中[2]。齊墩果酸具有多種藥理學(xué)作用,如保肝、抗炎、降血糖、抗氧化、抗HIV、預(yù)防和治療心腦血管疾病以及抗腫瘤等[3-8],目前臨床上主要用于治療急慢性肝炎或者作為抗癌輔助藥物[9]。近年來合成了許多齊墩衍生物,如糖苷化衍生物[10]、芐基酯衍生物[11]等,以提高其活性、穩(wěn)定性和生物利用度。

圖1 齊墩果酸的結(jié)構(gòu)

五元氮唑類藥效團(tuán)在新藥研究中備受關(guān)注,它們與其他取代基相綴合或并合所得的衍生物常表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞增殖,阻斷細(xì)胞周期,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和分化等生物活性,提高衍生物與嘌呤、嘧啶等堿基結(jié)構(gòu)片段形成氫鍵的能力[12]。此前本課題組已設(shè)計(jì)合成了一系列齊墩果酸氮唑衍生物,并確證其活性與齊墩果酸相比有所提高[13],本研究在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步設(shè)計(jì)合成了一系列在齊墩果酸C-28位駢綴四氮唑結(jié)構(gòu)片段的新化合物,并采用MTT法對新化合物的體外抗腫瘤活性進(jìn)行評價(jià)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

WRS-1B型數(shù)字熔點(diǎn)儀,上海儀電物理光學(xué)儀器有限公司;Bruker VANCE-400型核磁共振波譜儀,瑞士布魯克公司;LCQ Fleet型質(zhì)譜儀,賽默飛世爾科技有限公司;D8 Venture型X射線單晶衍射儀,德國布魯克公司;異丙醇,醫(yī)藥級,天津市四友化學(xué)品有限公司;其余所用試劑為分析純。

1.2 化合物的合成路線

以已知天然產(chǎn)物齊墩果酸為原料,在DMF中與氯乙腈反應(yīng)得到中間體化合物2?；衔?再與疊氮鈉在異丙醇/水中經(jīng)Click反應(yīng)得到一組互為同分異構(gòu)體的中間體3a和3b。中間體3a和3b在DMF中與11種取代溴芐反應(yīng)后得到11組同分異構(gòu)體,經(jīng)硅膠柱層析分離純化后得到化合物A1—A15,合成路線見圖2。

圖2 目標(biāo)化合物A1—A15的合成路線

1.2.1 中間體化合物2和3a、3b的合成 中間體齊墩果烷-12-烯-28-酸乙腈酯(2)的合成:反應(yīng)瓶中加入DMF 50.00 mL,再加入齊墩果酸(5.00 g, 11.00 mmol)、氯乙腈(1.05 mL, 16.50 mmol)和K2CO3(2.20 g, 16.50 mmol),室溫?cái)嚢? h。將混合物傾入碎冰中,抽濾,干燥。硅膠柱層析得到5.01 g化合物2,白色粉末,收率92.0%。

中間體齊墩果烷-12-烯-28-酸-1H-四唑和齊墩果酸-2H-四唑-5(3a和3b)的合成:將化合物2(10.00 g, 20.20 mmol)、疊氮鈉(4.00 g, 60.60 mmol)和ZnCl2(5.00 g, 1.82 mmol)加入至90 mL異丙醇和30 mL水中,回流反應(yīng)8 h。冷卻至室溫,將混合物傾入碎冰中,抽濾,干燥。硅膠柱層析,得到3a和3b的混合物9.36 g,白色粉末,收率86.1%。

1.2.2 齊墩果烷-12-烯-28-酸-(2-取代四氮唑-5)甲酯(A1—A4)和齊墩果烷-12-烯-28-酸-(1-取代四氮唑-5)甲酯(A5—A15)的合成 齊墩果烷-12-烯-28-酸-(2-鄰硝基芐基四唑-5)甲酯(A1)的合成:反應(yīng)瓶中加入DMF 50.00 mL,再加入混合物中間體3a和3b(0.50 g, 0.93 mmol)、2-硝基溴芐(0.30 g, 1.40 mmol)和碳酸鉀(1.92 g, 13.95 mmol),室溫反應(yīng)4 h。將混合物傾入碎冰中,抽濾,干燥。硅膠柱層析得到A10.31g,收率49.8%;A120.19g,收率30.1%。

A1:黃棕色粉末,總收率32.0%,mp: 64.8～68.4 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.22～8.20 (d,J=8.0 Hz, 1H), 7.61～7.55 (m, 2H), 6.89～6.87 (d,J=8.0 Hz, 1H), 6.25 (s, 2H), 5.37～5.22 (m, 3H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H); HRMS:計(jì)算值為C39H54O4N5[M-OH]+656.414 72, 實(shí)際值656.417 03.

參照A1的合成方法,合成A2—A15。A2—A15外觀、總收率、熔點(diǎn)、1H-NMR, HRMS和13C NMR數(shù)據(jù)如下。

A2:白色粉末,總收率35.2%,mp:81.6～84.2 ℃;13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 176.43, 162.45, 142.79, 133.89, 132.26, 131.47, 129.51, 122.10, 117.39, 112.92, 78.46, 55.60, 55.23, 54.65, 47.03, 46.34, 45.24, 41.13, 40.77, 38.75, 38.22, 37.91, 36.47, 33.26, 32.54, 32.17, 31.64, 31.42, 30.15, 29.19, 28.86, 27.58, 27.11, 26.65, 25.31, 23.09, 22.86, 22.45, 22.19, 17.81, 16.27, 15.09, 14.84, 13.63;HRMS:計(jì)算值為 C40H54O2N5[M-OH]+636.427 20, 實(shí)際值636.425 09.

A3:白色粉末,總收率31.6%,mp:78.3～81.0 ℃; HRMS:計(jì)算值為C39H55O2N4[M-OH]+611.429 86, 實(shí)際值611.431 95.

A4:白色粉末,總收率33.2%,mp: 74.0～75.5 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.30～7.18 (m, 4H), 7.23～7.21 (m, 2H), 5.75 (s, 2H), 5.33～5.33 (m, 3H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H); HR-MS:計(jì)算值為C40H57O2N4[M-OH]+625.445 54, 實(shí)際值625.447 60.

A5:白色粉末,總收率30.3%,mp: 174.8～177.4 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.37～7.32 (m,1H), 7.08～7.04 (dt,J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.01～6.99 (d,J=8.0 Hz, 1H), 6.96～6.92 (m, 1H), 5.70(s, 2H), 5.35～5.18 (m, 3H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.00～1.92 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 1H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.63 (s, 3H); HRMS:計(jì)算值為C39H56O3N4F [M+H]+647.430 50, 實(shí)際值647.433 10.

A6:白色粉末,總收率28.9%,mp: 156.4～158.2 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.27～7.23 (m,1H), 7.09～7.04 (t,J=8.0 Hz, 2H), 5.66 (s, 2H), 5.30～5.18 (m, 3H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.86～2.81 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.00～1.92 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 1H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.63 (s, 3H); HRMS:計(jì)算值為C39H56O3N4F [M+H]+647.430 69, 實(shí)際值647.433 10.

A7:白色粉末,總收率31.8%,mp: 159.4～162.7 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.40～7.34 (m, 1H), 7.24～7.22 (d,J=8.0 Hz, 1H), 7.18～7.09 (m, 2H), 5.76～5.67(m, 2H), 5.35～5.20 (m, 3H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H);13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 176.52, 161.04, 158.57, 150.12, 142.64, 130.81, 130.72, 129.68, 129.65, 124.52, 124.49, 122.38, 120.18, 120.04, 115.56, 115.35, 78.45, 54.56, 52.76, 52.73, 46.97, 46.52, 45.16, 44.68, 44.64, 41.15, 40.81, 38.64, 38.22, 37.89, 36.46, 33.15, 32.47, 32.09, 31.67, 30.10, 29.18, 27.98, 27.03, 26.63, 25.33, 23.04, 22.81, 22.48, 17.76, 16.08, 15.05, 14.76;HRMS:計(jì)算值為C39H56O3N4F [M+H]+647.430 55, 實(shí)際值647.433 10.

A8:白色粉末,總收率30.1%,mp: 167.5～169.5 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.36～7.34 (d,J=8.0 Hz, 2H), 7.20～7.17 (d,J=12.0 Hz, 2H), 5.66 (s, 2H), 5.27～5.25 (t,J=4.0 Hz, 1H), 5.18 (s, 1H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H); HRMS:計(jì)算值為C39H56O3N4Cl [M+H]+663.401 06,實(shí)際值663.403 55.

A9:白色粉末,總收率29.3%,mp: 165.5～168.2 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.45～7.42 (d,J=12.0 Hz, 1H), 7.35～7.25 (m, 2H), 7.07～7.00 (d,J=8.0 Hz, 1H), 5.77～5.76 (d,J=4.0 Hz, 2H), 5.31～5.29 (d,J=8.0 Hz, 2H), 5.26～5.23 (m, 1H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H); HRMS:計(jì)算值為C39H56O3N4Cl [M+H]+663.400 59, 實(shí)際值663.403 55.

A10:白色粉末,總收率28.2%,mp: 168.4～169.3 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.51～7.49 (d,J=8.0 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.25～7.23 (d,J=8.0 Hz, 1H), 7.17～7.15 (d,J=8.0 Hz, 1H), 5.67 (s, 2H), 5.27～5.25 (t,J=4.0 Hz, 1H),5.17 (s, 1H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H); HRMS:計(jì)算值為C39H54O2N4Br [M-OH]+689.339 72,實(shí)際值689.342 47.

A11:白色粉末,總收率32.2%,mp:179.6～182.2 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.63～7.61 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.33～7.22 (m, 2H), 6.93～6.92 (d,J=8.0 Hz, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.35～5.24 (m, 3H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H); HRMS:計(jì)算值為C39H56O3N4Br [M+H]+707.350 62, 實(shí)際值707.353 03.

A12:黃棕色粉末,總收率28.5%,mp: 147.6～150.6 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.26～7.24 (d,J=8.0, 1H), 7.71～7.57 (m, 2H), 6.98～6.96 (d,J=8.0, 1H), 6.05～6.04 (d,J=4.0, 2H), 5.37～5.36 (d,J=4.0, 2H), 5.27～5.23 (t,J=4.0 Hz, 1H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H);13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 176.41, 150.85, 146.65, 142.48, 134.11, 129.99, 129.47, 128.79, 125.37, 122.42, 78.45, 54.65, 53.04, 48.43, 46.94, 46.48, 45.08, 41.11, 40.74, 38.62, 38.21, 37.88, 36.45, 33.08, 32.43, 32.06, 31.60, 30.06, 29.18, 27.57, 27.02, 26.62, 25.28, 23.01, 22.79, 22.39, 17.73, 16.15, 15.05, 14.77; HRMS:計(jì)算值為C39H56O5N5[M+H]+674.424 71, 實(shí)際值674.427 60.

A13:白色粉末,總收率31.4%,mp: 96.6～98.0 ℃; HRMS:計(jì)算值為C40H56O3N5[M+H]+654.435 08, 實(shí)際值654.437 77.

A14:白色粉末,總收率30.7%,mp: 143.4～145.2 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.38～7.34 (m,3H), 7.24～7.18 (m, 2H), 5.70 (s, 2H), 5.27～5.25 (t,J=4.0 Hz, 1H), 5.17 (s, 2H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H);13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 176.55, 150.08, 142.60, 132.80, 128.81, 128.58, 127.03, 122.40, 78.44, 54.66, 52.61, 50.80, 46.96, 46.54, 41.15, 40.84, 38.65, 38.22, 37.89, 36.46, 33.14, 32.46, 32.10, 31.72, 30.10, 29.18, 27.58, 27.05, 26.64, 25.32, 23.07, 22.82, 22.47, 17.76, 16.11, 15.06, 14.79; HRMS:計(jì)算值為C39H57O3N4[M+H]+629.440 20, 實(shí)際值629.442 52.

A15:白色粉末,總收率31.8%,mp: 156.8～159.5 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.29～7.15 (m,3H), 6.90～6.88 (d,J=8.0 Hz, 1H), 5.68 (s, 1H), 5.27～5.25 (t,J=4.0 Hz, 1H), 5.17(s, 2H), 3.22～3.18 (dd,J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.83～2.79 (dd,J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02～1.94 (dt,J=16.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85～1.81 (dd,J=8.8, 3.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.77 (s, 3H), 0.48 (s, 3H);13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 176.48, 150.38, 142.58, 135.75, 130.97, 130.66, 128.67, 127.28, 126.22, 122.38, 78.45, 54.65, 52.76, 49.10, 46.96, 46.49, 45.14, 40.82, 38.22, 37.89, 36.46, 33.13, 32.47, 27.58, 27.04, 26.63, 25.32, 23.06, 22.82, 22.45, 22.19, 18.74, 17.75, 16.11, 15.06, 14.79, 13.63; HRMS:計(jì)算值為C40H59O3N4[M+H]+643.455 65, 實(shí)際值643.458 17.

2 體外抗腫瘤活性評價(jià)

將對數(shù)生長期的三種腫瘤細(xì)胞(人胃癌細(xì)胞MKN-45,人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞)用0.25%的胰酶消化后,配制成一定濃度的單細(xì)胞懸液,按4000個(gè)/孔接種于96孔板,每孔加入細(xì)胞懸液100 μL。24 h后加入濃度為10 μmol/L的化合物和順鉑及相應(yīng)溶劑對照的完全培養(yǎng)基。每孔加100 μL(DMSO終濃度<0.1%),每組設(shè)3個(gè)平行孔,于37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)72 h后,棄上清。每孔加入100 μL含0.5 mg/mL MTT的完全培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,棄上清后,每孔加入150 μL DMSO溶解MTT甲瓚沉淀,微型振蕩器振蕩混勻后,酶標(biāo)儀在參考波長450 nm,檢測波長570 nm條件下測定吸光度A,以溶劑對照處理的腫瘤細(xì)胞為對照組,用以下公式計(jì)算每種化合物作用下不同腫瘤細(xì)胞的抑制率。

細(xì)胞抑制率=(1-給藥組平均A/對照組平均A)×100%。

3 結(jié)果與討論

3.1 目標(biāo)物的合成

以齊墩果酸為原料,在室溫條件下,以DMF為溶劑,與氯乙腈經(jīng)親核取代反應(yīng)合成齊墩果烷-12-烯-28酸乙腈酯(2),再與疊氮化鈉在異丙醇/水中經(jīng)Click反應(yīng),合成齊墩果烷-12-烯-28-酸-1H-四唑和齊墩果酸-2H-四唑-5的混合物(3a和3b),然后與不同結(jié)構(gòu)的溴芐發(fā)生取代反應(yīng),最終通過硅膠柱層析分離純化得到15個(gè)目標(biāo)化合物(A1—A15)。

在產(chǎn)物中存在多組同分異構(gòu)體,從HRMS、1H-NMR和質(zhì)譜無法辨別其結(jié)構(gòu),但可通過X射線晶體衍射辨別化合物具體結(jié)構(gòu)。由于化合物A1—A15無法培養(yǎng)單晶,所以將其衍生化后再培養(yǎng)。將化合物A2的3位羥基氧化后得到化合物B1并成功培養(yǎng)出晶體(圖3和4),該晶體CCDC編號為1850645。通過晶體結(jié)構(gòu)確證,齊墩果酸四氮唑目標(biāo)物中A1—A4(2,5取代四氮唑衍生物)為同分異構(gòu)體中極性較小者;A5—A15(1,5取代四氮唑衍生物)為同分異構(gòu)體中極性較大者。

圖3 化合物B1的結(jié)構(gòu)

圖4 B1的晶體結(jié)構(gòu)

中間體3a和3b的合成中使用了危險(xiǎn)化學(xué)品疊氮化鈉,疊氮化鈉在受熱、接觸明火、或受到摩擦、震動(dòng)、撞擊時(shí)會(huì)發(fā)生爆炸,使用時(shí)應(yīng)格外注意。首先，不能用金屬勺或刮刀進(jìn)行取樣稱量等操作,應(yīng)用牛角勺稱量取樣。其次,本次反應(yīng)的后處理是將反應(yīng)液傾入碎冰中再抽濾,濾液中有過量的疊氮化鈉,也須小心處理。先加入500倍于過量疊氮化鈉的水進(jìn)行稀釋,之后按照多余1 g的疊氮化鈉約需10 mL飽和次氯酸鈉溶液的比例,在不斷攪拌下,滴入飽和次氯酸鈉水溶液。此外,疊氮化鈉含有劇毒,所有接觸過疊氮化鈉的器具都要用飽和次氯酸鈉水溶液消毒。

3.2 體外抗腫瘤活性評價(jià)

本研究采用MTT法,初步評價(jià)目標(biāo)化合物A1—A15的體外抗腫瘤活性,結(jié)果見表1。

表1 A1—A15對MKN-45、MCF-7和C6細(xì)胞的體外抗腫瘤活性

體外抗腫瘤活性結(jié)果表明,濃度為10 μmol/L時(shí),齊墩果酸對三種腫瘤細(xì)胞的抑制作用很弱,修飾后的目標(biāo)化合物抗腫瘤活性較齊墩果酸得到普遍提高,化合物A12對MKN-45腫瘤細(xì)胞的抑制率較齊墩果酸提高了3倍以上;化合物A5、A6、A8和A14對MCF-7腫瘤細(xì)胞的抑制率較齊墩果酸提高了7倍以上;化合物A1、A2、A5、A6、A7、A12、A14和A15對C6細(xì)胞的抑制率較齊墩果酸提高了6倍以上。

4 結(jié) 論

本研究采用親核取代反應(yīng)和Click反應(yīng),在齊墩果酸的C-28位羧基引入四唑,合成了15個(gè)齊墩果酸新化合物,并采用HRMS、1H-NMR和X-ray單晶衍射確證結(jié)構(gòu)。以順鉑為陽性對照藥,選擇人胃癌細(xì)胞MKN-45、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞等細(xì)胞作為試驗(yàn)瘤株,采用MTT法測定了目標(biāo)物的體外抗腫瘤活性,結(jié)果表明,當(dāng)濃度為10 μmol/L 時(shí),目標(biāo)物體外抗腫瘤活性較齊墩果酸得到一定提高,即在齊墩果酸的C-28位綴合各種芐基取代的四唑,有利于提高齊墩果酸的體外抗腫瘤活性,證實(shí)了齊墩果酸的C-28位衍生物具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。