張明亮，劉方洲，李偉霞，張 輝，王曉艷，張書琦，王 炎，賈文匯，牛 璐，唐進(jìn)法，△

(1．河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥臨床評價(jià)技術(shù)河南省工程實(shí)驗(yàn)室，鄭州 450000；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都610000；3.河南省中醫(yī)藥研究院，鄭州 450000；4．河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，鄭州 450000)

多發(fā)性硬化癥(multiple sclerosis，MS)是一種病因不明的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS)自身免疫性神經(jīng)退行性疾病，病理表現(xiàn)為腦與脊髓白質(zhì)區(qū)域炎性脫髓鞘，臨床主要表現(xiàn)為視神經(jīng)炎、球后視神經(jīng)炎、眼肌麻痹、肢體癱瘓、錐體束征、精神癥狀及共濟(jì)失調(diào)等癥狀[1]。當(dāng)前普遍認(rèn)為MS與遺傳因素、環(huán)境因素，如病毒感染、吸煙、地理位置等有一定關(guān)系[2-4]。白細(xì)胞介素1(interleukin-1，IL-1)是一種由白細(xì)胞分泌的可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生炎性免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子，主要包含IL-1ra、IL-1α、IL-1β，在許多免疫炎性疾病中扮演重要角色，如MS[5]。國內(nèi)外對IL-1ra(VNTR)、IL-1α(-889)、IL-1β(-511)與IL-1β(+3953)等位點(diǎn)基因多態(tài)性與MS的遺傳易感性進(jìn)行了大量研究，但多為單中心研究，樣本量偏小且存在結(jié)果不一致現(xiàn)象。因此，本研究通過對當(dāng)前國內(nèi)外有關(guān)MS與IL-1基因多態(tài)性的數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合評價(jià)，以彌補(bǔ)單個(gè)研究的不足，為更好地評價(jià)二者的關(guān)系提供重要的臨床循證依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

“Interleukin-1”“IL-1”“IL-1ra”“IL-1α”“IL-1β”“multiple sclerosis”“gene”“polymorphisms” 等英文關(guān)鍵詞在Pubmed、Elseiver、Ovid數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索， “白介素-1”“多發(fā)性硬化”“基因”及“多態(tài)性”等中文關(guān)鍵詞在中國知網(wǎng)和萬方數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，截至?xí)r間為2019年8月。同時(shí)采用手工檢索與文獻(xiàn)溯源的方法確保查全,所查文獻(xiàn)資料包含期刊、會(huì)議論文與碩博論文。通過以上途徑收集有關(guān)IL-1基因多態(tài)性與MS關(guān)系的所有病例對照研究。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)文獻(xiàn)類型為有關(guān)MS與IL-1基因多態(tài)性的病例對照研究；(2)有提供病例組與對照組中IL-1各位點(diǎn)基因型的研究例數(shù)。對于多個(gè)重復(fù)報(bào)道的研究,將納入其中最近發(fā)表的或提供大樣本量的研究。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)重復(fù)研究；(2)對照組不符合HWE遺傳平衡；(3)數(shù)據(jù)描述或樣本資料描述不清,統(tǒng)計(jì)方法不當(dāng)；(4)對照組缺失；(5)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究；(6)摘要、綜述等。

1.3 文獻(xiàn)篩選與資料提取

由兩位研究者分別獨(dú)立按照納入與排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行文獻(xiàn)篩選與資料提取，存在分歧時(shí)通過商議解決。獨(dú)立提取文獻(xiàn)資料主要包括:第一作者、發(fā)表時(shí)間、研究對象國籍、各基因型的位點(diǎn)與例數(shù)等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用STATA12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。對納入研究的對照組基因型分布進(jìn)行HWE平衡檢驗(yàn)；應(yīng)用漏斗圖分析納入的文獻(xiàn)是否存在明顯的發(fā)表偏倚；計(jì)算各研究的IL-1基因的比值比(odds ratio,OR)值及其95%置信區(qū)間(confidence intervals,CI)；以Q檢驗(yàn)對各研究結(jié)果進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn),若無異質(zhì)性,則采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并,若存在顯著異質(zhì)性,則采用隨機(jī)效應(yīng)模型法進(jìn)行數(shù)據(jù)合并[6]。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果

共檢出符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)23篇[7-29]，其中英文21篇，中文2篇。MS組3 531例，對照組3 850例，見表1。

表1 納入薈萃分析文獻(xiàn)的基本情況

續(xù)表1 納入薈萃分析文獻(xiàn)的基本情況

2.2 meta分析結(jié)果

在LLvs.22模型中，IL-1ra(VNTR)基因位點(diǎn)LL為MS的保護(hù)型基因(OR=0.819，95%CI：0.683～0.982，P=0.031)，而IL-1β(+3953)、IL-1α(-889)、IL-1β(-511)未見顯著性關(guān)聯(lián)(P>0.05),見表2。

表2 基因多態(tài)性與MS發(fā)病的關(guān)聯(lián)性分析

續(xù)表2 基因多態(tài)性與MS發(fā)病的關(guān)聯(lián)性分析

2.3 亞組分析結(jié)果

將人群按種族分為“歐洲人”與“亞洲人”，發(fā)現(xiàn)在IL-1ra(VNTR)LLvs.22模型中攜帶LL基因型是歐洲MS患者的保護(hù)性基因型(OR=0.773，95%CI：0.612～0.977，P=0.031);在IL-1α(-889)Cvs.T、CCvs.TT模型中攜帶C等位基因或CC基因型均是亞洲MS患者的風(fēng)險(xiǎn)性因素(OR=1.453，95%CI：1.204～1.755，P<0.001；OR=1.509，95%CI：1.026～2.220，P=0.037);在IL-1β(+3953)Cvs.T、CCvs.CT、CCvs.CT+TT與CC+TTvs.CT模型中攜帶C等位基因或CC基因型均是亞洲MS患者的保護(hù)性因素(OR=0.591，95%CI：0.459～0.762，P<0.001；OR=0.435，95%CI：0.283～0.670，P<0.001；OR=0.489，95%CI：0.346～0.692，P<0.001；OR=0.529，95%CI：0.351～0.797，P=0.002)。將人群按所在緯度分為“≤50°N”與“>50°N”，發(fā)現(xiàn)在IL-1α(-889)Cvs.T、CCvs.TT、CTvs.TT與CC+CTvs.TT模型中攜帶C等位基因、CC或CT基因型均是位于“>50°N”MS患者的保護(hù)性因素(OR=0.815，95%CI：0.695～0.957，P=0.012；OR=0.592，95%CI：0.405～0.866，P=0.007；OR=0.682，95%CI：0.470～0.990，P=0.044；OR=0.641，95%CI：0.448～0.918，P=0.015),見表3。

表3 種族與緯度對MS發(fā)病的影響

續(xù)表3 種族與緯度對MS發(fā)病的影響

2.4 發(fā)表偏倚評估

IL-1ra(VNTR)、IL-1β(+3953)、IL-1α(-889)、IL-1β(-511)中各等位基因與基因型的Egger′s分析顯示，漏斗圖對稱性均較好(P>0.05)，不存在發(fā)表偏倚。

3 討 論

近年來臨床流行病學(xué)研究表明，MS的發(fā)病率及臨床表型在不同種族和地域之間存在明顯差異[30]，研究MS致病基因多態(tài)性在不同人群分布特點(diǎn)對臨床治療前的診斷變得尤為重要。MS作為一種由CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的炎性免疫反應(yīng)性疾病，在發(fā)病過程中離不開炎性細(xì)胞因子IL-1參與的免疫激活作用[31]。MS患者體內(nèi)免疫被激活后，可促進(jìn)炎性因子的大量釋放累積導(dǎo)致炎性反應(yīng)，最終導(dǎo)致CNS髓鞘脫失、神經(jīng)元變性。因此,影響IL-1功能的因素，如基因多態(tài)性，可能與MS的發(fā)病密切相關(guān)。

IL-1基因位于染色體2q13-14，包括兩種激動(dòng)劑蛋白(IL-1α和IL-1β)和一種拮抗蛋白(IL-1ra)，本文納入的是IL-1α在-889(rs1800587)與+4845(rs17561)兩個(gè)位點(diǎn)，IL-1β在-511(rs16944)與+3953(rs1143634)的兩個(gè)位點(diǎn)，以及IL-1ra(VNTR)位點(diǎn)。國外關(guān)于IL-1基因多態(tài)性與MS關(guān)系的研究結(jié)果不盡一致，土耳其的一項(xiàng)研究提示IL-1β(-511)T等位基因及TT基因型是MS的風(fēng)險(xiǎn)因素[27]，而伊朗的一項(xiàng)研究提示IL-1β(-511)基因多態(tài)性與MS無關(guān)。本研究按照meta分析的要求[28]，全面檢索并收集已發(fā)表的IL-1基因多態(tài)性文獻(xiàn)進(jìn)行整合分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在IL-1ra(VNTR)基因位點(diǎn)中攜帶LL基因型患MS的風(fēng)險(xiǎn)更低，IL-1β(+3953)、IL-1α(-889)、IL-1β(-511)未見與MS有顯著關(guān)聯(lián)。然而，按種族與緯度進(jìn)行亞組分析后，發(fā)現(xiàn)IL-1α(-889)C等位基因是亞洲MS患者的風(fēng)險(xiǎn)性因素，而IL-1β(+3953)C等位基因則是亞洲MS患者的保護(hù)性因素，且處于“>50°N”的攜帶IL-1α(-889)C等位基因的人群患MS概率更低，提示種族與地域分布對MS發(fā)病有一定影響。

由于本研究為二次研究，存在一定的局限性：(1)納入的23項(xiàng)研究中有研究樣本量較小，且按“種族”與“緯度”分組后，納入分析的關(guān)于“亞洲人”的文獻(xiàn)只有2篇，“>50°N”的報(bào)道只有3篇，結(jié)果存在一定的局限性；(3)由于人們對陽性結(jié)果的認(rèn)可與陰性結(jié)果的忽視，有些陰性結(jié)果未被報(bào)道，致使IL-1突變基因型與MS遺傳易感的風(fēng)險(xiǎn)性被夸大；(4)本研究僅檢索了中文與英文數(shù)據(jù)庫，且檢索的數(shù)據(jù)庫較少，可能存在語種偏倚與數(shù)據(jù)庫偏倚。

本研究通過meta分析，對多個(gè)同類研究結(jié)果進(jìn)行合并匯總，增大了樣本量,提高了檢驗(yàn)效能，使得到的結(jié)果更接近真實(shí)情況。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在IL-1ra(VNTR)基因位點(diǎn)中攜帶LL基因型患MS的風(fēng)險(xiǎn)更低，是MS的保護(hù)型基因，具有一定的臨床參考價(jià)值，臨床醫(yī)生可以依據(jù)IL-1與MS的遺傳易感性進(jìn)行基因檢測，為臨床確診MS提供一定的參考價(jià)值，但仍需更大樣本量的研究加以驗(yàn)證。