劉 晟

(重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院化學(xué)室，重慶 401121)

氨曲南是由美國(guó)施貴寶制藥有限公司研制的單酰胺環(huán)類β-內(nèi)酰胺類抗生素，主要與細(xì)菌的青霉素結(jié)合蛋白3結(jié)合而抑制其細(xì)胞壁的合成，使細(xì)胞迅速溶解死亡。氨曲南對(duì)β-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定[1]，因而許多耐藥菌對(duì)該藥仍較敏感。本品抗菌譜主要為G-菌，抗菌效果與頭孢他啶和慶大霉素相近，臨床上主要用于治療尿路感染、下呼吸道感染、血流感染、皮膚軟組織感染(包括手術(shù)傷口感染、潰瘍和燒傷創(chuàng)面感染)、腹膜炎等腹腔感染、生殖道感染等。氨曲南為國(guó)家基本藥物，為保證其用藥安全，重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院從安全性、有效性和質(zhì)量可控性等方面對(duì)其進(jìn)行了全面的質(zhì)量評(píng)價(jià)，為藥品質(zhì)量的提高和監(jiān)督管理提供技術(shù)依據(jù)。

1 材 料

1.1 儀器 Thermo Ultimate 3000 DGLC雙三元高效液相色譜儀(美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司)；Agilent 7890型氣相色譜儀、Agilent 7700X型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；HACH TL2300型濁度儀(美國(guó)哈希公司)；Binder KBFP240型恒溫恒濕穩(wěn)定性留樣箱(德國(guó)Binder公司)；XPE205DR型電子天平(瑞士梅特勒公司)。

1.2 試劑和藥品 氨曲南原料藥13批、注射用氨曲南29批(A、B和C公司)及原研制劑1批(規(guī)格1.0 g/支，批號(hào)AAX7824，美國(guó)施貴寶制藥有限公司)；氨曲南開環(huán)物(雜質(zhì)A，批號(hào)1-LIJ-166-1)、開環(huán)脫硫基氨曲南(雜質(zhì)B，批號(hào)9-VSB-47-2)、脫磺基氨曲南(雜質(zhì)D，批號(hào)15-MAR-98-2，加拿大多倫多化學(xué)研究所)；氨曲南E型異構(gòu)體(雜質(zhì)E，批號(hào)160303，加拿大Molcan公司)；氨曲南乙酯(雜質(zhì)F，批號(hào)2149-084A3，加拿大TLC藥物標(biāo)準(zhǔn)品有限公司)。乙腈為色譜純，水為純化水，磷酸二氫鉀和磷酸均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 法定檢驗(yàn)方法 按照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版二部[2]進(jìn)行法定檢驗(yàn)。

2.2 探索性研究方法 為深入揭示藥品內(nèi)在品質(zhì)，比較各企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量差異，確保臨床用藥安全有效，進(jìn)一步開展了有關(guān)物質(zhì)、加速試驗(yàn)后溶液的澄清度、殘留溶劑、重金屬等4個(gè)方面的探索性研究。

2.3 法定檢驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)及分析 氨曲南原料藥及注射用氨曲南的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版二部。

2.3.2 總體檢驗(yàn)結(jié)果 對(duì)全部樣品按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，結(jié)果均符合規(guī)定，符合規(guī)定百分率為100%。進(jìn)一步對(duì)與產(chǎn)品質(zhì)量密切相關(guān)的主要檢查項(xiàng)目如溶液的澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定等結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.3.3 溶液的澄清度 13批氨曲南原料藥均未超過(guò)0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液。注射用氨曲南有25批未超過(guò)0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液，有4批超過(guò)0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液，但均未超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)要求的1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液。

2.3.4 溶液的顏色 13批氨曲南原料藥均未深于黃綠色2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液；29批注射用氨曲南均未深于黃綠色4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液。全部42批樣品均符合規(guī)定，合格率為100%。

2.3.5 有關(guān)物質(zhì) 樣品有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)均符合規(guī)定。氨曲南原料藥單個(gè)雜質(zhì)的測(cè)定結(jié)果為0.2%～0.6%(相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得超過(guò)1.5%)，平均值為0.5%；總雜質(zhì)的測(cè)定結(jié)果為0.6%～1.2%(相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得超過(guò)3.5%)，平均值為1.1%。注射用氨曲南單個(gè)雜質(zhì)的測(cè)定結(jié)果為0.3%～0.5%(相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得超過(guò)1.5%)，平均值為0.4%；總雜質(zhì)的測(cè)定結(jié)果為0.6%～1.6%(相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得超過(guò)5.0%)，平均值為1.2%。3家企業(yè)間比較，樣品的最大單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量基本一致，3家企業(yè)生產(chǎn)工藝均為無(wú)菌分裝，工藝簡(jiǎn)單，影響雜質(zhì)水平的工藝參數(shù)相似，對(duì)雜質(zhì)的控制水平相當(dāng)。各規(guī)格間比較，雜質(zhì)量基本一致，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其原因是各規(guī)格生產(chǎn)線、生產(chǎn)工藝相同，在原料雜質(zhì)量相當(dāng)?shù)那疤嵯?，制劑生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)量基本一致。比較3家企業(yè)批間數(shù)據(jù)差異，B廠樣品單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量基本一致，批間質(zhì)量控制最好。其他2家企業(yè)有批間數(shù)據(jù)波動(dòng)的情況，批間差異較大，提示應(yīng)加強(qiáng)生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制，提高批間質(zhì)量一致性。

2.3.6 含量 13批氨曲南原料藥含量測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定，按無(wú)水物計(jì)算的含量測(cè)定結(jié)果為97.5%～98.0%(相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定應(yīng)為93.0%～103.0%)，含量基本一致，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。29批注射用氨曲南含量測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定，按無(wú)水、無(wú)精氨酸物計(jì)算的含量測(cè)定結(jié)果為93.0%～100.2%(相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定應(yīng)為91.0%～103.0%)；按平均裝量計(jì)算的含量測(cè)定結(jié)果為標(biāo)示量的95.4%～106.8%(相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～115.0%)，平均值為99.4%，極差11.4。提示各企業(yè)均應(yīng)嚴(yán)格按照要求合理投料。

2.4 探索性研究結(jié)果

2.4.1 有關(guān)物質(zhì) 分別采用《美國(guó)藥典》40版[3]氨曲南有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法和自行建立的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法對(duì)氨曲南原料藥和注射用氨曲南進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表1、表2。結(jié)果顯示，13批氨曲南原料藥中氨曲南開環(huán)物(雜質(zhì)A)和開環(huán)脫硫基氨曲南(雜質(zhì)B)之和均<0.6%，脫磺基氨曲南(雜質(zhì)D)均<0.7%，氨曲南E型異構(gòu)體(雜質(zhì)E)均<0.5%，氨曲南乙酯(雜質(zhì)F)均<0.4%，各雜質(zhì)總和均<3.5%。

表1 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果Table 1 Determination results of the related substances (%)

表2 按自擬有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法測(cè)得的各雜質(zhì)總和Table 2 The total impurities determined by the self-made method in the related substances (%)

29批注射用氨曲南中氨曲南開環(huán)物(雜質(zhì)A)和開環(huán)脫硫基氨曲南(雜質(zhì)B)之和均<0.6%，脫磺基氨曲南(雜質(zhì)D)均<0.7%，氨曲南E型異構(gòu)體(雜質(zhì)E)均<0.5%，氨曲南乙酯(雜質(zhì)F)均<0.4%，各雜質(zhì)總和均<2.5%。

13批氨曲南原料中，部分企業(yè)產(chǎn)品的最大單個(gè)未知雜質(zhì)超過(guò)0.1%，29批注射用氨曲南中部分企業(yè)產(chǎn)品的最大單個(gè)未知雜質(zhì)超過(guò)0.2%。與原研制劑比較，雖然部分企業(yè)中已知雜質(zhì)明顯高于原研制劑，但均符合目前國(guó)內(nèi)外藥典的規(guī)定；部分企業(yè)中最大單個(gè)未知雜質(zhì)超過(guò)了0.2%，明顯高于原研制劑，原研制劑未超過(guò)0.10%。

同時(shí)結(jié)果顯示，《美國(guó)藥典》40版氨曲南有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法(等度洗脫)不能有效測(cè)定已知雜質(zhì)F，導(dǎo)致已知雜質(zhì)F未檢出，也導(dǎo)致單個(gè)未知雜質(zhì)檢出率低，方法有缺陷。故采用自擬的HPLC法測(cè)定。色譜柱為Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5)-乙腈(93∶7)混合溶液為流動(dòng)相A，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5)-乙腈(60∶40)混合溶液為流動(dòng)相B，流速為1.0 ml/min，梯度洗脫(0～20 min,100%A;20～40 min,100%B;40～45 min,100%B;45～55 min,100%A)；檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為20 μl。

測(cè)定結(jié)果表明，A公司有1批氨曲南原料的最大單個(gè)未知雜質(zhì)超過(guò)0.1%，測(cè)定結(jié)果為0.18%；B公司有2批新生產(chǎn)的氨曲南原料以及2批近效期氨曲南原料的最大單個(gè)未知雜質(zhì)超過(guò)0.1%，測(cè)定結(jié)果分別為0.53%、0.50%、0.53%、0.47%，均超過(guò)《美國(guó)藥典》40版氨曲南單個(gè)未知雜質(zhì)≤0.1%的規(guī)定。C公司有2批近效期注射用氨曲南最大單個(gè)未知雜質(zhì)超過(guò)0.2%，測(cè)定結(jié)果分別為0.29%和0.21%；B廠有6批注射用氨曲南以及2批近效期注射用氨曲南的最大單個(gè)未知雜質(zhì)超過(guò)0.2%，測(cè)定結(jié)果分別為0.28%、0.26%、0.25%、0.26%、0.25%、0.25%、0.53%、0.41%。

2.4.2 溶液的澄清度及倒置加速試驗(yàn) 注射用氨曲南樣品倒置加速試驗(yàn)條件：倒置于60 ℃恒溫條件下，靜置5 d后，按溶液的澄清度測(cè)定方法[4]用濁度儀測(cè)定。比較倒置前后溶液的澄清度變化情況。未經(jīng)倒置加速的樣品溶液的澄清度均低于1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液，均符合規(guī)定。60 ℃倒置加速5 d后，濁度有增加的趨勢(shì)，有2批超過(guò)了1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液。倒置前樣品濁度為(1.22±0.39) NTU，倒置后樣品濁度為(1.72±0.58) NTU，倒置后樣品濁度明顯高于倒置前。同時(shí)將倒置加速前后樣品的濁度進(jìn)行配對(duì)秩和檢驗(yàn)，其結(jié)果有顯著性差異(P<0.05)。

2.4.3 殘留溶劑 采用氣相色譜(GC)法測(cè)定殘留溶劑。根據(jù)合成工藝，采用頂空法測(cè)定甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷5種溶劑，色譜柱為DB-624型毛細(xì)管色譜柱，檢測(cè)器類型為火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為230 ℃，進(jìn)樣口溫度為200 ℃，載氣為氮?dú)?，流?.0 ml/min，程序升溫：初始溫度40 ℃，維持時(shí)間為10 min，升溫速率30 ℃，終止溫度200 ℃，維持時(shí)間為3 min；頂空進(jìn)樣：平衡溫度為80 ℃，平衡時(shí)間為30 min，傳輸管溫度為110 ℃。

二甲亞砜采用直接進(jìn)樣測(cè)定，色譜柱為DB-624型毛細(xì)管色譜柱，檢測(cè)器類型為火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為250 ℃，進(jìn)樣口溫度200 ℃，載氣為氮?dú)猓魉?.0 ml/min，程序升溫：初始溫度50 ℃，維持時(shí)間為5 min，升溫速率1為20 ℃，終止溫度180 ℃，維持時(shí)間為5 min，升溫速率2為30 ℃，終止溫度為230 ℃，維持時(shí)間為3 min。

結(jié)果A公司的氨曲南3批原料藥中均檢出丙酮和二甲亞砜殘留，B公司的注射用氨曲南中檢出了微量甲醇。

2.4.4 重金屬 采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定砷、鉛、汞、鎘、銅、鋇和鎳。樣品加硝酸后微波消解，用水定容。儀器選擇干擾較小的氦碰撞模式，等離子氣流量15.0 L/min，蠕動(dòng)泵10 r/min，霧化室溫度2 ℃，輔助氣體和載氣流量均為0.8 L/min，氦氣流量5 ml/min，射頻功率1550 W，跳峰掃描100次，采樣深度8 mm，重復(fù)3次，積分時(shí)間0.20 s。樣品中砷、鉛、汞、鎘等1類危害元素[5]和銅、鋇、鎳等重金屬元素均低于各元素檢出限，均未檢出。

3 討 論

本次評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)采用法定檢驗(yàn)結(jié)合探索性研究模式，對(duì)國(guó)產(chǎn)氨曲南及注射用氨曲南制劑從質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)到質(zhì)量的現(xiàn)狀、質(zhì)量影響因素各方面進(jìn)行了較全面的分析和評(píng)價(jià)。由法定檢驗(yàn)可知，42批樣品按現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，合格率為100%，可以認(rèn)為目前上市的氨曲南及注射用氨曲南的生產(chǎn)工藝較成熟，總體質(zhì)量情況較好，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基本可行。

探索性研究發(fā)現(xiàn)如下問(wèn)題。國(guó)家藥品監(jiān)督管理局頒布的“化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則”規(guī)定，原料藥最大日劑量不超過(guò)2 g時(shí)，雜質(zhì)的鑒定限度為0.10%或1.0 mg(取最小值)，質(zhì)控限度為0.15%或1.0 mg(取最小值)；制劑最大日劑量為10 mg～2 g時(shí)，雜質(zhì)的鑒定限度為0.2%或2 mg(取最小值)，最大日劑量為100 mg～2 g時(shí)，雜質(zhì)的質(zhì)控限度為0.2%或2 mg(取最小值)。A、B和C公司部分樣品最大單個(gè)未知雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果均超過(guò)該指導(dǎo)原則的限度值，而且原研制劑最大單個(gè)未知雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果為0.08%。因此，建議氨曲南藥品生產(chǎn)企業(yè)改進(jìn)合成以及生產(chǎn)工藝，降低未知雜質(zhì)的含量，提高產(chǎn)品質(zhì)量，與原研制劑的雜質(zhì)水平保持一致或更優(yōu)。

倒置加速后的注射用氨曲南樣品濁度明顯高于未倒置的樣品，說(shuō)明在倒置加速過(guò)程中，主藥與膠塞發(fā)生相互作用造成了澄清度變差。因此，各生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)主藥與膠塞的相容性研究，使用覆膜膠塞或不與主藥發(fā)生相互作用的膠塞進(jìn)行包裝，確保臨床使用藥品的安全性。

A公司在氨曲南的合成路線中使用了丙酮和二甲亞砜，且在其3批原料藥中均檢出丙酮和二甲亞砜殘留。這兩種溶劑屬于《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部通則規(guī)定需要控制的第三類溶劑，有一定的風(fēng)險(xiǎn)隱患。雖然3批樣品測(cè)得的殘留量遠(yuǎn)低于規(guī)定限度，但企業(yè)還是應(yīng)加強(qiáng)丙酮和二甲亞砜殘留量的研究和考察，建立定期監(jiān)測(cè)制度，并進(jìn)行長(zhǎng)期數(shù)據(jù)收集，盡量避免溶劑殘留帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。B公司生產(chǎn)的注射用氨曲南中檢出了微量甲醇，提示企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)生產(chǎn)過(guò)程控制，查找原因，盡量避免不明有機(jī)溶劑的引入。